植物油中共轭亚油酸紫外分光光度检测方法的研究_左文杰

波长 λ/nm
图 3 不同浓度下大豆油样品的紫外吸收图谱
2.2 添加共轭亚油酸对植物油紫外吸收的影响
选取菜籽油、共轭亚油酸标准品与加入 0.3 g 的共轭
亚油酸标准品的菜籽油为比对样品，进行紫外扫描。 如图
4 所示。
从图 4 中可以看出，加入共轭亚油酸标准品后，在
203 nm 和 234 nm（共轭亚油酸的特征吸收峰 ［8］）处 有 2 个
4.0
10 mg/mL
3.5
5 mg/mL
3.0
3.3 mg/mL
2 mg/mL
2.5
1 mg/mL
0.5 mg/mL
2.0
0.2 mg/mL
1.5
0.1 mg/mL
吸 光 度/A
1.0
0.5
0.0
190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340
1.4
50 μg/mL
1.2
60 μg/mL
1.0
80 μg/mL
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 波长 λ/nm
图 6 大豆油中不同浓度 CLA 的 UV 曲线
吸 光 度/A
3.4
3.2 3.0
2 μg/mL
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2 200
250
300
波长 λ/nm
图 4 菜籽油中加入共轭亚油酸后的紫外扫描图
2.3 共轭亚油酸线性范围
为 了 进 一 步 实 现 对 共 轭 亚 油 酸 的 定 量 分 析 ，按 照1.3.4
配制了 9 个不同浓度的标准液 ，在 200~320 nm 范 围 内 进
行紫外扫描，如图 5~图 8 所示。
吸 光 度/A
3.2
3.0
2 μg/mL
2.8
5 μg/mL
2.6 2.4
10 μg/mL
2.2
20 μg/mL
2.0
30 μg/mL
1.8 1.6
40 μg/mL
1.4
50 μg/mL
1.2
60 μg/mL
1.0
0.8
80 μg/mL
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
［摘要］以玉米油、菜籽油、大豆油为主要研究对象，建立了用紫外分光光度法检测植物油中共轭亚油酸含量的方法，其线 性范围为 2~30 μg/mL，检测限为 2 μg/mL。该方法简单、快捷，可对食用植物油中共轭亚油酸的快速检测提供有益参考。 ［关键词］共轭亚油酸；紫外分光光度法；植物油
共 轭 亚 油 酸 （conjugated linoleic acid，CLA） 是 一 系 列 在碳 8，10-、9，11-、10，12-、和 11，13-位具有共轭双键的 亚油酸的位置和几何异构体总称，具有以下 4 种不同的 构象：顺，顺（c，c）；反，反（t，t）；反，顺（t，c）；顺 ，反（c，t） ［1］。 在 20 世纪 80 年代前期，Praiza 等 首 ［2-3］ 先在油炸汉堡中发 现共轭亚油酸 。 天然共轭亚油酸主要以 cis-9，trans-11CLA 为 主 ，占 75%~90% ［4］，CLA 具 有 许 多 重 要 的 生 理 功 能，如：抗癌、抗动脉粥样硬化；调控代谢，增加肌肉，减少 脂肪；增强机体免疫力，减缓免疫系统副反应；调节血糖， 抗糖尿病；促进动物生长发育等功效 。 ［5-6］ 共轭亚油酸主要 存在于反刍动物和牛奶制品中［7］，并不存在于天然植 物 油 中。 但随着共轭亚油酸重大生理功能的发现以及人们对 健康的重视，各种添加了共轭亚油酸的食品及食用植物 油 不 断 上 市 ，这 就 迫切 需 要 一 种 快 速 有 效 的 检 测 方 法 ，来 检测各种食品中的共轭亚油酸。 目前，我国添加了共轭 亚油酸的植物油品种较少，其检测方法主要有气相色谱 法、液相色谱法以及气质联用法，前处理较为复杂，检测 耗时较长。 本文探索用紫外分光光度法检测植物油中共 轭亚油酸的方法条件，建立一种植物油中共轭亚油酸的 快速检测方法。
2.8
5 μg/mL
2.6
10 μg/mL
2.4 2.2
20 μg/mL
2.0
