土壤漆酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

货号：QS2941 规格：50管/24样土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）试剂盒说明书分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物，能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫，在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用，是反映土壤质量的一个重要生物学指标。

测定原理：S-ASF能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯酚，后者在410nm有特征光吸收。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存（自备）；试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入1.25mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存;试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体20mL×1瓶，4℃保存；样品处理新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。

每个测定管设一个对照管。

S-ASF活力计算：标准条件下测定的回归方程为y = 0.0066x -0.013；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-ASF活力（μmol/d /g 土样）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0066×V反总÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013) T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：5.25×10-4 L；W：样本质量，0.1g。

土壤酸性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明微量法货号：BC0145规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL标准液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0270规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用；试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体2mL×1支，0.2μmol/mL酪氨酸溶液，4℃保存。

产品说明：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。

土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿、蒸馏水、50目筛（或更小）。

样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

操作步驟：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、样本测定：第1页，共2页试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1--试剂一（μL）100100--试剂二（μL）200----混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6次，使土样与反应液充分接触。

试剂三（μL）200200--试剂二（μL）-200--混匀，10000rpm室温离心10min，取上清液--上清液（μL）220220--标准液（μL）--220-蒸馏水（μL）---220试剂四（μL）650650650650试剂五（μL）130130130130混匀，40℃水浴10min，10000rpm室温离心10min，取上清液于680nm下读取各管吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

漆酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1635规格：100T/96S产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃避光保存。

产品说明：漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水，水浴锅。

操作步骤：一、粗酶液提取：（1）组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

（2）细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

（3）培养液：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至420nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、水浴锅温度调至45℃。

3、工作液的配制：一瓶试剂二用10mL试剂一溶解。

现用现配。

4、操作表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂：样本名称测定管空白管样本（μL）30蒸馏水（μL）-30工作液（μL）170170在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入上述试剂，充分混匀后于420nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于45℃水浴3min（酶标仪有控温功能的可以将温度调至45℃），拿出迅速擦干测定190s时的吸光值A2，计算△A测定管=A2测定-A1测定，△A空白管=A2空白-A1空白，△A=△A测定管-△A空白管。

土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明货号:BC0280规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。

通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

操作步骤：催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。

货号: QS2937 规格：50管/24样土壤过氧化氢酶检测试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。

测定原理：H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。

自备实验用品及仪器：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水试剂组成和配制：试剂一：液体100μL×5瓶，4℃保存；临用前每瓶加入9.9mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）；试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。

样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。

S-CAT活性计算：单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=18.9×（A无土管-A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，1.145×10-3L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； T：反应时间，20 min=1/72d； W：样本质量，0.1g。

第1页，共1页。

土壤酶活性测定方法土壤酸性磷酸酶活性的测定1.试剂制备(1)0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液取10.67 GP硝基苯磷酸二钠（6H2O，分子量371.1）溶于pH4。

5 5在普通缓冲液中稀释至250ml，在4℃冰箱中保存。

(2)通用缓冲液（ph4.5）（缓冲液久置会有沉淀）储备溶液由以下成分组成：三羟甲基氨基甲烷12.1g顺丁烯二酸11.6g柠檬酸14g硼酸6.3g溶于500ml 1nnaoh（40g定容1L），加入蒸馏水至1L。

取200ml储备溶液，加入0.1nhcl或浓HCl，将pH值调节至4.5。

最后，稀释至1L。

（3）甲苯(4)0.5mol/lcacl2.2h2o溶液：36.75gcacl2。

2H 2O定容500ml（无水CaCl2:11.1g定容200ml）（5）0.5mol/lnaoh 溶液：20gnaoh定容1L 2。

测量步骤取1g土壤，置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（ph4.5）、0.25ml甲苯和1ml0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。

培养结束后，加入1ml0 5mol/L氯化钙溶液和4ml 0 5mol/LNaOH溶液，用浓滤纸过滤至50ml容量瓶中，用蒸馏水定容后在410nm处比较颜色。

3.计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示，w（mgg-1h-1）=m1/（m×t）式中：M1——标准曲线上发现的样品中对硝基苯酚的质量（mg）；T-反应时间（H）=1hm-样品土壤重量（g）无土壤ck:用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质ck:用1ml蒸馏水代替1mlpnpp。

每个处理做1个。

标准曲线的制备：1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1l，低温保存。

2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加ph6.5通用缓冲液4ml，cacl2.2h2o溶液1ml，naoh溶液4ml，② 混合后，将定量滤纸过滤至50ml容量瓶中。

土壤脲酶（S-UE）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0120规格：50T/24S产品内容：试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×1瓶，临用前加入20mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；试剂三：液体65mL×1瓶，4℃保存；试剂四A液：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂四B液：液体8mL×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B 液中混合，待用；未用完的液体4℃保存一周。

