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rProtein A Beads使用说明

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洗脱 Buffer: 0.1M 甘氨酸， pH 3.0
中和液： 1M Tris-HCl， pH8.5
2 、 样品准备
上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清 样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。样品在上样前建议离心 或用 0.22µm 或 0.45µm 滤膜Байду номын сангаас滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
去除样品或柱子中的气泡
样品和 buffer 进行脱气
洗脱组分中没有目的蛋白
样品中抗体浓度太低 抗体被降解
使用其抗原做配体的介质 适当的提高洗脱 pH
回收率逐渐减低
上样量太多 柱子太脏，载量降低
减少上样量 按照填料清洗部分进行树脂清洗

rProtein A Beads 使用说明 货号 ：R8290 规格 ：5ml 保存 ：2-8℃ 产品介绍 ： Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白， 主要通过 Fc 片段结合哺乳 动物 IgG，但是不与狗 lgG 结合，不结合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 与蛋白 G 不同来 源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样，具体见表。天然 Protein A 有五个 IgG 结合区域 和一些未知功能的区域，重组 protein A 去除了与白蛋白及细胞表面结合位点，只含有五 个 IgG 结合区域，减少了非特异性吸附。 rProtein A Beads 产品性能 ：
+++ +
++++ ++ ++ ++
++++=结合能力强； ++=结合能力中等；—=结合能力弱或没有结合
纯化流程 ：
1 、Buffer 的准备
所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22µm 或 0.45 µm 滤膜过滤。
结合/ 洗杂 Buffer: 0.15M NaCl， 20 mM Na 2 HPO 4 ， pH 7.0
Protein A varible — — ++++ ++++ — ++++ varible — ++ ++++ — ++++ ++++ + ++ — — ++++ + ++++ +++ ++ variable +++

Protein G — — —
++++ ++++ ++++ ++++
指标 基质 配体 载量 粒径(µm) 最大流速 pH 稳定范围 储存缓冲液 储存温度
性能 4%琼脂糖微球
重组蛋白 A >40mg 人 lgG/ml 介质
45-165 0.1 MPa,1bar
3-12 20% 乙醇 2℃ -8℃
Protein A 和 Protein G 对不同抗体的结合能力：
种属
Human
原因分析

推荐解决方案
柱子反压过高
样品纯化过程中 曲线不稳
筛板被堵塞 填料被堵塞 样品或 buffer 中有气泡
清洗或更换筛板
按照第 3 部分进行树脂清洗裂解 液中含有微小的固体颗粒，建议上 柱前使用滤膜(0.22 or 0.45 µm)过 滤，或者离心去除。
— — ++++ ++ ++++ ++ ++ ++ ++++ + + ++++ ++++ ++++ +++ +++ — +++
Rabbit Rat
Sheep
Total IgG IgG1 IgG2a IgG2b IgG3
Total IgG
++++ — — — + +/-

去除一些沉淀或变性物质
用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton X-100 清洗，然后然后立 即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。
3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集 洗杂液。
4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱 Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5) 依次使用 3 倍柱体积的结合 Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最 后再用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4 度保存， 防止填料被细菌污染。
4 、SDS-PAGE 检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。
填料清洗
rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生， 但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚 集，往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。
3 、 样品纯化
1) 将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱，层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进 行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2) 将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中（保证目的蛋白与 rProtein A Beads 充分接触，提高目的蛋白的回收率） ，收集流出液。
Avian egg yolk Cow Dog Goat
Guinea pig Hamster
Horse Koala Liama Monkey(rhesus)
Mouse
Pig
亚型 IgA IgD IgE IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgY
IgG1 IgG2
Total IgG
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM

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Protein A G免疫沉淀磁珠使用说明书

Protein A G免疫沉淀磁珠使用说明书

Protein A/G免疫沉淀磁珠Figure 1. General Protocol for ImmunoprecipitationcomplexSDS-PAGE loading buffer Neutralize bufferMagnetic Beads antibodyMagnetic Separator Remove supernatant Pipette Repeat45产品组分产品参数：磁珠粒径100 nm，浓度10 mg/mL，结合量>400 μg human IgG/mL2-8℃保存，保质期2年。