30 μg/mL
1.8
40 μg/mL
1.6 1.4
50 μg/mL
1.2
60 μg/mL
1.0
80 μg/mL
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300
波长 λ/nm
图 2 不同浓度下菜籽油样品的紫外吸收图谱
4.0
10 mg/mL
5 mg/mL
3.5
3.3 mg/mL
3.0
2 mg/mL
1 mg/mL
2.5
0.5 mg/mL
2.0
0.2 mg/mL
0.1 mg/mL
1.5
吸 光 度/A
1.0
0.5
0.0
190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 波长 λ/nm
图 5 菜籽油中不同浓度 CLA 的 UV 曲线
吸 光 度/A
3.2
3.0
2 μg/mL
2.8
5 μg/mL
2.6 2.4
10 μg/mL
2.2
20 μg/mL
2.0
30 μg/mL
1.8 1.6
40 μg/mL
分别取共轭亚油酸标准品 0.02、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6、0.8、1.0 g 添加到配制好的菜籽油、玉米油、大豆油 样品贮备液中 ，用正己烷定容稀释 100倍 ，在 200~320 nm 范围内进行紫外扫描，测定紫外吸光值。 1.3.5 油脂样品中共轭亚油酸含量的测定
准确称取 1.0 g （精确到 0.0001 g） 共轭亚油酸标准品 于 100 mL 的 容 量 瓶 中 ，用 正 己 烷 定 容 ；分 别 取 标 准 液 稀 释至 2、5、10、20、30、40、50 μg/mL，在 200~300 nm 范围内
收稿日期：2012-06-25 作者简介：左 文 杰 ，男 ，硕 士 ，助 理 工 程 师 ，研 究 方 向 为 粮 油 检 测 。
明显的吸收峰，相比加入之前，2 个吸收峰都有所增大，但
两峰分离度较高，在此浓度下，可以通过紫外扫描将它们
很好的区分开。 大豆油、玉米油中的结果相似。
18
0.1 mg/mL 菜籽油
0.1 mg/mL 共轭亚油酸
2.6
0.1 mg/L 菜籽油+共轭亚油酸
2.4
2.2
2.0
1.8
吸 光 度/A
1.6
1.4
3.0
2 mg/mL
1 mg/mL
2.5
0.5 mg/mL
0.2 mg/mL
2.0
0.1 mg/mL
1.5
吸 光 度/A
1.0
0.5
0.0
190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340
波长 λ/nm 图 1 不同浓度下玉米油样品的紫外吸收图谱
17
第 ３７ 卷 ２０１２ 年第 ４ 期
左文杰等：植物油中共轭亚油酸紫外分光光度检测方法的研究
处有一个尖而窄的吸收峰，说明此时油样中的非共轭亚 油酸与其他成分的相互作用力已大大减弱，油样中的其 他成分对非共轭亚油酸紫外吸收峰的影响可以忽略。
4.0
10 mg/mL
3.5
5 mg/mL
3.3 mg/mL
添加共轭亚油酸标准品到菜籽油、大豆油、玉米油中， 配制含 CLA 浓度分别为 5、10、20 μg/mL 的菜籽油、 大豆 油、玉米油待测样品，在 234 nm 处测定紫外吸收值。
2 结果与讨论
2.1 不同浓度下植物油（原样）紫外吸收曲线的分析 按试验方法 1.3.3，分别测定不同浓度的玉米油、菜籽
油、大豆油样品溶液在 200~340 nm 范围内进行紫外扫描。 从图 1~图 3 中 可 以 看 到 ，当 浓 度 为 10 mg/mL 时 ，玉
米油、大豆油、菜籽油均在 200~250 nm 范围内有 1 个大而 宽的吸收峰，在此浓度时，各种不饱和脂肪酸甘油酯以及 游离脂肪酸含量较高， 相互作用力较强， 从而使原本在 200~205 nm 的 非 共 轭 亚 油 酸的 特 征 吸 收 峰 ［7］向 长 波 方 向 位移， 并使其与油样中其他成分产生的紫外吸收峰重叠 加合，产生了 1 个大而宽的吸收峰带。 样品浓度逐渐降低 时，各 油 样 的 紫 外 吸 收 峰 明显 前 移 ，且 吸 收 峰 也 由 宽 变 窄 ， 非共轭亚油酸的特征吸收峰逐渐与其他杂峰分离。 当样 品浓度均为 0.1 mg/mL 时，紫外吸收曲线只在 200~205 nm
