实用组织化学技术-常规病理组织学和组织化学(研究生)

组织化学技术切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。

一、染色的目的任何冰冻切片、石蜡切片等如果不经过染色，在显微镜下只能看到细胞及其它组织成分的轮廓，即使由于组织内部各种物质的折射指数不同，从光线的明暗上能观察到一些组织结构，但也是极其简单有限的，远不能满足观察和借以诊断的目的。

染色的目的，是将染料配制成溶液，将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，使组织或细胞及其他异常的成分染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，便于在光学显微镜下进行观察。

因此，染色在组织形态学，特别是病理形态诊断、科研和教学工作中，都具有非常重要的意义和实用价值。

二、染色的原理染色就是染色剂和组织细胞相结合的过程。

有关两者结合的原理，有不同的学说，一般认为其过程是化学反应和物理现象。

（一）染色的化学反应在组织细胞内，一般有酸性和碱性区别，酸性物质部分能与溶液中的阳离子结合，碱性物质部分能与溶液中的阴离子结合。

在细胞核中，特别是核内染色质，一般有酸性物质组成（其中主要有核酸），故与碱性染料的亲和力很强，易于染色，以氧化苏木素代表的碱性染料中有染色作用的是阳离子。

在细胞浆中则由碱性物质组成，所以胞浆与酸性染料有较强的亲和力，以伊红染料为代表的酸性染料中有染色作用的是阴离子。

(二) 染色的物理作用1. 毛细作用及渗透作用组织有许多小孔，染料因渗透作用进入组织，它与组织没有牢固的结合，所以是单纯的物理作用，不能称为直接染色作用。

因所谓染色必需是染料留贮于组织内与组织有较稳固的结合。

2. 吸收或溶液作用组织吸收染料，作牢固的结合，组织的着色与溶液颜色相同，但不是和干燥染料的颜色相同。

如复红溶液为红色，所染组织也为红色，而干燥的复红带绿色。

3. 吸附作用吸附作用是固体物理的特性，它能从周围溶液中吸住一些细小的物质微粒，这些微粒可能是溶于溶液中的化合物，也可能是只在溶液中单独存在的离子，如染液中分散的色素粒子进入被染物质的间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色。

临床病理学特殊技术第1节组织与细胞化学（histochemistry and cytochemistry）【概念】运用物理和化学的技术方法显示组织细胞结构中的各种化学成分，并对这些化学物质进行定性、定位、定量，从而分析研究生物在生理或病理状态下细胞组织的代谢、机能及形态变化规律。

细胞化学是研究细胞的化学成分及其在细胞活动中的变化和定位的学科。

对细胞中的不同组分进行区别着色是细胞化学中最基础的工作。

组织化学是指利用细胞或组织中的某些化学成分生成有色沉淀物，对细胞组织中的这些化学成分进行定性、定位和定量分析的特殊技术方法。

细胞化学和组织化学的发展是分不开的，都是建立在细胞学、组织学以及生物化学的基础上。

【基本原理】用于组织与细胞化学研究的染料可以是碱性的也可以是酸性的。

酸性染料的生色基团是硝基和醌基；碱性染料的生色基团，包括着偶氮基吲胺基。

染色的原理是基于在酸性染料中具有染色作用的阴离子和细胞内的碱性物质相结合，而碱性染料中的阳离子和细胞内的酸性物质相结合，所以酸性的细胞成分被碱性染料所染色，而碱性的细胞组分则被酸性染料染色。