储存方法实验步骤1. 抗原样品制备本操作说明书提供以下三种样品处理方法。

2. 磁珠预处理将磁珠漩涡振荡1 min，使其充分混悬；取25~50 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中。

加入200 µL结合缓冲液洗涤，进行磁性分离（将离心管置于磁力架上，管底对准①卡口压紧，静置2分钟或待磁珠吸附于管壁），吸弃上清。

抽出②磁条，加入200 µL结合缓冲液重复洗涤一次，插回②磁条，磁性分离并吸弃上清。

加入200 µL结合缓冲液重悬磁珠备用。

血清样品处理：若目标蛋白丰度较高， 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100 µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 500 g, 10 min），弃上清后称重，按每毫克细胞50 µL的比例用1×PBS洗涤2次；按每毫克细胞5~10 µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000 g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

贴壁细胞样品处理：移去培养基，按每1.0×105个细胞150 µL的比例用1×PBS洗涤两次；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5 mL EP管内，按每1.0×105个细胞20~30 µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000 g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

Protein A G MagBeads 产品说明书

Protein A G MagBeads 产品说明书

Protein A/G MagBeads Cat. No. L00277 Technical Manual No. TM0249 Version 04202010I Description (1)II Key Features ................................................................................ .. (1)III Characteristics (1)IV General Protocols (2)V Example (2)VI Troubleshooting (3)VII Ordering Information (3)I. DESCRIPTIONProtein A/G MagBeads (Cat. No. L00277, 2 ml 25% slurry) are average 40 μm in siz e, superparamagnetic beads covalently coated with Protein A/G. The beads are supplied as 25% slurry in phosphate buffer saline containing 20% ethanol. The Protein A/G MagBeads are ready-to-use for immunoprecipitation and purification of immunoglobulins. Protein A/G binds to all human IgG subclasses and also binds somewhat to IgA, IgE, IgM and, to a lesser extent, IgD. Therefore, it has a much broader binding range than either Protein A or Protein G individually. Unlike non-recombinant Protein G, Protein A/G does not bind serum albumin because the gene sequence coding for the albumin-binding site has been eliminated. Protein A/G is effective for mouse monoclonal antibody purification from IgG subclasses because Protein A/G binds all mouse IgG subclasses but does not bind murine IgA, IgM or serum albumin.Protein A/G is a genetically engineered protein (MW≈43 kDa) that combines the IgG binding sites of both Protein A and Protein G. 6×His-tag was attached to its N-terminal to facilitate the purification. The secreted Protein A/G contains four Fc-binding domains from Protein A and two from Protein G, making it a more universal tool to bind and purify immunoglobulins.II. KEY FEATURES◆Quick and convenient separation accomplished by magnetic force◆High capacity: The product can bind more than 5 mg of porcine or goat IgG◆Low nonspecific binding12IV. GENERAL PROTOCOL A. Additional materials requiredBinding buffer: Na 2HPO 4 20 mM, NaCl 0.15 M, pH 7.0 Elution buffer: 0.1 M glycine, pH 2-3 Neutralization buffer: 1 M Tris; pH 7.5-9 1.5 ml microcentrifuge tubesMagnet for a 1.5 ml microcentrifuge tubeB. ProcedureNOTE: Shake the bottle gently before use1) Place 100 μl of the BioMag Beads into a 1.5 ml microcentrifuge tube.2) Add 1 ml of binding buffer to the tube and invert tube several times to mix. Use the magnet to separate thebeads. Once the supernatant becomes clear, remove and discard it. Repeat this step three more times. 3) Resuspend the beads in 100 μl of binding buffer.4) Add 50 μl of serum or cell culture supernatant to the tube and gently invert tube to mix. Incubate tube at roomtemperature on a shaker for one hour or longer.5) Magnetically separate the beads. Once the supernatant becomes clear, remove and discard the supernatant. 6) Add 1000 ul of binding buffer to the tube, mix well, magnetically separate the beads and discard thesupernatant. Repeat this wash step three more times.7) Add 100 μl of elution buffer to the tube. Mix well and incubate for fiveminutes at room temperature withoccasional mixing. Magnetically separate the beads. Once the supernatant becomes clear, remove and save it. It contains the eluted antibody. Repeat this elution three more times to recover as much of the IgG as possible. 8) Neutralize the elute immediately with 5.0 μl of neutralization buffer. If necessary, perform a buffer exchange bydialysis or desalting.V. EXAMPLESFig 1. SDS-PAGE of binding capacity detection of ProteinA/G MagBeads (GenScript, L00277)1. Flowthrough of porcine serum 5. Flow of goat serum2. Wash 6. Wash3. Elute of porcine IgG 7. Elute of goat IgG4. Molecular standard1 2 3 4 5 6 7VI. TROUBLESHOOTINGVII. ORDERING INFORMATIONGenScript Protein A/G MagBeads, Cat. No. L00277For Research Use Only.GenScript USA Inc.120 Centennial Ave., Piscataway, NJ 08854Tel: 732-885-9188, 732-885-9688Fax: 732-210-0262, 732-885-5878Email:*********************Web: 3。

