植物组织与细胞培养定义和过程
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生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念〔狭义〕指用植物各局部组织,如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进展培养获得再分化形成再生植物。
组织培养的步骤一、培养基配制配制培养基有两种方法可以选择,一是购置培养基中所有化学药品,按照需要自己配制;二是购置商品的混合好的培养基根本成分粉剂,如MS、B5等。
自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。
就目前国内的情况看,大局部还是自己配制。
为了方便起见,现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。
1、配制几种母液〔1〕配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液,使用时再分别稀释100倍。
分别称取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl2·2H2O 44gMgSO4·7H2O 37g各自配成1L的母液。
倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。
〔2〕配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
依次称取KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025gH3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025gMnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025gZnSO4·7H2O 0.86g配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小,如果天平准确度没有到达万分之一,可先配成调整液。
分别称取CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液,然后取5ml就还有0.0025g的量。
〔3〕配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。
依次称取肌醇10g 盐酸硫胺素〔VB1〕0.01g烟酸0.05g 甘氨酸0.2g盐酸吡哆醇〔VB6〕0.05g配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。
1.植物组织培养(离体培养):是指在无菌条件下,将植物体的任何一部分,培养在人工配制的培养基上,并给予适宜的培养条件,使之发育形成完整植物体的过程。
2、植物组织培养的类型(1)根据培养基的类型分为:固体培养液体培养半液半固体培养(2)根据培养材料(外植体类型)分为:植株培养器官培养组织培养原生质体培养胚胎培养细胞培养(3)按培养过程分:初代培养继代培养生根培养3、植物组织培养的一般工作流程1.准备阶段:(1)查阅资料,制定培养方案;(2)清洗组培用器皿、工具;(3)配制所需试剂和培养基;(4)试剂、培养基与器皿、工具的灭菌。
2.外植体的选择与消毒;3.初代培养;4.继代培养;5.生根培养;6.炼苗移栽4、植物细胞的全能性概念:指植物体的每个活细胞都携带有该物种的全套遗传信息,在适宜条件下,离体细胞都具有发育为一个完整植株的潜在能力。
注意:(1)活细胞(2)离体细胞(3)细胞全能性表达的难易程度取决于细胞的分化程度5、细胞全能性的强弱表现:(1)植物细胞全能性根据细胞的性质不同由强到弱:营养生长中心>形成层>薄壁细胞>厚壁细胞(木质化细胞)>特化细胞(导管等)(2)植物细胞全能性根据所处的组织不同由强到弱:顶端分生组织>侧生分生组织>居间分生组织>薄壁组织>厚角组织>输导组织>厚壁组织6、植物组织培养中全能性表达的条件:1.无菌条件;2.离体条件;3.一定的营养物质;4.植物生长调节物质;5.适宜的外界条件。
