氨基酸的薄层层析

氨基酸的薄层分析实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱（TLC）的基本原理和操作方法。

2、学会运用薄层色谱技术对氨基酸进行分离和分析。

二、实验原理薄层色谱是一种快速、简便、灵敏的分离分析技术。

其原理是基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。

在本实验中，硅胶作为固定相，有机溶剂作为流动相。

氨基酸在硅胶板上与固定相发生吸附作用，由于不同氨基酸的极性不同，在流动相中的溶解度也不同，导致它们在硅胶板上的迁移速度不同，从而实现分离。

三、实验材料与仪器1、材料标准氨基酸溶液（丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸）混合氨基酸样品溶液硅胶 G 板展开剂（正丁醇：乙酸：水＝ 4:1:1）显色剂（茚三酮溶液）2、仪器层析缸毛细管电吹风喷雾器紫外灯四、实验步骤1、制板称取适量硅胶 G 粉于研钵中，加入一定量的蒸馏水，充分研磨至均匀的糊状。

将糊状硅胶均匀涂布在干净的玻璃板上，使其厚度约为 025 05mm 。

室温下晾干，然后在 110℃烘箱中活化 30 分钟，取出后置于干燥器中备用。

2、点样用毛细管吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸样品溶液，分别在硅胶板的一端距离底边约 15cm 处轻轻点样，点样直径不应超过 2mm ，每次点样后用电吹风冷风轻轻吹干，重复点样 2 3 次，以保证样点的浓度足够。

3、展开将适量展开剂倒入层析缸中，使其高度约为 05cm 。

将点好样的硅胶板小心放入层析缸中，盖上盖子，使展开剂的蒸气饱和层析缸约 15 分钟。

然后将硅胶板浸入展开剂中，展开剂的液面应低于样点。

当展开剂前沿上升至距板顶约 1cm 时，取出硅胶板，用电吹风吹干。

4、显色用喷雾器将茚三酮溶液均匀地喷在硅胶板上，然后用电吹风吹热，使氨基酸显色。

五、实验结果与分析1、观察标准氨基酸溶液的斑点丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸的标准溶液在硅胶板上分别形成了清晰的斑点。

2、观察混合氨基酸样品溶液的斑点可以看到混合样品中的氨基酸也得到了较好的分离，形成了不同位置的斑点。

氨基酸薄层层析实验报告篇一：生物化学实验-氨基酸分析实验报告【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】一、预习报告? 实验原理：根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。

薄层层析是在玻璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。

薄层层析（thin layer chromatography，TLC）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。

并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行，而将样品各组份分离出来。

本次实验：? 具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。

? 吸附剂（固定相）：硅胶（C.P.）。

为使制成的薄层板不易松散，加入5%羟甲基纤维素钠（CMCNa）作黏合剂。

? 展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10,V/V/V）。

? 展层-显色剂：按照10:1比例（V/V）混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。

? 活化（activation）：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。

可使硅胶的活性提高，吸附能力加强。

? 氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原，此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。

? Rf值：Rf?斑点中心到样品原点的距离对应溶剂前沿到样品原点的距离由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。

?实验材料：? 样品：1、0.01mol/L丙氨酸;2、 0.01mol/L精氨酸;3、0.01mol/L甘氨酸;4、混合氨基酸溶液。

氨基酸的薄层层析[原理 ]氨基酸薄层层析属于吸附层析，主要根据各种氨基酸在吸附剂表面的吸附能力不同进行分离或提纯的一种方法。

将硅胶（吸附剂—作为固定相的支持剂）均匀地铺在玻璃片上，并将氨基酸样品点于吸附剂上。

在密闭容器中，由于吸附剂的毛细管作用使展开剂上行将样品展开。

被分离的氨基酸因结构不同，在吸附剂上的吸附亲和力也不同。

吸附力大的就容易被吸附剂吸附，而较难被溶剂所冲洗（即解吸）；吸附力小的就容易被溶剂携带至较远的距离。

氨基酸在吸附剂和展开剂之间反复多次的进行吸附和解吸附，从而使不同的氨基酸达到分离的目的。

[试剂 ]（一）硅胶G（二） 0.2%羧甲基纤维素钠称取羧甲基纤维素钠1g 溶于蒸馏水100 ml中，在沸水浴中煮沸至无气泡，冷却，置冰箱储存，临用前稀释至0.2%。

