实验一 普通光学显微镜的使用与生物绘图
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实验一普通光学显微镜的使用与生物绘图
【目的要求】
1. 了解显微镜的构造和各部分的性能,学习并掌握正确的使用技术和保养措施;
2. 学会制作临时装片、徒手切片的方法。
3.学会绘制生物图。
【材料和用品】
显微镜、微藻培养液
【实验内容与方法】
(一)普通光学显微镜的基本构造、使用方法及保护
1、显微镜的基本结构
显微镜构造很复杂,种类很多,但基本结构是由机械和光学两大部分构成,现分述如下:1.1 机械部分它是为光学部分服务的部件,包括以下六部分:
(1) 镜座:显微镜最下面呈马蹄形或圆形的部分,起稳定和支持显微镜作用。
(2) 镜柱:直立于镜座上的短柱,支持显微镜的其它部分。
(3) 镜臂:弯曲成马蹄形的部分,便于手持,下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关
节,可使镜臂倾斜,便于观察。
(4) 载物台:自镜臂下端向前伸出,放置标本用的平台,其中央有一个园孔,叫通光孔。台
上有一移动器(老式的左右各有一个压片夹),用以固定和移动标本。
(5) 镜筒:和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管,可适当抽长,一般
长度是160-170mm。镜筒上端装有目镜,下端有一个可转动的园盘,叫物镜转
换器(或叫物镜旋转盘),其上装有2-4 个物镜。
(6) 调焦器:为镜壁上两种可转动的螺旋,一大一小,能使镜筒上下移动,调节焦距。大的
叫粗调焦器,升降镜筒较快,用于低倍镜对焦;小的叫细调焦器,升降镜筒较
慢。
1.2 光学部分由接目镜、接物镜、反光镜、聚光器等四部件组成。
(1) 接目镜:装于镜筒上方,由两组透镜构成,接目镜的作用是把接物镜所形成的倒立实像
再放大成为一个虚像。接目镜上刻有5×,8×,10×,15×,25×等符号,表示放大倍数。
我们所观察到的标本的物像,其放大倍数是接物镜和接目镜放大倍数的乘积。如接物镜是10×,接目镜是8×,其物像的放大倍数是10×8=80 倍。可在接目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发,做为指针,用以指示要观察的材料。
(2) 接物镜:装在镜筒下端物镜转换器的孔中,一般的显微镜有2-4 个接物镜镜头,每个镜
头都是由一系列的复式透镜组成的,其上也有放大倍数记号,有4×,10×,40×及100×。
4×及10×接物镜是低倍镜,40×是高倍镜,100×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌,高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构,油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。
(3) 聚光器(集光器):位于载物台(通光孔)下方,由两块或数块镜组成,它能将反光镜
反射来的光线集中以射入接物镜和接目镜,有的聚光器可升降,便于调光,集光器下有一可伸缩的园形光圈,叫虹彩光圈,可调集光器口径的大小和照射面,以调节光线强弱(有的显微镜只有遮光极而无集光器)。光线过强时,可缩小虹彩光圈。
(4) 反光镜:是显微镜观察时获得光源的装置,位于显微镜镜座中央,一面为平面镜,一面
为凹面镜。转动反光镜,可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时,光线强用平面镜,光线弱用凹面镜。
2、显微镜的使用方法
(1)取好光源(调光)
用显微镜观察标本前,先要取好光源。首先把显微镜放在自己左肩一侧台前,镜座距桌边约两寸,镜臂朝自己,镜筒朝外。用手转动物镜转换器,使低倍接物镜和镜筒成一直线,正对通光孔。用左眼从接目镜向下注视,同时用手拨动反光镜,让镜面对着光源,当看到圆形镜界(视野)呈现光亮而均匀的时候即调好光了,如视野阴暗不明,则需再调节反光镜和集光器,直到视野明亮均匀为止。
若为自带电源,则在使用前打开电源开关,逐步调节光亮度旋钮,直至亮度合适为止。(2) 观察
将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央,玻片标本两端用压片夹夹紧,再用手沿顺时针方向旋转粗调节器,把镜筒徐徐降到物镜头差不多接近玻片标本(约半厘米)为止(从侧面观察下降镜筒)。然后左眼观察,边观察边用调节器将镜筒徐徐上升(逆时针方向旋转粗调节器)直到发现物象,观察清晰为止。如果观察部分不在视野中心,可移动玻片标本到视野中心,再上下转动粗调节器至物象清晰为止。
如果要观察视野内某部分更细微的结构,则需要用高倍镜观察,首先要把观察的部分移至视野中心,然后移动物镜转换器换上高倍镜(使正对通光孔)(使用镜头转化器,不要直接扳动镜头),再用粗调节器徐徐将镜筒距离调整,至视野中出现物象,然后用细调节器调节到看清物象止。如光线太弱,可放大虹彩光圈的口径或调节光亮度旋钮。
高倍镜下观察的标本,如果放大倍数还不够,可用油镜,换用前,同样要先在高倍镜下观察,把要观察的部分放在视野的正中央。观察到清晰的物象之后,在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油,再换上油镜头,使油镜头与香柏油接触,然后由目镜观察。一边观察,一边用手稍移动细调节器(切忌用粗调节器)以看清物象。用油镜观察完毕后,转开油镜,必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油。下降镜筒,直立反光镜,使光学部件的光线不再对在一条直线上。
应当了解的是,在显微镜中观察到的物象是倒象,因此移动玻片时,应注意移动方向。如果要使物象左移动就要向右移动玻片,同样要使物象向前移动,就要向后移动玻片。
观察结束后,降下载物台,取掉载玻片,光源调至最弱后关闭电源(为防止下次打开
电源时因电流过大烧毁照明灯泡,请在关闭电源前一定将光源亮度调至最暗)。
3、显微镜的保养
(1) 取送显微镜时,必须右手握住镜臂,左手托住镜座,轻拿轻放。
(2) 显微镜的使用,一定要按实验指导写的方法和步骤,认真仔细去做,不然,容易损坏标
本和镜头,又达不到看清物象的目的。
(3) 观察标本时,一定要先用低倍镜观察,再用高倍镜,低倍镜能看清,就不必用高倍镜。
(4) 不能用硬纸擦透镜,必须用干净的擦镜纸或细软纱布,朝一个方向擦试透镜,以免损坏
镜头。
(5) 不要随便转动粗细调节器,以免机器损伤,调节失灵。
(6) 载物台要保持清洁、干净,不要让水或其他液体(酸、碱或其他化学药品等)流到台上,
以免生锈或腐蚀。
(7) 避免阳光直接照射,要防潮湿、防灰尘,经常保持镜体和镜体箱的干燥和清洁。
4、显微镜的类型
(1) 光学显微镜主要有普通光学显微镜、体视显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜、荧光
显微镜、相差显微镜等,另外按目镜筒数可分单筒(目)和双筒显微镜,按使用人数可分单人、双人和多人用显微镜等。
(2) 电子显微镜主要有扫描电子显微镜、透射电子显微镜、扫描隧道电子显微镜等。(二)微藻细胞临时装片制作及形态、结构的观察
擦净载玻片和盖玻片,即将浸洗过的玻片用纱布擦干,擦盖玻片时,应十分小心。在载玻片中央加一滴藻细胞培养液,将盖玻片压好制成标本片(盖玻片一端要先接触载玻片,然后将另一端轻轻放下,不要产生气泡),将标本片置于镜台上,先练习低倍镜的使用,然