7、胚性细胞的特点:未分化状态;细胞具有旺盛分裂能力;具有两极性8、脱分化:指在一定条件下,已分化成熟的细胞、组织或器官恢复到未分化的分生状态,并进行细胞分裂形成未分化的细胞团,如愈伤组织的形成过程。
9、愈伤组织形成的三个时期:(1)诱导期又称启动期(最难)。
(2)分裂期(3)分化期10、优良愈伤组织的特征:(1)具有旺盛的增殖能力;(2)容易散碎;(3)具有高度的胚性或再分化能力,便于植株再生;(4)经过长期的继代保存而不丧失胚性。
高中生物植物的组织培养技术知识点总结导读:我根据大家的需要整理了一份关于《高中生物植物的组织培养技术知识点总结》的内容,具体内容:植物组织培养技术是高中生物的一个重要组成部分,学生需要掌握相关知识点,下面是我给大家带来的高中生物植物的组织培养技术知识点,希望对你有帮助。
高中生物植物的组织培养技术基础知识点...植物组织培养技术是高中生物的一个重要组成部分,学生需要掌握相关知识点,下面是我给大家带来的高中生物植物的组织培养技术知识点,希望对你有帮助。
高中生物植物的组织培养技术基础知识点1、植物组织培养过程:(1)原理:植物细胞具有全能性。
(2)过程:2、用途:(1)微型繁殖微型繁殖就是用于快速繁殖优良品神的植物组织培养技术,也叫快速繁殖技术。
繁殖过程中的分裂方式是有丝分裂,亲、子代细胞内DNA不变,所以能够保证亲、子代遗传特性不变。
(2)作物脱毒作物脱毒是利用茎尖、根尖等无毒组织,进行微型繁殖,所获幼苗是无毒的。
(3)人工种子:通过组织培养技术,可把植物组织的细胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体,也叫作体细胞胚。
这种体细胞胚有于叶、根、茎分生组织的结构。
科学家把体细胞胚包埋在胶囊内形成球状结构,使其具备种子机能。
所以,人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体,可以直接播种于田间。
①制作方法:人工种子是利用植物组织培养获得胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等,然后包上人丁种皮就形成了人工种子,如图:②优点:可使在自然条件下不结实或种子昂贵的植物得以繁殖;保持亲本的优良性状,因该过程为无性繁殖;节约粮食,减少种子的使用;可以控制添加一些物质,如除草剂、农药、促进生长的激素、有益菌等。
周期短,易储存和运输,不受气候和地域的限制。
(4)细胞产物的工厂化生产:从人工培养的愈伤组织细胞中提取某种成分,如紫草素、香料等。
高中生物植物的组织培养技术重要知识点1、植物细胞的全能性(1)概念:具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整生物体的潜能。
植物组织培养的六大步骤植物组织培养是指通过体外不断培养植物细胞、组织和器官,以研究其发育过程和生物学特性,也包括人工繁殖植物和生产植物次生代谢产物。
在植物组织培养的过程中,需要进行一系列的步骤,下面将详细介绍植物组织培养的六大步骤。
第一步:选择适宜的材料植物组织培养需要选取适宜的材料作为起始材料,这通常是从植物体中选择健康、无病虫害并具有较高再生能力的组织部分,如茎、叶片、种子等。
同时,还应注意选择具有较高再生能力的植物品种或种质资源,以提高培养成功率。
第二步:消毒处理为了减少外界微生物的污染,必须对选取的材料进行消毒处理。
常用的消毒方法有酒精消毒、双氧水消毒、高温高压消毒等。
消毒后的材料在无菌操作下移到无菌培养室,准备进行下一步的操作。
第三步:组织分离和培养经过消毒处理的材料,可以通过组织分离的方法来获得组织的单个细胞或小块组织。
常用的组织分离方法有切割法、振荡法、酶解法等。
分离得到的组织或细胞可以直接进行培养,也可以在培养基中添加适当的生长调节剂,以促进组织的增殖和分化。
第四步:培养基的选择和配置培养基是植物组织培养中重要的因素之一,它为植物细胞提供养分和生长因子,同时调控其生长和分化。
培养基通常由无机盐、有机物质、糖类、维生素、生长调节剂等组成。
根据需要,培养基可以分为基础培养基和不同类型的专用培养基。
基础培养基通常为MS培养基或白培养基,而专用培养基则针对不同的组织和目的进行调配。
第五步:培养条件的调控和优化在植物组织培养的过程中,培养条件的调控和优化对细胞和组织的生长和分化起着至关重要的作用。