Protein A亲和介质说明书

Protein A亲和介质说明书

国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区 电话/传真：010- 82544957 邮编：100190Protein A 亲和介质（Protein A QZT 4FF ）产品说明书1. 产品简介Protein A 能特异性地与抗体的Fc 区结合，所以Protein A 亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。

Protein A QZT 4FF 亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组Protein A 为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。

2. 产品特性3. 使用方法Protein A QZT 4FF 广泛用于各种抗体的分离纯化。

层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。

平衡：用5~10CV 的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl 抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH 不变（与平衡液一致）。

进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。

固体样品可用平衡液溶解配制；低浓National Engineering Research Center forBiotechnology (Beijing)Add ：No.1 Bei er tiao, Zhongguancun, Haidian District, Beijing, ChinaTel/Fax ： 010- 82544957 Post code ：100190度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。

为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm ）处理。

进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。

淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM 柠檬酸，pH 3.0-4.0；或0.1M 甘氨酸，pH 3.0；或20 mM 乙酸钠，pH 3.0-4.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH 或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。

protein A 柱子使用说明

protein A 柱子使用说明

编号：FC-MR1002 Protein A/G-Plus Beads 抗体纯化柱 使用（预装柱）1、 说明： protein A 与Protein G 的抗体结合结构域融合后的重组蛋白和4％浓度的琼脂糖树脂偶联制成。

由于采用了重组表达的Protein A/G ，并去除了其白蛋白结合区，基质能够特异性地结合多种免疫球蛋白的Fc 区段，作为亲和树脂，可用来纯化不同来源的抗体和抗体亚型，以及在免疫共沉实验中捕获免疫复合物。

本产品使用了多位点交联技术，稳定性好、特异性高并具有广谱结合力，每ml 基质可特异性结合6-10 毫克抗体。

2、 组分：50％ Protein A/G Agarose 悬液，PBS ，20％乙醇。

3、 储存条件：4℃保存，有效期一年；常温（15-25℃）运输；切勿冻结！4、 纯化步骤：4.1 取适量Protein A/G Agarose 悬液，装入层析柱，用10倍柱体积的PBS （或者TBS ，下同）洗涤平衡层析柱。

4.2含抗体的血清或其它体液高速离心后，将上清与等体积2×PBS 缓冲液混合，调整pH 以及离子浓度后，缓慢加入层析柱。

4.3 用10倍柱体积以上的PBS 洗涤，至流出液无蛋白检出。

4.4加入2倍柱体积0.1 M 柠檬酸（Citrate Acid, pH 2.7），夹住流出管，静置5分钟后收集穿出液，重复三次。

测定OD 280估算抗体浓度，如果所得抗体较多可以使用SDS-PAGE 检测纯度。

也可以选择0.1 M 甘氨酸（Glycine, pH 3.0）洗脱。

4.5 洗脱后的抗体加入2/5体积的1 M Tris ，pH 8.0中和，使用Millipore 蛋白浓缩管切换到所需缓冲液，通常为2×PBS 含有0.02% NaN 3以及1 mM EDTA 。

4.6浓缩到所需体积，加入50%甘油；测定效价后，分装并保存在-20℃，避免冻结。

5、树脂处理：5.1 层析柱中Protein A/G Plus Bead 使用后需要及时处理，酸洗脱抗体以后，使用10倍柱体积P BS 洗柱平衡到中性，20%乙醇溶液充分洗涤后，封闭上下两端，保存在4℃。