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汇总急性毒性试验设计.ppt

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急性毒性实验内容课件

急性毒性实验内容课件

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15
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16
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
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17
耳缘孔口法：
在耳缘先用针穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨 汁涂抹，使黑色渗入孔口，伤口愈合后不易脱 落，这种标号亦可标号１～９９。
适用于大、小鼠。
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• 初步了解动物致死的原因，为研究毒作用的机
制提供线索，进而为制定中毒急救治疗措施提
供依据。
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5
由急性毒性试验可得到两类毒性参数
上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；
下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
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9
实验动物的年龄与体重的关系
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
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10
急性毒性试验的动物体重
四 3 11 16 17 20
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27
随机区组设计
将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若 干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组的 动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下随机 数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将动物分 为４组，则将每一区组动物编号下的随机数字，按 顺序分别用４、３、２、１除之，根据余数大小将 动物分入各组。
7

急性毒性及其评价方法PPT课件

急性毒性及其评价方法PPT课件
大鼠为5ml/只(通常用0.5－1.0ml/100g） 家兔为10ml/2kg体重，狗不超过50ml/10kg
灌胃器具制作
取l2号普通注射针头，首先将针头尖部去 掉，然后用细锉刀把去掉部分锉平、锉光， 再用沙纸磨光滑，有条件时可在针尖处点 焊成球型。加工成有20度弧度的灌胃针， 连接1ml或5ml的注射器，即成为大小鼠的 灌胃器。
2. 经呼吸道接触
在常温、常压下为气态，或在生产过程 中 和生活过程中以蒸气、气溶胶、烟、粉 尘 状态污染生产与生活环境空气，此时就 有 可能经呼吸道吸入。
吸入接触分为两种方式 ：
静式吸入 动式吸入
3. 经皮肤染毒
➢ 研究外源化学物经皮肤吸收应当尽 量选择皮肤解剖、生理与人类较近似的动 物为对象，目前多选用家兔和豚鼠
1 LgLD0
•••
2 LgLD0+i
随机性：每只动物分散到各组去的机会是均 等的，以避免成见或系统误差
实验动物的预处理
适应性饲养一周，选择生理健康的动物 凡经口染毒时，要求试验前要对动物禁食，
以保证胃内无食物，减少食物对化学物毒性 的干扰
大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水
2. 通过观察动物中毒作用表现、毒作用 强 度和死亡情况，初步评价毒物对机体的 毒效应特征、靶器官、剂量－反应关系和对 人体产生损害的危险性
3. 为亚慢性及慢性毒性试验研究以及 其他 毒理试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据
4. 为毒作用机理研究提供线索，了解中 毒 效应的特征（包括症状，生理、生化与 组织病理损伤）
(二) 受试物及处理
受试物的接受、分样、保管、称重、配制 以及在此过程中严格的质量保证影响急性 毒性试验

《急性毒性试验》课件

《急性毒性试验》课件

食品安全性评价
急性毒性试验：评 估食品中化学物质 的急性毒性
应用：用于食品添 加剂、农药残留、 食品包装材料等安 全性评价
意义：保障食品安 全，降低食品安全 风险
法规要求：各国食 品安全法规对急性 毒性试验有明确要 求
Part Six
急性毒性试验的局 限性
实验动物和人体的差异
物种差异：实验动物与人类在生理、 生化、遗传等方面存在差异
急性毒性与其他毒性试验的整合
整合目的：提高毒性试验的准确性和效率 整合方法：采用多学科、多领域的交叉研究 整合优势：降低试验成本，提高试验质量 整合挑战：需要解决不同毒性试验之间的差异和矛盾
急性毒性试验在特殊领域的应用
药物研发：评估药物的毒 性和副作用
环境监测：评估化学物质 对环境的影响
食品安全：评估食品添加 剂的安全性
代谢差异：不同物种对同一种物质的代谢能力可能不同 生理差异：不同物种的生理结构、功能可能不同，对同一种物质的反应可 能不同
实验条件和实际条件的差异
单击添加项标题
实验条件：实验室环境，可控因素较多
单击添加项标题
实验条件：单一剂量，单一时间
单击添加项标题
实验条件：单一物种，单一环境
单击添加项标题
实验条件：短期观察，短期影响
毒性反应的机制分析
毒性反应的类型：急性、亚急性、慢性 毒性反应的机制：细胞毒性、组织毒性、器官毒性 毒性反应的影响因素：剂量、时间、个体差异 毒性反应的检测方法：生物标志物、病理学检查、生理学检查
Part Five
急性毒性试验的应 用和意义
药物研发和安全性评价
药物研发：急性 毒性试验是药物 研发过程中的重 要环节，用于评 估药物的安全性 和有效性