光照、温度、湿度、pH值以及培养物的搅拌等因素都需要合理控制和调节。
此外,根据不同类型的组织和目的,还需要添加适量的生长调节剂、抗生素和其他辅助因子。
第六步:再生植株的分离和繁殖最后一步是将培养的组织或细胞分离出来,得到再生植株。
这需要将培养物转移到含有较稀释生长因子的培养基上,以便干扰物的去除和适度延长培养时间。
植物细胞培养的基本过程和方法植物细胞培养是一种将植物细胞体外培养的技术,其主要目的是为了研究细胞的生理、生化过程以及植物的生长发育等方面的问题,也可以用于植物遗传改良、利用细胞培养生产植物品种等领域。
下面将对植物细胞培养的基本过程和方法进行详细介绍。
1.材料准备:选择合适的植物组织作为培养材料,如茎段、叶片、根尖等。
同时还需要准备一些基本的实验仪器和培养基成分。
2.细胞分离:将选取的植物组织进行表皮剥离、细胞壁酶解等操作,将细胞分离出来。
可以使用显微镜观察细胞的分离程度。
3.培养基配制:根据不同的培养目的和植物类型,调配适合的培养基。
培养基通常包括无机盐、有机物、维生素、激素等成分,用于提供细胞生长所需的养分。
4.细胞培养:将分离得到的细胞悬浮在培养基中,将其培养在恒温恒湿的培养箱中。
培养箱中的温度和光照条件可以根据植物的特性进行调节。
5.观察和保存:定期观察细胞的生长情况,包括细胞的形态、分裂情况等。
同时可以进行细胞生长速率、物质代谢等方面的研究。
对于需要保存的细胞,可以使用液氮冷冻或低温贮藏的方法保存。
1.组织培养:将植物组织培养在含有适当激素的培养基上,促使其分化和增殖。
常用的组织培养方法包括愈伤组织培养、种子发芽培养、胚培养等。
2.悬浮细胞培养:将植物细胞分散在培养基中形成悬浮细胞。
可以利用悬浮细胞进行物质代谢、遗传变异等研究。
3.离体培养:将完整的植物器官(如茎尖、叶片等)切分成适当大小的组织块,培养在含有激素的培养基上,使其分化为根、茎、叶等组织。
4.离体器官培养:将完整的植物器官(如拟南芥的花蕾、水稻的胚等)取出,培养在含有细胞分裂素和植物生长素的培养基中,经过适当的处理后,可以使其分化为新的植株。
5.基因转化:将外源基因导入植物细胞中,使其产生新的表型特征。
常用的基因转化方法包括农杆菌介导的转化、基因枪轰击法等。
总之,植物细胞培养是一种重要的实验手段和研究方法,通过培养和处理植物细胞,可以为植物生物学和生物技术研究提供重要的理论基础和实验依据。
第一个发明的培养基为White 培养基培养基中的铁盐采用Fe-EDTA 形态IAA/CTK比例高时,促进生根培养,比例低时,促进芽的分化植物组织培养:(广义)人工控制条件下培养形成再生植株(狭义)对植物组织器官产生愈伤组织进行培养直至生成完整植株。
外植体:从植物体上分离下来的用于离体培养的材料愈伤组织:在离体培养的条件下切口处形成的一团具有分生能力的不规则的细胞团分化:细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变形成各类组织和器官的过程脱分化:已分化好的细胞在人工诱导条件下恢复分生能力恢复到分生组织状态的过程再分化:由脱分化的细胞重新形成各类组织和器官的过程初代培养:诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体(形似胚,具有配的功能)过程继代培养:更换新鲜培养基繁殖同一类型材料生根培养:将芽苗转移到生根培养基上培养形成完整植株驯化培养:将组培苗经人工炼苗驯化使其能够在苗床上生长器官培养:是指对植物体各种器官的离体培养离体胚培养:指从植物种子中分离出胚组织进行离体培养的技术细胞悬浮培养:将植物的细胞或细胞小聚体悬浮在液体培养基上进行培养,使之在体外繁殖、生长、发育,并在培养过程中能保持很好的分散性的技术原生质体培养:指从细胞中分离出来的原生质体经过离体培养使其分裂、增殖进而分化成完整植株的技术。
器官发生:又名器官形成,是指植物根茎叶花果实等器官的分化与形成灭菌:用物理或化学方法,杀死物体表面或空隙间的微生物消毒:杀死,消除或抑制部分微生物,使之不发生作用褐化:接种后外植体表面产生酚、醌类棕褐色物质,细胞停止代谢生长玻璃化:离体植物嫩茎或叶呈半透明水状,生理失调不能进行光合作用指示植物:能够对病毒汁液产生迅速和特有的反应的某类转株寄主植物细胞的全能性:每个植物细胞都具有母体的全部遗传特性;每一个细胞都可以在特定条件下发育成与母体一样的植株灭菌方法:物理法:灼烧、常压蒸煮,紫外线,超声波,微波,过滤清洗。
