实验二 萌发麦苗淀粉酶活性的测定

实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定实验二：萌发麦苗淀粉酶活性的测定一、实验目的本实验旨在测定萌发麦苗中淀粉酶的活性，了解其在萌发过程中的变化规律，为进一步研究萌发麦苗的生理生化特性提供参考。

二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉为葡萄糖的酶，其在萌发麦苗中发挥着重要的作用。

本实验采用碘化钾法测定淀粉酶的活性，通过测定反应液在一定时间内生成碘化钾的量，计算出淀粉酶的活性。

三、实验步骤1.准备实验材料：选取健康萌发的小麦种子，用蒸馏水冲洗干净，放入无菌培养皿中，加入适量蒸馏水，于25℃恒温培养箱中培养。

每天观察种子的萌发情况，适时补充水分。

2.制备样品：从培养箱中取出一定量的萌发麦苗，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干表面水分。

称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，放入研钵中研磨成匀浆。

将匀浆转入离心管中，于4℃下离心10分钟（转速为10000 r/min），收集上清液备用。

3.测定淀粉酶活性：取两个试管，分别加入1.0 mL 0.5%的可溶性淀粉溶液和1.0 mL 0.02 M的磷酸缓冲液（pH 6.9），摇匀。

再分别加入1.0 mL上清液和1.0 mL 0.5 M的氢氧化钠溶液，混匀。

将试管置于40℃恒温水浴中保温10分钟。

取出试管，加入1.0 mL 0.5 M的硫酸溶液终止反应。

最后加入2.0 mL碘化钾溶液，摇匀后静置1分钟，用紫外分光光度计在660 nm波长下测定吸光度。

4.计算淀粉酶活性：根据实验结果，计算淀粉酶的活性。

公式如下：淀粉酶活性（U/gprot）= (ΔA660 × V × t) / (W × 1000 × 0.01 × ΔT)其中，ΔA660为吸光度变化值，V为反应体系总体积（mL），t为反应时间（min），W为样品质量（g），ΔT为温度差（℃）。

四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录实验过程中各步骤的数据，包括种子萌发情况、样品制备过程中的质量变化、淀粉酶活性测定中的吸光度变化等。

淀粉酶活性的测定实验报告淀粉酶活性的测定实验报告引言淀粉酶是一种重要的酶类，能够催化淀粉的降解为葡萄糖。

淀粉酶活性的测定对于了解酶的特性以及其在生物化学过程中的作用具有重要意义。

本实验旨在通过测定淀粉酶的活性，探究其受到不同因素的影响，为进一步研究酶的功能提供基础数据。

材料与方法1. 实验材料：淀粉酶溶液、淀粉溶液、缓冲液、I2-KI试剂、洗涤液。

2. 实验仪器：比色皿、移液管、离心机、恒温水浴。

实验步骤：1. 预热水浴至37°C。

2. 准备不同浓度的淀粉溶液（0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%），并分别加入比色皿中。

3. 向每个比色皿中加入相同体积的淀粉酶溶液，混匀后立即放入预热的水浴中。

4. 在反应开始后的不同时间点（如0、5、10、15、20分钟），取出一个比色皿，立即加入I2-KI试剂，形成蓝色淀粉-碘复合物。

5. 使用比色计测定各比色皿中的吸光度，并记录下实验数据。

6. 重复实验步骤2-5，以获得可靠的结果。

结果与讨论通过实验测定得到各个时间点下不同淀粉浓度的吸光度值，进而计算出淀粉酶的活性。

实验结果显示，随着淀粉浓度的增加，淀粉酶的活性也随之增加。

这是因为淀粉浓度的增加会提供更多的底物供淀粉酶催化反应，从而增加反应速率。

然而，当淀粉浓度超过一定范围时，淀粉酶的活性开始饱和，即使再增加淀粉浓度，反应速率也不再显著增加。

此外，实验结果还显示，随着反应时间的增加，淀粉酶的活性逐渐增加，但增加速率逐渐减缓。

这是因为淀粉酶需要一定的时间来结合底物，并催化反应发生。

随着反应进行，底物逐渐减少，淀粉酶与底物的结合也变得更加困难，从而导致反应速率的下降。

此外，实验还可以探究其他因素对淀粉酶活性的影响，如温度、pH值等。

通过调节这些因素，可以进一步了解淀粉酶的特性以及其在生物体内的作用机制。

结论通过本实验的测定，我们得出了淀粉酶活性与淀粉浓度和反应时间的关系。

实验结果表明，淀粉酶活性随着淀粉浓度的增加而增加，并随着反应时间的增加而逐渐饱和。

实验二淀粉酶活性的测定预习报告生物094 左宇 0902040409一、研究背景：酶作为生物体内催化剂，测定其活力是非常有必要的。

不同种类的酶的活力测定方法不同，我们将通过在细节设计上差异较大的酶活力测定方法的设计细节的分析和具体酶活测定操作，体会分析比较其设计细节的差异，从而获取相关设计理念并完成没活力测定实验操作的训练。