（二）氨基酸溶液制备下列各氨基酸的异丙醇（90%）溶液各10ml。

1． 0.01mol/L 精氨酸精氨酸15.9mg溶于90%异丙醇10ml中。

2． 0.01mol/L甘氨酸甘氨酸7.5mg溶于90%异丙醇10ml中。

3． 0.01mol/L酪氨酸酪氨酸18.1mg溶于90%异丙醇10ml中。

将上述溶液各取出1ml ，混合均匀作为氨基酸混合溶液。

（三）展开剂按4：1：1体积比例混合正丁醇，冰乙酸及水。

临用时配置。

（四） 0.5%茚三酮丙酮溶液茚三酮0.5g溶于无水丙酮100ml 中。

[ 主要器材 ]（一）玻璃板（4× 10cm）（二）层析缸。

（三）喷雾器。

（四）长颈漏斗。

（五）玻璃毛细管。

（六）恒温干燥箱。

[ 操作步骤 ]（一）薄板的制备1．称取硅胶G 0.5g 放入研钵中，加 1.5ml0.2% 羧甲基纤维素钠，研磨成均匀的稀糊状。

2．将上述糊状物倾倒在4× 10cm 的玻璃片（图11）上，使之均匀地布满于玻片，将玻片轻轻地晃动，使硅胶 G 均匀分布，表面平坦，光滑，无水层及气泡，然后水平放置在空气中使其自然干燥。

氨基酸的薄层层析（TLC）【实验原理】聚酰胺薄膜层析是60年代以后发展起来的一种新的层析方法，特别适用于氨基酸及其衍生物的分析。

具有灵敏度高、分辨率强、操作方便快捷等特点。

聚酰胺是一类化学纤维素原料，即锦纶（尼龙）。

由乙二酸和乙二胺聚合而成的，称锦纶66。

由于分子中含有大量的酰胺基团，故称聚酰胺。

聚酰胺薄膜是在涤纶片基上涂上一层锦纶制成的。

聚酰胺对许多极性物质有吸附作用，这是由于聚酰胺的-C=O和 -NH- 能与被分离物质的一定基团形成H键。

如酚类（黄酮类、鞣质）和酸类（氨基酸、核苷酸）能以其羟基与酰胺键的羰基形成H键。

在层析过程中，当样品随流动相通过聚酰胺薄膜时，由于聚酰胺与各极性分子产生H键吸附能力的强弱不同，从而可将样品中各成分分离。

物质分离后，层析点在图谱上的位置，即在滤纸上的移动速率，用Rf来表示。

在一定条件下，每个物质都有特定的Rf值，因此，用Rf可鉴定不同的物质。

无色物质的层析图谱可用光谱法（紫外照射）或显色法鉴定。

氨基酸层析图谱常用茚三酮作显色剂。

本实验利用单向上行层析法鉴定氨基酸。

【实验试剂和器材】(一) 试剂1. 氨基酸标准液(10mg/ml)：三种氨基酸是赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸，分别配成上述浓度的溶液。

2. 氨基酸混合液（每种氨基酸5mg/ml）3. 展层剂：正丁醇：12％氨水：95％乙醇＝13: 3: 3（V/ V）4. 0.1%茚三酮－正丁醇液。

(二) 器材聚酰胺薄膜，毛细管，层析装置，电吹风机，喷雾器，塑料手套等。

【实验方法】(一) 薄膜的剪裁取薄膜（7cm×10cm）一张，在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一直线，在此直线上每隔1厘米作一记号为点样处（外侧两点距边缘2c m）。

(二) 点样氨基酸的点样量以5ul为宜。

点样时，用毛细管吸取氨基酸样品，与薄膜垂直方向轻轻碰点样处，每点在纸上扩散的直径最大不超过2mm。

点样过程中，必须在第一点样品干后再点第二滴。

氨基酸的分离原理
氨基酸的分离原理主要是基于它们在不同条件下的溶解性、酸碱性和极性的差异。

以下是常用的氨基酸分离方法：
1. 薄层层析法：将氨基酸溶液均匀涂布在薄层层析板上，通过上机进行高效层析分离。

根据氨基酸在固定相和流动相中的相互作用力的不同，氨基酸在薄层上的迁移距离也不同，从而实现分离。

2. 离子交换色谱法：利用带电的树脂固定相对氨基酸进行分离。

树脂可以选择正离子交换树脂或阴离子交换树脂，根据氨基酸的酸碱性质进行选择。

溶液中的氨基酸通过与固定相发生离子交换，从而实现分离。

3. 气相色谱法：利用气相色谱仪将氨基酸蒸发后送入色谱柱进行分离。

根据氨基酸在固定相和载气中的分配系数不同，氨基酸在色谱柱中的保留时间也不同，从而实现分离。

4. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪将氨基酸在流动相中进行分离。

根据氨基酸与固定相之间的亲疏水性差异，通过调节流动相组成及流速，实现氨基酸的分离。

综上所述，氨基酸的分离原理主要是利用它们在不同条件下的物理化学性质的差异，通过各种色谱方法实现分离。

生物化学实验报告姓名： XXXXX学号： XXXXXXXXXXXXXX专业年级： XXXXXXXXXXXXXXX 组别：第X实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期XXXX—XX-XX 实验地点第X实验室合作者XXXX 指导老师XXX评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握薄层层析法的实验原理。