化学法:升汞,过氧化氢,甲醛,酒精,高锰酸钾,漂白粉,次氯酸钠,抗菌素四大母液:大量元素母液,微量元素母液、铁盐母液、有机物质母液、激素母液实验室安排:贮藏室、药品室、洗涤间、消毒室、接种室,准备室、暗室、分析室、培养室离体培养基本设备:天平、酸度计、移液管、容量瓶、三角瓶添加活性炭的目的:活性炭具有吸附作用,可吸附非极性物质和色素大分子物质,茎尖初代培养使可防止褐化,促进生根,防止玻璃化苗几种维生素:VB1:有利于植株生根,促进愈伤组织产生VB6:促进根的生长VC:防止褐化VB5:影响植物代谢和胚的发育VE、VB12各培养基的特点:White:无机盐浓度低,适宜于生根培养;MS:无机盐浓度高,为比较稳定的离子平衡溶液,其养分的数量和比例比较合适,可满足植物的营养和生理需要,硝酸盐含量相对较高,广泛应用于植物器官,花药,细胞和原生质体培养,效果良好;B5:含较低的铵对不少培养物的生长有抑制作用。
3.植物细胞培养(植物组织培养)第三章植物细胞培养植物细胞培养:指对从植物器官或由愈伤组织上分离的单细胞(或⼩细胞团)进⾏培养,形成单细胞⽆性系或再⽣植株的技术。
Haberlandt(1902)⾸次尝试分离和培养植物叶⽚单细胞。
细胞培养的意义有利于进⾏细胞⽣理代谢以及各种不同物质对细胞代谢影响的研究。
进⾏细胞培养,通过单细胞的克隆化,即称为“细胞株”(cell line),可以把微⽣物遗传技术⽤于⾼等植物以进⾏农作物的改良。
细胞培养的增殖速度快,适合⼤规模悬浮培养,⽣产⼀些特有的产物,如许多种植物的次⽣代谢产物,包括各种药材的有效成分等,⽤于医药业、酶⼯业及天然⾊素⼯业,这是植物产品⼯业化⽣产的新途径。
由于植物组织培养中细胞之间在遗传和⽣理⽣化上会出现种种变异,这些细胞形成的植株也都表现出⼀定的差异。
这种差异反映在它们的植株的形态、产量、品质、抗病⾍和抗逆性等⽅⾯。
所以由单细胞培养获得的单细胞⽆性繁殖系,并对不同的细胞进⾏研究,在理论上和实践上都有很重要的意义。
细胞培养就是从⾼等植物的某个特定的器官或组织中取得单个细胞进⾏培养,并诱导其分裂增殖,由细胞分裂形成细胞团,再通过细胞分化形成芽根等器官或胚状体,长成完整植株。
第⼀节植物细胞培养⼀. 单细胞培养(⼀)单细胞分离1.机械法2.酶解法3.从愈伤组织中分离(⼆)单细胞的培养⽅法1、平板培养(细胞的⽣长周期)2、看护培养3、微室培养 4. 条件化培养⼆. 细胞悬浮培养(⼀)悬浮培养的⽅法1、分批培养(细胞的⽣长周期)2、半连续培养3、连续培养——封闭型、开放型(化学、浊度恒定式)4、固定化培养(⼆)培养细胞的同步化1. 化学⽅法(饥饿法、抑制法、有丝分裂抑制法)2. 物理⽅法(分选、低温)(三)培养基振荡⼀、单细胞培养(⼀)单细胞的分离1.机械法: Ball(1965)⾸次由花⽣成熟叶⽚利⽤机械的⽅法使叶⾁细胞得到分离的技术。
⑴⼑⽚刮: 取下叶⽚→叶⽚消毒(75%酒精或7%次氯酸钠)→撕去下表⽪(露出叶⾁细胞) →⽤解剖⼑刮下细胞→单细胞悬浮培养⑵研磨离⼼法: 取下叶⽚→叶⽚消毒(75%酒精或7%次氯酸钠) →研磨匀浆(10g叶⽚+40ml研磨介质)→匀浆过滤(细纱布) →离⼼(先低速去碎屑) →游离细胞沉降到底部(净化细胞) →植株培养或悬浮培养研磨介质: 20µmol蔗糖+ 10µmol MgCl2 + 20µmol Tris-HCl (pH7.8)机械法的特点:⑴细胞不受酶的伤害;⑵不发⽣质壁分离。
植物组织培养的完整过程植物组织培养是一种利用植物细胞和组织在无菌条件下生长和繁殖的技术。
它可以用于研究植物的生理、生化和遗传特性,也可以用于繁殖珍稀濒危植物、改良农作物品种等。
下面将介绍植物组织培养的完整过程。
1. 培养基的配制需要准备培养基。
培养基是一种含有营养物质和激素的液体或固体介质,用于供给植物细胞和组织生长所需的营养物质。
培养基的配制根据不同的植物和目的而有所不同,但一般包括无菌水、糖类、植物激素、无机盐和维生素等。
2. 材料的采集和处理接下来,需要采集植物材料,并对其进行处理。
一般情况下,选择健康的植物器官,如叶片、茎尖、芽等作为培养材料。
采集后,要进行表面消毒,以杀灭植物表面的细菌和真菌。
3. 植物材料的切割和接种将经过消毒处理的植物材料切割成小块或小段,然后将其接种到含有培养基的培养器皿中。