急性毒性试验

急性毒性试验


Sx50=0.0307 logLD50及其95%可信限 =0.6329±1.96×0.0307=0.6329±0.0602 小鼠的经口LD50为4.29g/kg，其95%可信范围 为3.74~4.93g/kg

急性毒性评价
外源化学物相对毒性分级标准
急性毒性分级（WHO）
鱼类急性毒性分级
LD50的局限性
急性毒性试验方法
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h
之内多次接触外源化学物后，在短
期内所发生的毒性效应，包括致死 效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经
口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
20只动物的完全随机分配
完全随机分配后各组所属动物号
20只动物完全随机分配的结果
20只动物的完全随机分配
动物编号 随即数字 除4后余数 1 54 2 2 83 3 3 80 0 4 53 1 5 90 2 6 75 3 7 53 1 8 78 2 9 93 1 10 47 3 11 72 0 12 09 1 13 54 2 14 66 2 15 95 3 16 44 0 17 68 0 18 67 3 19 67 3 20 86 2
由急性毒性试验可得到两类毒性参数

上限参数 是以死亡为终点的毒性，包 括绝对致死量、半数致死量、最小致 死量、最大耐受量等；

下限参数 是以非致死性急性毒作用 为终点的毒性，包括急性阈剂量和无 作用剂量等。
用小动物试验可求出外源化学物对一种或几种 实验动物的急性LD50或LC50; 用 大 动 物 试 验 可 求 出 近 似 致 死 剂 量 （approximate lethal dose, ALD）; 根据LD50 （LC50 ）值可进行急性毒性分级，以 初步评价外源化学物对机体急性毒性大小和急 性毒作用的强度。

急性毒性试验设计.

急性毒性试验设计.

量对数等差时，用下述基本公式计算LD50：
LD50 log [X m i(
1
p 0.5)]
当不含0%和100%死亡率时，用下式计算LD50：
LD50 log [X m i(
1

S x 50 i
pq
n
3 Pm Pn p )] 4
以上各式中：i—组距，即相邻两组剂量对数剂量之差
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂 量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。
观察指标

中毒症状：确定靶器官 ① 行动：不安定、多动、发声；
② 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失 调、姿态异常；
③ 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、 排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。

死亡和死亡时间 病理学检查及其他指标
LD50的计算（改良寇氏法）

当急性毒性试验的最大剂量死亡率为100%，最小剂量的 死亡率为0%；各组动物数相等；各剂量组的组距等比或剂
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为 第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。
二
三
四
一

急性毒性试验设计共39页

急性毒性试验设计共39页

谢谢！
39
急性毒性试验设计
56、死去何所道，托体同山阿。 57、春秋多佳日，登高赋新诗。 58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴 理荒秽 ，带月 荷锄归 。道狭 草木长 ，夕露 沾我衣 。衣沾 不足惜 ，但使 愿无违 。 59、相见无杂言，但道桑麻长。 60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭

▪
27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
▪
28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华