二、研究目标：按照淀粉酶水解淀粉的作用方式，可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。

根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数，来对这两种酶进行有效的测定。

三、研究策略：两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。

根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。

在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。

四、研究方案及可行性分析：两种酶作用淀粉的方式不同。

α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。

淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。

用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

五、具体实验设计1、所需的主要材料、试剂、仪器（1）实验材料：小麦种子（2）实验仪器：离心机、离心管、研钵、电炉、容量瓶（50mL×1,100mL×1）、恒温水浴、分光光度计。

实验二萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定一．研究背景及目的1.即便是同一种酶，在体外测定酶活性时在不同的测定方法和不同的材料、时期中，实验测定的具体细节设计却大不相同，体外酶活性的测定实验在生化实验中更是经典的实验案例。

本次实验是淀粉酶活性的测定，通过实验进一步体会实验的细节设计。

2.利用酶促反应测定萌发的小麦种子种淀粉酶的活力以及水溶性蛋白质的含量。

二．原理1.淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总成，可以分成α-淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种。

实验中测定萌发的小麦种子的酶活力，因为材料中两种酶都含有，所以要采取一定方法分别测定两种酶活性。

利用两种酶不同的特性，α-淀粉酶不耐酸，pH3.6以下钝化，而β-淀粉酶则不耐高温，高温下易钝化，将β-淀粉酶钝化测得α-淀粉酶活性，再测总酶活性，相减即得到β-淀粉酶活性。

（C6H10O5）n + 0.5nH2O 淀粉酶，40℃0.5nC12H22O11C12H22O11 + 3,5-二硝基水杨酸3-氨基-5-硝基水杨酸淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。

用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

2.利用Folin-酚法测定萌发小麦种子中水溶性蛋白的含量。

在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。

Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。

在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。

[1]三．仪器与试剂1.仪器：离心机（飞鸽牌系列离心机，TDL-40B），722-型分光光度仪（上海分析仪器总厂），DK-SR四型电热恒温水浴锅（上海精密实验设备有限公司），双列八孔电热恒温水浴锅（天津市中环实验电炉有限公司），冰浴微量可调手动移液器（大龙牌），研钵，容量瓶天平（上海精密科学仪器邮箱公司，双杰牌JP-100架盘药物天平）2．试剂萌发的小麦种子，3，5—二硝基水杨酸溶液，1%淀粉溶液，柠檬酸缓冲液0.4MNaOH溶液，麦芽糖标准液,A液，B液，试剂甲，试剂乙四．操作步骤1.制备酶液：2g萌发小麦种子研磨，用蒸馏水浸提，稀释成50ml，一部分3500转/分离心20min，取上清液备用，另一部分过滤，取滤液备用。

实验二-萌发麦苗淀粉酶活性的测定实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定生物112 周泓兆 1102040226一、研究背景及目的酶作为生物体内最重要的催化剂，其活性尤其受到关注。

在这次实验中，我们将对一些经典经典酶活力测定实验进行分析，对比其思路与设计差异，了解测定酶活力的基本方向和实验技巧。

完成小麦萌发过程中淀粉酶活力的测定并分析测定结果是否合理。

二、原理淀粉在淀粉酶的催化作用下生成麦芽糖。

本实验便是通过测定淀粉酶在一定时间内分解淀粉所产生的麦芽糖总量来测定酶的活性。

根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）。

本实验涉及α-淀粉酶与β-淀粉酶，我们可通过钝化β-淀粉酶的方法单独测定α-淀粉酶的活性。

本实验所使用的3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。

还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。

因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。

麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。

三、仪器与试剂1.仪器：TDL-40B 离心机（上海安亭科学仪器厂），722 光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），DK-S24 型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），JP-100 架盘药物天平（常熟市双杰测试仪器厂），HCTP12A1 架盘药物天平（北京医用天平厂）2.试剂：麦芽糖标准液，pH5.6 的柠檬酸缓冲液，3,5-二硝基水杨酸溶液，0.4M NaOH，Folin-酚试剂甲，Folin-酚试剂乙，标准牛血清白蛋白溶液（1mg/ml ）3.材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）四、实验方法/操作步骤1、酶液的制备：称取两克萌发的小麦种子（芽长一厘米左右），置研钵中加少量石英砂，以蒸馏水作为匀浆液，研磨成匀浆，转移到50ml容量瓶中至40ml左右，室温浸提15-20分钟，浸提充分后定容至刻度，混匀后3500r/min离心20min，取上清液备用（初始酶液）。