在接种过程中,要保持无菌操作,以防止细菌和真菌的污染。
4. 培养条件的控制接种完成后,将培养器皿置于恒温培养箱中,并控制适宜的温度、湿度和光照条件。
不同植物对于培养条件的要求有所不同,因此需要根据具体情况进行调节。
5. 营养物质的供给在培养过程中,需要定期给培养基补充新的营养物质。
一般情况下,每隔一段时间就需要更换培养基或添加新的营养物质,以保证植物细胞和组织的正常生长和分化。
6. 组织的增殖和分化经过一段时间的培养,植物组织开始进行增殖和分化。
在培养基中含有适量的激素,可以促进细胞分裂和分化。
根据所需的目的,可以通过调节培养基中激素的种类和浓度来控制组织的增殖和分化。
7. 植株的生长和繁殖当组织增殖和分化达到一定程度后,可以将其转移到含有适量营养物质的新培养基中,促进植株的生长和繁殖。
在此过程中,还需要进行适当的剪枝和调整,以控制植株的形态和生长速度。
8. 确认培养物的纯度和稳定性在植物组织培养过程中,可能会出现细菌和真菌的污染,或者不同种植物的混合。
因此,在植株生长和繁殖后,需要对培养物进行纯化和鉴定,以确保其纯度和稳定性。
植物组织培养与细胞培养开始于19世纪后半叶,当时植物细胞全能性的概念还没有完全确定,但基于对自然状态下某些植物可以通过无性繁殖产生后代的观察,人们便产生了这样一种想法即能否将植物体的一部分在适当的条件下培养成一个完整的植物体,为此许多植物科学工作者开始了培养植物组织的尝试。
最初的问题仍然是集中在植物细胞有没有全能性和如何使这种全能性表现出来。
1839年Schwann提出细胞有机体的每一个生活细胞在适宜的外部环境条件下都有独立发育的潜能。
1853年trecul利用离体的茎段和根段进行培养获得了愈伤组织,愈伤组织是指一种没有器官分化但能进行活跃分裂的细胞团,但这还不能证明细胞具有全能性,因为由愈伤组织没能再生出完整植物体。
1901年Morgan首次提出一个全能性细胞应具有发育出一个完整植株的能力。
所谓全能性细胞就是指具有完整的膜系统和细胞核的生活细胞,在适宜的条件下可通过细胞分裂与分化,再生出一个完整植株。
White 指出:如果一个给定的有机体的所有细胞都大致相同,并具有全能性,那么在有机体内所观察到的细胞分化必定是这些细胞对有机体内微环境和周围环境的反应。
就是说机体内每个细胞所以没有表现出全能性,是因为该细胞所处位置的不同,致使其某些功能被抑制(suppressed),这充分说明机体内的微环境因素在细胞分化中起了十分重要的作用。
按照现代发育生物学和细胞生物学的理论,细胞分化是受基因在时间和空间两个方面的调空,空间就是指细胞在机体内所处的位置。
不同位置的细胞,其基因的表达不同,细胞所表现出的形态结构和行为就不同。
如果将一个生活的细胞从植物体内分离出来,使之脱离开原有的环境,细胞被抑制的功能将有望得以恢复,重新表现出全能性。
基于这种认识,科学工作者便萌生出了植物组织培养的念头。
Haberlandt(1902)首次提出细胞培养的概念,也是第一个用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的人。
与rechinger不同,Haberlandt相信切块大小不会影响细胞增殖,但由于Haberlandt使用的培养液成分简单,培养的细胞是高度分化的细胞,又没采取消毒技术,所以实验失败,培养的细胞虽然存活了几个月但没能分裂。
植物组织与细胞培养:在无菌和人工控制条件下,利用合适的培养基,对植物的器官、组织、细胞或原生质体进行精细操作和培养,使其按照人们的意愿生长、增殖或再生的一门生物技术学科。
植物细胞全能性:任何具有完整细胞核的植物细胞,都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。
初代培养:芽、茎段、叶片、花器等外植体从植物体上分离下来的第一次培养的过程。
继代培养:初代培养后,将组织转移到新的培养基上进行培养的都称为继代培养。
体细胞胚:植物组织培养过程中能够产生与正常合子胚相似的结构,由体细胞发育而成,也称为胚状体。
(离体)胚的培养:在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来,置于培养基上进行离体培养的方法。
外植体:从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