第14章 急性毒性试验


2011-3-17
6
第一节 概念和意义
二、 LD50 测定的意义及统计学原理
LD50 值的作用及意义 是药物的重要特征性参数之一， LD50 是药物的重要特征性参数之一，是药物 及一切与人类接触物质的安全标尺 及一切与人类接触物质的安全标尺，用来判 断药物对机体的毒性程度。 断药物对机体的毒性程度。 有助于计算其它与 相关的毒性参数。 有助于计算其它与LD50相关的毒性参数。
2011-3-17 16
质反应与量反应？ 质反应与量反应？
反应是指药物与机体接触后引起的生物学改变。 反应是指药物与机体接触后引起的生物学改变。 量反应属于计量资料，有强度和性质的差别， 量反应属于计量资料，有强度和性质的差别，可以 某种测量数值表示， 某种测量数值表示，如药物引起血中谷丙转氨酶的 升高，这类效应称为量反应。 升高，这类效应称为量反应。 质反应属于计数资料，没有强度的差别， 质反应属于计数资料，没有强度的差别，不能以具 体的数值表示，而只能以“阴性或阳性” 体的数值表示，而只能以“阴性或阳性”、“有或 来表示，如死亡或存活、患病或未患病等。 无”来表示，如死亡或存活、患病或未患病等。
2011-3-17 15
Hale Waihona Puke 第一节 概念和意义二、 LD50 测定的意义及统计学原理
对 LD50 及相关参数的评价
绝非判断药物急性毒性作用的惟一指标， LD50 绝非判断药物急性毒性作用的惟一指标， 仅是一个为描述某一药物在某个特殊的群体中以致 死反应为指标而设计的一个统计学术语， 死反应为指标而设计的一个统计学术语，是许多反 映药物急性毒性的参数之一。 映药物急性毒性的参数之一。 更为深刻的内涵， 急性毒性作用具有比 LD50更为深刻的内涵，剂 效应（死亡）曲线的斜率在评价药物的急性毒 量-效应（死亡）曲线的斜率在评价药物的急性毒 更有价值甚至更为关键。 性中比 LD50 更有价值甚至更为关键。

急性毒性试验设计

取必要的安全措施。
实验动物安全
确保实验动物在实验过程中得 到妥善照顾，避免不必要的痛 苦和伤害。
实验室安全
确保实验室安全，采取必要的 安全措施，如防火、防爆、防 毒等。
废弃物处理
按照相关规定处理实验废弃物 ，确保环境安全。
数据分析与解释
描述性统计分析
对数据进行描述性统计分析，如计算均值、中位数、标准差等，以 了解数据的分布情况。
推断性统计分析
根据实验目的和假设，选择合适的统计方法进行推断性统计分析， 如t检验、方差分析、回归分析等。
解释与推论
基于统计分析的结果，对实验结果进行解释和推论，探讨可能的机制 和原因。
结果表达与报告
摄食量
记录动物每日摄食量，分析摄食量与药物摄入量 的关系。
观察指标与记录
血液学指标
检测红细胞、白细胞等 指标，评估药物对血液
系统的影响。
生化指标
检测肝功能、肾功能等 指标，评估药物对内脏
器官的影响。
病理学检查
对动物进行尸检，观察 内脏器官的病理变化。
死亡情况
记录动物的死亡时间和 数量，分析药物的毒性
急性毒性试验设计
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录
CONTENTS
• 急性毒性试验概述 • 实验动物与操作规范 • 急性毒性试验设计 • 数据处理与分析 • 急性毒性试验的注意事项与伦理考虑
01 急性毒性试验概述
定义与目的
定义
急性毒性试验是在短时间内对实验动物给予一定剂量的受试物，观察受试物对 实验动物产生的毒性作用和死亡情况，以评价受试物的毒性作用和安全性的试 验。

