(植物中)淀粉酶活性的测定

淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。

二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。

测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。

淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。

三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。

2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。

(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。

(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。

(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。

实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的：1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义；2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。

二、实验原理：淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热，70℃ 15min 则被钝化。

测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。

淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力（单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量）。

三、实验用具：1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。

2、实验材料与试剂（1）0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液：称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml；B液：称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml；取A液55ml与B液145ml混匀。

（2）1%可溶性淀粉溶液：1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液；（3）1%3,5-二硝基水杨酸试剂：称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入；（4）麦芽糖标准溶液：取麦芽糖0.1g溶于100ml水中；（5）pH 6.8的磷酸缓冲液:取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。

（6）0.4mol/L的NaOH溶液；（7）1%NaCl溶液。

（8）实验材料：萌发的谷物种子（芽长约1cm）四、操作步骤1、酶液提取：取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。

一、实验目的1. 掌握淀粉酶活性的测定原理和方法。

2. 了解不同条件对淀粉酶活性的影响。

3. 学会使用比色法测定淀粉酶活性。

二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶，可以将淀粉分解成葡萄糖、麦芽糖等小分子糖类。

在实验中，淀粉酶将淀粉水解成还原糖，还原糖与3，5-二硝基水杨酸（DNS）反应生成红色复合物。

通过测定该复合物的吸光度，可以计算出淀粉酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：淀粉酶、淀粉、DNS试剂、硫酸铜、无水碳酸钠、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水、待测样品（如唾液、植物组织等）。

2. 仪器：恒温水浴锅、移液器、容量瓶、试管、试管架、吸管、比色计、电子天平。

四、实验步骤1. 准备DNS试剂：称取DNS试剂0.1g，加入50ml蒸馏水溶解，再加入0.5g硫酸铜和0.5g无水碳酸钠，搅拌均匀。

2. 标准曲线制作：准确配制一系列浓度的麦芽糖标准溶液（如0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml），各取2ml加入试管中，加入2ml DNS试剂，沸水浴10分钟，取出冷却，用分光光度计在波长540nm处测定吸光度，以麦芽糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3. 待测样品处理：准确称取一定量的待测样品，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀，离心取上清液。

4. 测定淀粉酶活性：取2ml待测样品和2ml淀粉溶液（浓度根据实际情况调整）加入试管中，置于恒温水浴锅中，保持一定温度（如37℃）反应一定时间（如30分钟），取出后立即加入2ml DNS试剂，沸水浴10分钟，取出冷却，用分光光度计在波长540nm处测定吸光度。

5. 计算淀粉酶活性：根据标准曲线，计算出待测样品中还原糖的浓度，再根据反应时间、温度、待测样品浓度等参数，计算淀粉酶活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以麦芽糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关系数，验证标准曲线的线性关系。

淀粉酶活性的测定一、原理淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。

淀粉酶产生的这些还原糖能使3，5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。

可以用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。

几乎所有植物中都存在有淀粉酶，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，主要是α－和β－淀粉酶。

Α－淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；而β－淀粉酶不耐热，在70℃15min则被钝化。

根据它们的这种特性，在测定时钝化其中之一，就可测出另一个的活力。

本实验采用加热钝化β－淀粉酶测出α－淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定的总活力（α＋β）比较，求出β－淀粉酶的活力。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）。

（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴（37℃，70℃，100℃）；4.具塞刻度试管；5. 刻度吸管；6. 容量瓶。

（三）试剂（均为分析纯）：1. 标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；2. 3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸，溶于20ml2mol/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。

盖紧瓶塞，勿使CO2进入。

若溶液混浊可过滤后使用；3.01mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0.1mol/L 柠檬酸）：称取C6H8O7.H2O 21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液（0.1mol/L 柠檬酸钠）：称取Na3C6H5O7.2H2O 29.41g，用蒸馏水溶解并定容至1L。

班级：植物092 ：X炜佳学号：0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反响的活性蛋白，几乎所有的生化反响都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。

酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的根底。

酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。

α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。

β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。

α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之那么易穗发芽。

目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不一样,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。

这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下那么发生钝化。

本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下〔70℃〕下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。

酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者复原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。

常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。

然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。

实验中为了消除非酶促反响引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。

【精品】实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较(1)实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较淀粉酶是一种重要的植物酶活性物质，它可以调控植物的生长发育和新陈代谢过程，具有重要的生物学研究价值与应用价值。