驯化现象:植物组织经长期继代培养,要加入生长调节物质,其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长,这种现象称为“驯化”现象。
玻璃化苗:当植物材料不断地进行离体繁殖时,有些试管苗的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状,这种现象通常称为玻璃化,这种出现玻璃化现象的试管苗成为玻璃化苗。
愈伤组织:通常是指植物受到机械、动物或微生物等伤害后,创伤部位细胞脱分化而不断增殖形成的松散排列、无特定结构和功能的非器官化组织。
脱分化:已分化好的细胞在人工诱导条件下,恢复分生能力,回复到分生组织状态的过程。
再分化:脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程,重新形成各类组织和器官的过程。
人工种子:人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。
褐化现象:褐化是指在接种后,外植体表面开始褐化,释放出褐色物质,有时甚至会使整个培养基褐化的现象。
器官培养:以植物器官作为外植体进行离体培养,包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
原生质体培养:用酶及物理方法除去细胞壁,对所得到的原生质体进行培养的方法。
植物组织培养步骤公司内部编号:(GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-概念(广义)又叫离体培养,指从植物体分离出符合需要的组织.器官或,原生质体等,通过无菌操作,在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念(狭义)指用植物各部分组织,如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株,也指在培养过程中从各器官上产生的培养,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
组织培养的步骤一、培养基配制配制培养基有两种方法可以选择,一是购买培养基中所有化学,按照需要自己配制;二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂,如MS、B5等。
自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。
就目前国内的情况看,大部分还是自己配制。
为了方便起见,现以为例介绍配置培养基的主要过程。
1、配制几种母液(1)配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液,使用时再分别稀释100倍。
分别称取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl2·2H2O 44gMgSO4·7H2O 37g各自配成1L的母液。
倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。
(2)配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
依次称取KI Na2MoO4·2H2OH3BO3 CuSO4·5H2OMnSO4·H2O CoCl2·6H2OZnSO4·7H2O配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小,如果精确度没有达到万分之一,可先配成调整液。
分别称取CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O各自配成100ml的调整液,然后取5ml就还有的量。
(3)配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。
植物细胞培养技术植物细胞培养技术是一种以植物体中的组织和细胞作为外植体,在理想的环境条件下进行体外培养和繁殖的方法。
通过这种技术,可以实现植物的无性繁殖、基因转化以及药用植物次生代谢物质的生产等目标。
本文将重点介绍植物细胞培养技术的原理和应用。
一、植物细胞培养的原理植物细胞培养的原理基于植物组织和细胞的可再分化能力。