2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作方法。

3、掌握如何根据移动速率（R f值）来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液）的方法.二、实验原理1、薄层层析法是色谱分析技术的一种。

是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0。

25毫米左右)后，在此薄层上进行层析分离的分析方法. 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。

当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。

（即通过吸附—解吸-再吸附—再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）硅胶吸附薄层层析：吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。

硅胶：表达式为SiO2·XH2O。

层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（－Si－OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.硅胶吸附薄层层析的特点：②硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。

②硅醇基显较弱的酸性，因此，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。

③硅胶的活化温度通常为105℃－110℃，不能过高.2、氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时,还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。

3、混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—R f值（rate of flow)来表示。

氨基酸的薄层层析_实验报告实验目的：掌握薄层层析法的基本原理和实验操作技巧，了解氨基酸在薄层层析中的分离和检测方法。

实验原理：薄层层析法是以薄层硅胶或薄层纸片为固定相，利用液相作为移动相的一种物理分离技术。

氨基酸薄层层析法主要是将混合的氨基酸样品在薄层硅胶或薄层纸片上沿着其表面作为移动相的有机溶剂慢慢地溶解，不同的氨基酸成分会因吸附在薄层硅胶或薄层纸上的程度不同而在其中分离。

不同的氨基酸在薄层层析图谱上的Rf（相对移动率）值不同，是区分不同氨基酸的一种物理性质。

Rf值的计算公式为：Rf=色谱前行距离÷色谱柱高度。

实验操作：1、制备薄层层析板。

将硅胶胶涂在薄层层析板上，晾干后烘箱烘干。

2、制备样品。

将6种不同氨基酸分别以氨基酸质量浓度相等的方式混合制成样品，并分别标记。

3、将样品分别滴在薄层层析板上，注意每滴之间需使它们相距一定的距离，并在板子内侧写上标记。

4、放入有机溶剂。

将有机溶剂铺在盛有一点水的薄层层析槽中，使得铺上的有机溶剂厚度大约为硅胶层的三分之一。

5、将涂有样品的薄层层析板放在槽中，让它与槽中的有机溶剂接触，但不要使样品浸泡在有机溶剂中。

6、密闭容器，放置在不受光照的地方，等待样品进行分离。

7、取出薄层层析板，把它们晾干并用紫外灯照亮，用标尺测出不同色序分离的距离并计算它们的Rf值。

实验结果：对应不同氨基酸的Rf值，可以得出该试验的结果。

结果应与理论值相近，判断是否失真并计算误差。

氨基酸的薄层层析法是一种快速、简便的分离和检测氨基酸的方法，适用于从实验中得到定性和定量信息。

由于薄层层析板具有良好的重现性和灵敏度，它在生物化学和分析化学领域得到了广泛的应用。

实验4 氨基酸的薄层层析一、实验原理薄层层析是一种将固定相在固体上铺成薄层进行层析的方法。

由于该方法具有操作简便、层析展开时间短、灵敏度高、结果可视化等优点，已被广泛应用于生物化学、医药卫生、化学工业、农业生产和食品等领域，对天然化合物的分离和鉴定也已广泛应用。

薄层层析时一般将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。

当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。

即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开。

本实验应用硅胶作为固相支持物，用羧甲基纤维素钠作为粘合剂，以正丁醇、冰醋酸及水的混合液为展开剂，测定混合氨基酸中各分离斑点的R f值（R f值详见第一篇第三章第五节），以分离和鉴别混合氨基酸的成分。

氨基酸的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸发生羧基反应生成还原茚三酮、氨基醛，与此同时，还原茚三酮又与氨基茚三酮缩合生成蓝色化合物而使氨基酸斑点显色。

二、实验材料（一）样品1．氨基酸标准溶液：（1）0.01mol/L丙氨酸：称取丙氨酸8.9mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。

（2）0.01mol/L精氨酸：称取精氨酸17.4mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。

（3）0.01mol/L甘氨酸：称取甘氨酸7.5mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。

2．混合氨基酸溶液：将0.01mol/L丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混合溶液。

（二）试剂1．硅胶G(C.P.)2．0.5%羧甲基纤维素钠（CMCNa）：取羧甲基纤维素钠5g溶于1000ml蒸馏水中，煮沸，静置冷却，弃沉淀，取上清备用。

3．展开溶剂：按80:10:10比例（V/V）混合正丁醇、冰醋酸及蒸馏水，临用前配制。

4．0.1%茚三酮溶液：取茚三酮（A.R.）0.1g溶于无水丙酮（A.R.）至100ml。