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体1mL×1支，1mg/mL氮标准液产品说明：S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。

土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。

土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

本法以尿素为基质，利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N，生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零2、培养试剂名称测定管对照管第1页，共2页风干土样（g）0.250.25试剂一（μL）125125振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置15min试剂二（μL）625蒸馏水（μL）625试剂三（μL）12501250混匀，放入37℃水浴培养24h后，10000g常温离心10min，取上清液。

2、将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）若吸光值仍大于1.5继续稀释。

3、标准品的准备：吸取适量的标准溶液，稀释至10、8、6、4、2、1、0.5、0μg/ml。

4、测氨量测定管对照管标准管稀释后的上清液或标准液（μL）400400400试剂四（μL）808080试剂五（μL）606060充分混匀，室温放置20min蒸馏水（μL）460460460混匀，630nm处蒸馏水调零，测A值，ΔA=A测定管-A对照管。

土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4049规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

微量法试剂名称规格保存条件试剂一液体42mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：用前加100mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周；2、试剂四：临用前取1瓶加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存2周（变褐色后不能再使用，一瓶即可以实验100T，为延长反应时间故多给一瓶）；3、标准品：0.5μmol/mL苯酚标准液。

产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

Phenyl Disodium Phosphate S-A CP,H+Phenol+Na2HPO4Phenol+2,6-Dibromobenzoquinone Chlorimide Alkaline Conditions Indoxyl(660nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、30-50目筛、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯（不允许快递）。

土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase）活性测定试剂盒（分光光度法）使用说明货号:BC0140规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。

临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A测定管。

酶活力检测方法（愈创木酚法）1 酶活力定义于30℃, pH=4.5 条件下，1分钟催化氧化1umol愈创木酚所需酶量即为1个酶活力单位，以 U表示。

2 试剂和溶液2.1 愈创木酚基础反应液：2.1.1 取137.4μL愈创木酚用蒸馏水溶解，2.1.2 再称取4.5g丁二酸，2.1.3 然后用0.1mol/L的NaOH溶液调pH至4.5，最后定容至1000mL3 仪器和设备3.1 分光光度计，1cm比色皿3.2 恒温水浴 30士0.2 ℃3.3 秒表3.4 试管4 分析步骤4.1 将待测酶液稀释到吸光度值在0.2—0.8范围内4.2 取稀释后酶液0.6mL加入到试管中，再加入2.4mL愈创木酚基础反应液；4.3 将加完酶液和反应液的试管放置在30℃水浴锅中，水浴30min；4.4 水浴完毕，用分光光度计在465nm下测其吸光度5 计算酶活（U/L）=n×A×13.89，式中:A——吸光度n——稀释倍数13.89——换算系数酶活力检测方法（ABTS法）1 酶活力定义于30℃, pH=4.0 条件下，1分钟催化氧化1umolABTS所需酶量即为1个酶活力单位，以 U表示。

2 试剂和溶液2.1 ABTS溶液：0.25gABTS溶于30ml超纯水中，装于棕色试剂瓶中待用。

2.2 酒石酸钠缓冲溶液（0.1M，pH=4.0）：2.3g酒石酸钠溶用超纯水溶解（用1mol/L 的丁二酸将pH调至4.0）定容至100ml容量瓶，放试剂瓶中待用3 仪器和设备3.1 分光光度计，1cm比色皿3.2 恒温水浴 30士0.2 ℃3.3 秒表3.4 试管4 分析步骤4.1 将待测酶液稀释到吸光度值在0.2—0.8范围内4.2 取酒石酸钠缓冲溶液2.85ml+ABTS溶液0.1ml+稀释后的酶液0.05ml于试管内；4.3 将加完酶液和反应液的试管放置在30℃水浴锅中，水浴30min；4.4 水浴完毕，用分光光度计在420nm下测其吸光度5 计算酶活（U/L）=n×A×55.56，式中:A——吸光度n——稀释倍数55.56——换算系数。

漆酶活性测定方法本页仅作为文档页封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March一、测 O法2漆酶是一种多酚氧化酶，它所催化的反应过程中有O z 的介入。

测量反应的耗氧量既可间接地推知漆酶的活性。

较早建立的瓦氏呼吸器检测法便是基于这一原理。

这一方法后来改进为利用氧电极来测量耗氧量，如弗罗纳等以愈创木酚为底物，利用氧电极测定了漆酶催化反应过程中的耗氧量，并将 1个漆酶活性单位定义为PH6 ． o 及2 5 ℃条件下以愈刨木酚作为电子供体时所需要的酶量。