在适宜的培养基和环境条件下,植物细胞可以分化为新的组织和器官,或者直接分化为整个植株。
培养基中的营养物质和激素是影响和调控细胞分化的关键因素。
通过合理调配培养基的成分,可以促使细胞分化为不同类型的组织和器官。
二、植物细胞培养的步骤植物细胞培养一般分为以下几个步骤:1. 外植体的选择和预处理:外植体通常选择植物体中的组织部分,如茎尖、嫩叶等。
在培养前需要对外植体进行预处理,如消毒、切割等,以确保培养的无菌性和外植体的活力。
2. 培养基的配制:培养基的成分包括营养物质、植物激素和其他辅助物质。
根据培养的目标和所需组织类型的特点,可以针对性地调整培养基的配方。
3. 培养和分化:将外植体放置在培养基上进行培养,适时调整培养条件,如温度、光照等。
在培养过程中,外植体会发生细胞分化和组织构建。
4. 组织增殖和再生:在适当的生长阶段,可以通过分化培养基中的激素成分调节外植体的生长速度和特性,以促使细胞和组织的增殖和再生。
5. 植株移栽:当培养出足够数量和大小的植株时,可以将其移栽到土壤或其他适宜生长的介质中,实现其正常的生长和发育。
三、植物细胞培养的应用植物细胞培养技术在农业、林业、生物技术和药物生产等领域有着广泛的应用。
1. 繁殖与育种:植物细胞培养技术可以实现植物的大规模无性繁殖,从而加快植物的育种进程。
通过外植体培养和细胞分化,可以繁殖出与母体植株相同的新植株。
2. 基因转化:植物细胞培养技术可以实现外源基因在植物细胞中的转化和表达。
通过导入外源基因,可以改良植物的性状,提高农作物的产量和抗逆性,以及生产具有特殊功能的植物。
植物组织培养简介在无菌条件下,将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体(如脱壁后仍具有生活力的原生质体),培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,长成完整的植株,统称为植物组织培养。
植物组织培养的原理是细胞全能性。
也就是说每个植物细胞里都含有一整套遗传物质,只不过在特定条件下才会表达。
组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化,诱导形成愈伤组织,再在愈伤组织上形成新的丛生芽。
一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤:(1)准备阶段查阅相关文献,根据已成功培养的相近植物资料,结合实际制订出切实可行的培养方案。
然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基,并经高压灭菌或过滤除菌后备用。
(2)外植体选择与消毒选择合适的部位作为外植体,采回后经过适当的预处理,然后进行消毒处理。
将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块,或剥离出茎尖,挑出花药,接种到初代培养基上。
(3)初代培养接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养,促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织,或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。
然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体,最后发育形成再生植株。
(4)继代培养分化形成的芽、原球茎数量有限,采用适当的继代培养基经多次切割转接。
当芽苗繁殖到一定数量后,再将一部分用于壮苗生根,另一部分保存或继续扩繁。
进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。
(5)生根培养刚形成的芽苗往往比较弱小,多数无根,此时可降低细胞分裂素浓度或不加,提高生长素浓度,促进小苗生根,提高其健壮度。
(6)炼苗移栽选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗,待苗适应外部环境后,再移栽到疏松透气的基质中,注意保温、保湿、遮荫,防止病虫危害。
当组培苗完全成活并生长一定大小后,即可移向大田用于生产。