02 实验动物与操作规范
实验动物选择
实验动物种类

急性毒性试验相关要求进展PPT课件

急性毒性试验相关要求 进展
国家药品审评中心 2009年8月
2020/9/21
CDE SFDA
1
内容提要
前言 对急性毒性试验的认识演变 我国的认识与要求 结语
2020/9/21
CDE SFDA
2
前言
所有拟用于人体的药物通常需要进行急性 毒性试验 处于毒理研究的早期阶段，所获得的信息 具有重要意义 2005 SFDA 化学药物急性毒性研究技术指 导原则 国际上提出新挑战
2020/9/21
CDE SFDA
9
认识演变
2020/9/21
CDE SFDA
10
认识演变
LD50值的不确定性
导致这种不确定的原因可能包括但不仅限于 生物学不确定性的存在 动物品质差异 试验条件差异 受试物制备的差异，如浓度、溶剂等 给药体积和给药速度差异，特别是注射途径 时，给药速度是影响毒性表现重要因素
2020/9/21
CDE SFDA
5
认识演变
经典急性毒性试验的局限性
提供的信息不足以支持长毒试验的剂量选择 从生物学的角度看，LD50没有恒定的数值 通常所用的剂量与临床人用剂量差别很大 人和动物对药物的敏感性差别很大 不必要的动物和资源的浪费
2020/9/21
CDE SFDA
6
认识演变
经典急性毒性试验的局限性
2020/9/21
CDE SFDA
16
认识演变
ICH M3
1997、2000、2008 前两版表述较为简单 2008版，参考了上述欧洲工作组的一些 分析结果和建议，内容明显丰富
2020/9/21
CDE SFDA
17
ICH M3
认识演变
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最新
23
受试物的配制方法
（1）受试化学物的量取： 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。
称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重， 定容，计算浓度mg/ml，备用。
吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入 容量瓶中，用溶剂加至刻度。
最新
24
吸量法，计算公式为：X＝ A ·V
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～
1.5，
b—最低全致死剂量量，
a—最高不致死剂量，
n—设计的组数。
分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之
一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可
能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；
组数过少，不能较精确求最新出LD50。
18
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
最新
19
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字6
器材与试剂
1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、
容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物 体重秤、外科剪刀、镊子 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和 液、伊红染液
最新
7
实验方法
1、实验动物的选择 2、剂量设计及随机化分组 3、受试物的配制 4、染毒途径的选择 5、毒性反应的观察与LD50的计算 6、急性毒性的评价
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
最新
10
3、实验动物的一般要求
动物数量：动
物6组，1-5组为 实验组，6组为 蒸馏水对照组
性别：雌雄各半
年龄：成年动物
生理与健康状况：
未产未孕者、健康 动物
实验动物的预检
实验动物的给药 前禁食处理。
最新
11
健康动物标志
最新
20
以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
最新
27
等容量稀释法
将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位 体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物 配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、 10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。
式中：
d×1000
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
最新
25
受试物的配制方法 （2）受试化学物的稀释 等浓度稀释法： 等容量稀释法：
最新
26
等浓度稀释法
将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单 位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受 试物的试验剂量分别为100、200、400和 800mg/kg，受试物配制成10 mg/ml，每组动物 每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8 ml。
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
最新
12
实验动物的标记
染色法
编号方法：小鼠头部为1号，顺时 针编号，用苦味酸编个位数，用 伊红编十位数。
最新
13
最新
量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。
最新
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14
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
最新
15
剂量选择及分组
剂量选择
✓广泛查阅文献资料，估计毒性中值 ✓预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 ✓设计正式试验的剂量和分组
最新
16
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂
最新
8
一、 实验动物选择
1、物种和品系
对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
最新
9
2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠 小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
3
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
最新
4
丙烯腈经口急性毒性试验设计
最新
5
实验目的
评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死 量LD50，并根据LD50进行急性毒性分级，
掌握实验动物随机分组的方法和经口灌 胃的技术。
观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验 提供依据；为毒理学机制研究提供线索。
急性毒性试验设计
组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚
最新
1
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h 之内多次接触外源化学物后，在短
期内所发生的毒性效应，包括致死
效应。
最新
2
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
最新
最新
21
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7 二1 5
9 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
最新
22
20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20