3.0 大豆油
2.5 菜籽油 玉米油
2.0 共轭亚油酸
1.5
吸 光 度/A
1.0
0.5
0.0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 浓 度 /μg·mL-1
图 9 不同条件下共轭亚油酸的回归曲线
从图 9 中可以看出，单纯的共轭亚油酸标准液的线
性范 围 为 2 ~40 μg/mL，而 菜 籽 油 、大 豆 油、玉 米 油 中 添 加
取 1.0 g 玉 米 油 、菜 籽 油 、大 豆 油 样品 于 100 mL 的 容 量瓶中，用正己烷定容，作为样品贮备液；再用正己烷分 别 稀 释 至 0.1、0.2、0.5、1、2、3.3、5、10 mg/mL，以 正 己 烷 为 参 比 溶 液 ，在 200~340 nm 范 围 内 进 行 紫 外 扫 描 ，测 定 紫 外吸光值。 1.3.4 待测样品的添加处理分析
波长 λ/nm
图 7 玉米油不同浓度 CLA 的 UV 曲线索
左文杰等：植物油中共轭亚油酸紫外分光光度检测方法的研究
3.5
吸 光 度/A
3.0
2.5
2.0
菜籽油
1.5
大豆油
1.0
玉米油
0.5
0.0
0 20 40 60 80 100 浓 度 /μg·mL-1
图 8 植物油 CLA 浓度与其吸光度的关系曲线 通过图 5~图 7 可以看到，无论是菜籽油、大豆油，还 是 玉 米油 ，只 有 当 添 加 的 共 轭 亚 油 酸 浓 度 小 于 80 μg/mL 时，才可以与油样中的非共轭亚油酸较好的区分开。 从图 8 中可以得出，当油样中添加的共轭亚油酸浓 度>30 μg/mL 时 ，随 着 浓 度 的 增 大 ，其 紫 外 吸 收 值 变 化 并 不 显 著 ，不成 线 性 关 系 ；当 浓 度<2 μg/mL 时 ，其 紫 外 吸 收 较弱，在 234 nm 处的吸收值较低 ，准确度不高 。 因而可以 得出线性范围在 2~30 μg/mL 内。 2.4 不同条件下的回归曲线分析 按 照 1.3.2 取 共 轭 亚 油 酸 浓 度 分 别 为 2、5、10、20、30 μg/mL 的菜籽油、大豆油、玉米油样品，做回归曲线 分析 ， 与共轭亚油酸标准品的回归曲线作 （如 1.3.1 方法配制标 准液）比较，如图 9 所示。
1 材料和方法
1.1 材料 市 售 大 豆 油 （一 级 ）：湖 北 中 昌 植 物 油 有 限 公 司 ；玉 米
油 （一 级 ）：江 西 绿 世 界 油 脂 有 限 公 司 ； 菜 籽 油 （ 一 级 ）： 武 汉康源油脂有限公司。 1.2 仪器与试剂
TU－1810 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ：北 京 普 析 仪 器 有 限公 司 ；电 子 分 析 天 平 ；共 轭 亚 油 酸 标 准 品 （纯 度 99%）： 国家标准物质中心；正己烷（分析纯）。 1.3 试验方法 1.3.1 共轭亚油酸标准曲线的测定
第 37 卷第 4 期 2012 年 8 月
GRAIN SCIENCE AND TECHNOLOGY AND ECONOMY
Vol.37，No.4 第 ３７ 卷 ２０１２A年 ug第 .20４12期
植物油中共轭亚油酸紫外分光光度检测方法的研究
左文杰，刘 波，叶六一，闵 光，彭昊博
（武汉市粮油食品中心检验站，湖北 武汉 430021）
进行紫外扫描，测定 7 个不同浓度的紫外吸光值。 1.3.2 植物油中共轭亚油酸标准曲线的测定
分 别 取 共 轭 亚 油 酸 标 准 品 0.3、0.2、0.1、0.05、0.02 g， 添加到 1.0 g （以上均精 确 到 0.0001 g）的玉 米 油 、菜 籽 油 、 大豆油样品中，用正己烷定容稀释，以未添加共轭亚油酸 的 玉米 油 、菜 籽 油 、大 豆 油 样 品 作 为 对 照 ，在 200~320 nm 范围内进行紫外扫描。 1.3.3 待测样品的原样分析