亦可取醌醇作底物．利用氧电极测定漆酶消耗1. 0 μmo lO2的活性。

郭明高提出了测定生漆漆酶活性的吸氧法。

即将生漆溶于甲苯，测定酶促吸氧速度和累计酶促吸氧量，同时利用碱促吸氧法测定反应前后漆酚浓度的变化，从而可以求得漆酚浓度衰减的规律及漆酶促吸氧的克分子比。

此法的特点是反应时漆酶处于其天然存l 在的状态而反应底物又恰为漆酶的天然底物漆酚，这在漆酶测活研究中尚属首倒 [ 2 1 。

漆树酶活力检测用0..1m ol·L-1磷酸盐缓冲液与有机溶剂配成一定体积的底物，其浓度为1．35×10 m ol·L-1。

分别移取3mL于1cm测量池和参比池中，恒温水浴中预热10min．注入20μL漆树酶溶液(含酶2～3 μg)于测量池中，立即搅匀，测定350nm处吸光度A随时间的变化值．漆酶比活力定义为一定温度下,单位酶量催(mg·min-1)．将漆树酶在不同溶剂体系中的化反应的初速度，单位记为△A350mm比活力与漆树酶在纯水体系中的比活力相比，其比值称活力比()212 漆酶活性的定量测定方法21211 分光光度计法测定漆酶活性对苯二胺(λmax495) 、愈创木酚(λmax 485) 、邻苯二酚(λmax 400)和漆酚(λmax 420)都可用做漆酶活力测定的底物。

土壤木质素过氧化物酶（S-Lip）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1970规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入5mL乙醇溶解。

试剂三：液体10μL×1瓶，4℃保存。

临用前加入5mL蒸馏水备用。

产品说明：木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、震荡仪、甲苯、乙醇、30-50目筛（或更小）。

操作步骤：一、样本处理：土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定操作：1、紫外分光光度计预热30min以上，波长调至310nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二用乙醇稀释10倍备用，用多少配多少。

测定管对照管上样（g）0.10.1甲苯（μL）5050室温静置15min。

试剂一（μL）800800试剂二（μL）100-试剂三（μL）50-30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min。

试剂二（μL）-100试剂三（μL）-5012000g常温离心10min，取上清于310nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照顾管。

三、酶活计算公式：酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性（U/g）=△A/(ε×d)×109×V反总÷W÷T= 1.792×△A÷W。

ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL=0.001L；W：土样质量，g；T：反应时间，60min；109：1mol=109nmol。

漆酶（Laccase）试剂盒使用说明货号：BC1630规格：50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。

工作液：粉剂×2瓶，4℃避光保存，临用前加15mL试剂一溶解。

产品说明：漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

漆酶分解产物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增长速率，可计算得漆酶的活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：一、酶液提取1、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500-1000:1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率30％或300W，超声3s，间隔7s，总时间3min），12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（ml）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆；10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、培养液：直接待检。

二、测定操作表对照管测定管样本（mL）0.1煮沸样本（mL）0.1工作液（mL）0.60.660℃，3min，测定420nm处吸光值A，△A=A测定管-A对照管三、酶活性计算公式：1．按照蛋白浓度计算酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）漆酶活性（U/mg prot）=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T=65×△A÷Cpr 2．按照样本质量计算酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）漆酶活性（U/g）=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W)÷T=65×△A÷W3．按照细胞数量计算酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）漆酶活性（U/104cell）=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T=65×△A÷细胞数量4．按照液体体积计算酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）漆酶活性（U/L）=△A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T=65000×△Aε：ABTS毫摩尔消光系数；36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.7mL；V样：反应中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T:反应时间，3min注意事项：1.工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。

土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。

（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。

（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。

（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。

（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。

（7）甲苯。

（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。

然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。

取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。

用蒸馏水补足至10mL。

加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。

最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。

比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。

（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。

摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。

土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明货号:BC0280规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。

通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

操作步骤：催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。

土壤漆酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4008规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体3mL×1瓶常温保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加15mL试剂一溶解，现用现配，并且尽快使用，用不完的试剂2-8℃可保存一周；若试剂变色则不能使用。

2、试剂三：若有白色物质析出，放于37℃中溶解即可。

产品说明：土壤漆酶（SL）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

SLABTS ABTS Radical(420nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、天平、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、震荡仪、研钵、30-50目筛。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤1.分光光度计预热30min以上，调节波长到420nm，蒸馏水调零。

2.加样表：试剂名称测定管对照管土样（g）0.10.1试剂一（μL）450450试剂二（μL）500-置于37℃水浴锅或37℃恒温培养箱准确反应10min。

试剂三（μL）5050试剂二（μL）-5004℃，12000g离心15min，取上清于420nm测定其吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管。