萌发麦种淀粉酶活⼒的测定实验⼆萌发麦种淀粉酶活⼒的测定⼀、实验背景及⽬的⽲⾕类作物作为最重要的粮⾷作物，对其种⼦技术的研究对于提⾼我国种业发展⽔平、保障国家粮⾷安全有重要意义。

【1】休眠的种⼦中只有β-淀粉酶，萌发时胚释放出来的⾚霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引起α-淀粉酶⽣物合成，分泌到胚乳中。

【2】两种酶共同催化淀粉⽔解为糖，为细胞分裂以及细胞⽣长提供原料。

【3】【4】本实验通过测定萌发麦种淀粉酶活⼒，更好的了解酶在⽣物代谢中的作⽤。

⼆、实验原理淀粉是植物最重要的贮藏多糖，也是⼈和动物的重要⾷物和发酵⼯业的基本原料。

淀粉经淀粉酶作⽤后⽣成葡萄糖、麦芽糖等⼩分⼦⽽被机体利⽤。

淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种，在⽲本科植物萌发过程中，这两种酶的活性最⾼。

【5】α-淀粉酶可随机地作⽤于淀粉中的α-1,4-糖苷键，⽣成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此⼜称为液化酶。

β-淀粉酶可从淀粉的⾮还原性末端进⾏⽔解，每次⽔解下⼀分⼦麦芽糖，⼜被称为糖化酶。

【6】【7】研究发现他们各有其⼀定的特性：α-淀粉酶不耐酸，在 pH3.6 以下则发⽣钝化；β-淀粉酶不耐热，在⾼温下易钝化。

利⽤不同特性，钝化其⼀，即可测定另⼀种酶的活性。

测定α -淀粉酶活性时，可将提取液加热到70°C 维持 15 分钟来钝化β-淀粉酶；【8】【9】⽽测定β-淀粉酶时，可⽤ pH3.6 的醋酸缓冲液处理提取液，以钝化α-淀粉酶。

实验应该严格把控钝化条件。

淀粉酶活⼒的⼤⼩与产⽣的麦芽糖量成正⽐，可⽤ 3,5-⼆硝基⽔杨酸法进⾏测定。

还原糖和碱性⼆硝基⽔杨酸试剂共热，产⽣⼀种棕红⾊的氨基化合物。

⽤实验体系中单位时间内⽣成的麦芽糖毫克数表⽰淀粉酶活⼒的⼤⼩。

在实验中要严格控制温度及时间，保证酶的最适条件及初速度状态，以减⼩实验误差。

【10】【11】本次实验分为两部分，⼀是通过纯化β-淀粉酶活⼒完成α-淀粉酶的活⼒测定，⼆是不进⾏任何钝化处理测定总酶活⼒。

小麦萌发前后淀粉酶活性的小麦萌发前后淀粉酶活性比较一、实验目的及要求：1、学习分光光度法测定淀粉酶活力的原理与方法2、了解小麦萌发前后的淀粉酶活力变化。

二、实验原理淀粉酶是水解淀粉(1→4)糖苷键的一类酶的总称。

实验证明，在某些植物如小麦和大麦的休眠种子中只含有β-淀粉酶，α-淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。

其活性随萌发时间的延长而增高。

本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。

麦芽糖是还原糖，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，后者在540nm处有最大光吸收，可进行定量测定。

三、主要仪器设备及实验耗材：小麦种子可见分光光度计离心机恒温水浴研钵等麦芽糖标准液0.2%淀粉溶液3,5-二硝基水杨酸溶液1%NaCl0.02 mol/L磷酸缓冲液石英砂四、实验步骤：1、麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂：制作麦芽糖标准曲线配方表试剂(ml)管号1 2 3 4 5 6 7麦芽糖标准液(1 mg/ml) 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 3,5-二硝基水杨酸 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0摇匀，置于沸水浴中煮沸5 min。

取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20 ml。

以1号管作为空白调零，在540 nm波长下比色测定。

以麦芽糖含量(mg)为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、萌发小麦种子充分浸泡小麦种子24 h，25℃恒温箱或室温下发芽(2~3天)。

3、提取小麦萌发前后的淀粉酶液1) 幼苗酶的提取：取萌发幼苗10株，入研钵加石英砂0.2 g，1%NaCl 3 ml，研磨成匀浆，0~4℃下放置20 min。

离心(2,000 r/min, 10 min)取上清，量筒测定上清酶液总体积。

2) 种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。

萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究
淀粉酶是一类重要的酶，它们在各种植物的发芽过程中发挥着重要的作用。