组织与细胞中的化学成分和其相应的底物呈一系列的化学反应，形成于显微镜下可见到的反应产物呈色。

常见的细胞化学物质成分染色方法见表2-1，组织化学物质成分染色方法见表2-2。

表2-1 细胞化学物质成分的鉴定* 黏多糖类是蛋白多糖分子中的糖链部分，是黏液（人体的粘膜上皮分泌出来的湿滑液体）的主要化学成分。

由于含酸基的不同，而又分为中性黏多糖（中性黏液）、酸性黏多糖（酸性黏液）和混合性黏多糖（混合性黏液）。

多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子机构复杂且庞大的糖类物质。

表2-2 组织化学物质成分的鉴定色素分为人为色素和自生性色素。

人为色素是由于固定剂与组织中某些成分相作用而产生，例如福尔马林色素等。

在某些病理情况下，细胞代谢所产生的沉着的色素，如脂褐素、黑色素、含铁血黄素、嗜银颗粒及组织内的微量金属离子等，需要一些特殊染色加以证明（表2-3）。

组织化学技术组织化学技术篇一：组织化学组织与细胞化学一、填空题：体视学里是主要的填空题。

二、名词解释1、异染现象染料离子以某种方式使它对所吸收的波长有所改变，因而观察到被染的组织显示与该染料本身颜色不一样，此现象为异染现象。

2、诱发荧光和自发荧光诱发荧光：自发荧光：由于紫外线的照射，标本中的荧光物质吸收光能后，呈现出不同颜色的荧光，这是自发荧光。

3、原位杂交组织化学和免疫组织化学原位杂交组织化学（In situ hybridization histochemistry，ISHH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统通过组织化学或免疫组织化学在核酸原有的位置进行细胞内定位。

免疫组织化学（immunohistochemistry）: 将化学反应中呈色反应与免疫学抗原抗体反应结合起来，用标记的特异性抗体（或抗原）对细胞及组织内抗原（或抗体）的分布进行组织或细胞内原位检测的一门技术。

4、点计数（P116）估计面积和面积分数的方法，称为点计数。

5、形态计量术形态计量术(morphometry)是运用数学和统计学原理对组织和细胞内各种成分的数量、体积、表面积等的相对值与绝对值的测量,其中以研究组织和细胞内某种结构的三维立体结构的研究称体视学(sterology)。

6、DAB系统7、各向同性和各向异性指物体的物理、化学等方面的性质不会因方向的不同而有所变化的特性，即某一物体在不同的方向所测得的性能数值完全相同。

材料在各方向的力学和物理性能呈现差异的特性。

8、饲养细胞在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。

9、完全抗原、半抗原和不完全抗原完全抗原:兼有免疫原性和反应原性的物质称完全抗原。

大多数蛋白质是良好的完全抗原。

半抗原:只有反应原性而无免疫原性的物质称半抗原或不完全抗原，绝大多数低分子量的多糖和所有的类脂均属半抗原。

临床病理学技术知识点一、知识概述《临床病理学技术》①基本定义：临床病理学技术呢，简单说就是在临床环境下，对病理样本（像组织、细胞这些东西）进行处理和检查的技术。

比如说从病人身上取了一块组织，怎么把它处理好，然后能看到里面有啥毛病，这就得用到这些技术。

②重要程度：在医学这个大领域里，特别是在诊断疾病方面，临床病理学技术可太重要了。

它就像是医生的侦察兵，能让医生清楚知道病人身体到底出了啥问题，是炎症、是肿瘤，还是其他的病。

要是没有这些技术，很多病就只能瞎猜，没法准确诊断来对症下药。

③前置知识：得先有点基础的解剖学知识，不然都不知道身体各个器官组织在哪长着，怎么取样本呢。

还有生理学知识也需要一些，得了解正常的身体机能啥样的，这样才能看出病理样本和正常的差别在哪。

另外，基本的化学知识也不能少，因为在处理样本的时候会用到好多化学试剂和化学反应。

④应用价值：在医院里，得了各种病的病人都要依靠这个技术。

例如有个病人肚子痛，怀疑是肠道有毛病，医生取了肠道组织，通过临床病理学技术进行切片、染色，在显微镜下就能看到细胞有没有异常，是感染了病菌啊，还是发生了恶变之类的。

这样就能给到准确的治疗方案，不浪费病人的时间和医疗资源。

二、知识体系①知识图谱：在整个医学学科里，临床病理学技术处于诊断环节的核心位置。

它联系着基础医学知识，像解剖学、生理学、病理学基础理论这些，同时为临床的各种学科比如内科、外科、肿瘤科等提供诊断依据。

②关联知识：和解剖学关联很大，知道人体结构才能准确取病理样本。

和病理学理论也是相辅相成的，病理学理论告诉咱们疾病的原理，而这个技术就能从实际样本里去验证这些理论。

还有和影像学也有关，有时候影像学先发现一个肿块之类的，然后临床病理学技术就去进一步确定这个肿块到底是啥。

③重难点分析：- 掌握难度：- 就我感觉，这个知识点的难点在样本处理部分。

比如用福尔马林固定样本，浓度啊，固定时间长了短了都会有影响。

样本切片也挺难的，切得薄厚不均匀就没法好好在显微镜下看。

第一章常规组织病理技术病理学是一门研究疾病的病因、发病机制、病理改变（包括代谢、机能和形态结构的改变）和转归的医学基础学科，重点通过对疾病过程中各个器官、组织形态学变化的观察，为临床解决疾病的病理诊断问题。

病理学实验研究的方法多种多样，尤其是近十多年来分子生物学技术以及其它高、新技术在病理领域的应用，进一步拓宽了病理工作者的视野，丰富了病理研究工作的内容，也提高了疾病诊断的准确性。

但是，无论多少新技术、新方法涌现，病理工作最基本，也是最重要的技术仍然是常规组织病理技术，离开它，一切病理诊断或研究都将无从谈起。

本章将简要介绍常规的组织病理技术，包括组织（细胞）取材、固定、包埋、切片、苏木素-伊红染色以及常用的特殊染色方法。

第一节组织与细胞的取材病理标本检查包括大体和显微镜下观察两个方面，一张好的切片与组织取材、固定、染色都有密切的关系。

正确的取材、合适的固定和良好的染色是优质病理工作的基础。

目前，由于免疫组织化学方法已普遍应用于大多数医院病理科和研究单位，而该方法所需的材料，不仅要求组织细胞的形态完整保存，而且要最大程度地保存组织或细胞成分的抗原性。

在保证抗原性不受损伤的同时，还要求抗原不弥散，以保证其准确定位。

这就对组织的取材和固定提出了更高的要求。

任何固定不及时或处理不当的标本，都可能导致产生假阴性或假阳性结果，影响病理诊断的准确性。

一、组织取材组织标本主要取之于活检标本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解剖标本等。

组织取材的一般原则是：①组织块的厚度为0.2~0.3cm；面积1~1.5cm2，最多不超过2cm2，太大、太厚的组织块常常固定不好；对于冷冻切片，取材组织块可略厚（0.3~0.4cm）；用于免疫组织化学染色的组织块，以1cm×lcm×0.2cm 为好，不要太大，以免浪费试剂；②对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成细条，较长时可将其缠绕成同心圆状；③骨组织需先经过脱钙处理；④新鲜组织若需保存，应将所取组织用锡箔纸包好，放入液氮速冻，然后置于-70℃冰箱中。

组织学技术（供动物学、发育生物学硕士研究生用）参考书目1．杜卓民1982 实用组织学技术人民卫生出版社2．芮菊生等1980 组织切片技术人民教育出版社3．郑国昌1979 生物显微技术人民教育出版社组织学技术组织学技术是高等院校生物学、医学、农林院校以及科研单位的一项最基本的实验室技术和工作手段。

无论在教学还是在科研工作中，凡是对人体或生物体进行微细结构观察时，大多数需要依靠组织学技术来完成。

随着科学技术的不断进步，组织学技术在不断的发展，使得组织学的研究方法很多。

目前，组织学的研究方法主要包括一般光镜技术、组织细胞化学技术、免疫细胞化学技术、放射自显影技术、电镜技术和组织培养技术等六大类。

本课程计划以同学们的实际操作为主，主要掌握一般光镜技术中的石蜡切片技术。

第一章实验室基本设备及常用试剂一、基本设备组织学实验室的常用设备主要有观察组织标本用的显微镜及制作标本用的必要设备和工具。

（一）显微镜种类很多，功能也各不相同。

用于组织切片观察的主要是透射光学显微镜。

该镜所观察的放大倍数为物镜放大率和目镜放大率之积。

为显示观察到的材料的大小，常需要在目镜内安装目镜测微尺。

目镜测微尺为一块圆形玻璃片，普通用测量长度的标尺为直线式，一般长5mm，分成1个大格，每1大格又分成10个小格，共50小格。

目镜测微尺安装在目镜的光阑上，有刻度的一面朝下。

目镜测微尺每1小格所代表的实际长度（10×或40×）要用镜台测微尺进行标定。

参考郑国昌《生物显微技术》P185-189 。

（二）切片机切片机一般有三种类型，即旋转式、滑动式、冰冻式。

这三种切片机均具有三种主要部件：①固定切片刀的刀架。

②夹持组织片的夹具。

③推动组织夹具的微动调节器。

滑动切片机多用于火棉胶切片，故又称火棉胶切片机。

它常用于制作大块标本、囊状器官和易于塌陷的组织切片。

冰冻切片机是将组织切片承托台改换成急速冷冻装置（约-20~-30℃），这种急速冷冻装置可以是液态二氧化碳，也可以用半导体制冷装置。