在小麦种
子萌发过程中，淀粉酶起着决定性的作用。

本文旨在研究萌发小麦种子中淀粉酶的酶学性质。

首先，我们选择小麦种子在实验中进行分离，以初步确定淀粉酶来源。

实验结果表明，小麦种子中含有淀粉酶，它们主要来自小麦种子里的胚乳和淀粉质泡沫，而小麦种子表皮
则有较低含量的淀粉酶。

其次，我们利用粒度分级、沉淀分离技术对淀粉酶分离、纯化并收集淀粉酶样品，淀
粉酶完成从原始材料分离纯化后，样品中淀粉酶的浓度和纯度都比原始材料的含量的高。

继而，我们观察了温度、pH值、聚集剂和胰蛋白酶对淀粉酶活性的影响，结果表明，淀粉酶的最佳活性状态为30℃时的pH8.0条件下，加入聚集剂NaCl和胰蛋白酶；同时，
淀粉酶对温度和pH值的变化具有一定的耐受性，在30℃-45℃pH7.0-8.5范围内淀粉酶仍
可保持较高的活性。

最后，我们测定了萌发小麦种子中淀粉酶的最大活性，结果显示，30℃时的pH8.0条
件下，淀粉酶的最大活性为250 U/ml。

此外，经过NaCl聚集处理和加入胰蛋白酶处理后，淀粉酶的活性都有所提高，分别达到280 U/ml和290 U/ml。

实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定生物112 周泓兆 1102040226一、研究背景及目的酶作为生物体内最重要的催化剂，其活性尤其受到关注。

在这次实验中，我们将对一些经典经典酶活力测定实验进行分析，对比其思路与设计差异，了解测定酶活力的基本方向和实验技巧。

完成小麦萌发过程中淀粉酶活力的测定并分析测定结果是否合理。

二、原理淀粉在淀粉酶的催化作用下生成麦芽糖。

本实验便是通过测定淀粉酶在一定时间内分解淀粉所产生的麦芽糖总量来测定酶的活性。

根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数（毫克麦芽糖*克-1鲜重*分-1）。

本实验涉及α-淀粉酶与β-淀粉酶，我们可通过钝化β-淀粉酶的方法单独测定α-淀粉酶的活性。

本实验所使用的3,5－二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。

还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。

因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。

麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。

三、仪器与试剂1.仪器：TDL-40B 离心机（上海安亭科学仪器厂），722 光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），DK-S24 型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），JP-100 架盘药物天平（常熟市双杰测试仪器厂），HCTP12A1 架盘药物天平（北京医用天平厂）2.试剂：麦芽糖标准液，pH5.6 的柠檬酸缓冲液，3,5-二硝基水杨酸溶液，0.4M NaOH，Folin-酚试剂甲，Folin-酚试剂乙，标准牛血清白蛋白溶液（1mg/ml ）3.材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）四、实验方法/操作步骤1、酶液的制备：称取两克萌发的小麦种子（芽长一厘米左右），置研钵中加少量石英砂，以蒸馏水作为匀浆液，研磨成匀浆，转移到50ml容量瓶中至40ml左右，室温浸提15-20分钟，浸提充分后定容至刻度，混匀后3500r/min离心20min，取上清液备用（初始酶液）。

淀粉酶活性的测定一、实验目的酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。

酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。

淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。

α-淀粉酶是一种典型的内切型淀粉酶,主要作用于淀粉水解的液化阶段,因此又叫液化酶。

作为一种最重要的工业酶制剂，α-淀粉酶广泛存在于动物,植物和微生物中。

其中，微生物α-淀粉酶以其经济易得成为工业生产主要来源。

目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种。

本实验采用杨氏改良法测定α-淀粉酶；掌握测定α-淀粉酶活性大小与温度关系的方法，通过分析得出酶的最适温度范围。

二、实验原理酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和pH值称为某种酶作用时的最适温度和pH值。

温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低，其变化趋势呈钟形曲线变化。

不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。

α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。

α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。

本实验通过淀粉遇碘显蓝色，淀粉含量越高，颜色越深。

用分管光度计检测显色效应大小，通过分管光度值计算酶活力注意：实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。

在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。

并且在酶的作用过程中，三支测定管及空白管不要混淆。

三、材料、试剂与仪器实验材料：α-淀粉酶仪器：分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干试剂：①0.4M NaOH/0.4M CH3COOH及0.1M HCl：②0.005%工作碘液：0.5克I2和5.0克KI水中研磨，定容至1000mL；③1%糊化淀粉溶液：称取1.0克淀粉，加入25mL0.4M NaOH，60℃5min，冷却后加25mL0.4M CH3COOH，定容至100mL；④稀释α-淀粉酶溶液：待测样品四、实验步骤①10mL1%淀粉溶液加入试管中，室温25/45/65℃保温10min②于每管中各加酶稀释液1mL，在室温25/45/65℃恒温水浴中（水浴温度的变化不应超过±0.5℃）准确加热10min，冷却。