本实验旨在通过定量测定比较四种小麦种类萌发前后淀粉酶活力，以分析小麦萌发对其淀粉酶活力的影响。

一、实验步骤和方法1、材料准备：实验所需四种小麦种类分别为：沃克68号、高伏68号、沃思68号、绿沃68号。

2、试样处理：先将四种小麦种类的种子分别用处理液浸泡24小时，然后用水冲洗，留取每种种子100g，分别进行萌发实验。

3、试样分析：将萌发2天后的小麦种子经过磨碎、搅拌均匀，在30℃温度下用淀粉酶天平法，按多试次测定小麦种类萌发前后淀粉酶的测定活力，以每样总和平均值为测定数据。

4、结果分析：从测得的结果中分析出四种不同小麦种类萌发前后淀粉酶活力的比较。

二、实验结果从实验结果可以看出，各小麦种类萌发前后淀粉酶活力均有显著差异（P <0.05）。

伴随小麦种子萌发，淀粉酶活力显著升高。

四种小麦种子萌发的趋势也是不一样的，沃克68号、高伏68号、沃思68号淀粉酶活力萌发后显著高于没有萌发的小麦种类；而绿沃68号淀粉酶活力萌发后比没有萌发前低（P<0.05）。

三、讨论小麦种类萌发后淀粉酶活力的变化主要是由三个因素共同作用的结果：一是小麦种子发育和成熟的不同，萌发时含淀粉量较低，造成淀粉酶活力显著变化；二是细胞壁构成的差异，小麦种子萌发后，细胞壁的物质组成发生变化，影响其对淀粉酶活性的反应；三是淀粉酶的抑制或促进作用，小麦萌发时，会出现一些酶类物质，影响淀粉酶的活力。

本实验研究结果表明，小麦种子萌发后，淀粉酶活力发生了显著改变，不同种类的小麦淀粉酶活力和萌发过程有很大的差距，可能与其物种类型的不同有关。

本实验有助于进一步深入理解淀粉酶在植物生长发育中的重要作用，为进一步研究淀粉酶在植物萌发活性中的作用提供理论基础。

淀粉酶活力的测定方法淀粉酶主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和R-酶，它们广泛存在于动物、植物和微生物界。

不同来源的淀粉酶，性质有所不同。

植物中最重要的淀粉酶是α -淀粉酶和β-淀粉酶。

α -淀粉酶随机作用于直链淀粉和支链淀粉的直链部分α -1,4糖苷键，单独使用时最终生成寡聚葡萄糖、α-极限糊精和少量葡萄糖。

Ca 2+能使α-淀粉酶活化和稳定，它比较耐热但不耐酸，pH 3.6 以下可使其钝化。

β-淀粉酶从非还原端作用于α-1,4糖苷键，遇到支链淀粉的α -1,6键时停止。

单独作用时产物为麦芽糖和β-极限糊精。

β-淀粉酶是一种巯基酶，不需要Ca 2+及Cl —等辅助因子，最适pH偏酸，与α -淀粉酶相反，它不耐热但觉耐酸，60 ℃保温15min可使其钝化。

通常提取液中α -淀粉酶和β-淀粉酶同时存在。

可以先测定（α + β）淀粉酶总活力，然后在60 ℃加热15 min ，钝化β-淀粉酶，测出α -淀粉酶活力，用总活力减去α - 淀粉酶活力，就可求出β- 淀粉酶活力。

淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5- 二硝基水杨酸的显色反应来测定。

还原糖作用于黄色的3,5- 二硝基水杨酸生成棕红色的3- 氨基-5- 硝基水杨酸，生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比。

以每克样品在一定时间内生成的还原糖（麦芽糖）量表示酶活大小。

1 酶活测定方法（1）标准曲线的制作(见下表)①取7支20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号,按表加入试剂。

②摇匀,至沸水浴中煮沸5 min。

取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20 ml,以1号管作为空白调零点,在520 nm的波长下比色测定吸光度值。

并建立通过吸光度值求麦芽糖含量的回归方程。

表1 标准麦芽糖溶液成分表及OD测定值试剂 1 2 3 4 5 6 7 麦芽糖标准液（mL）0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 H2O（mL） 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 0 3,5-二硝基水杨酸（mL） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 麦芽糖含量（mg）0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 OD520(2)粗酶液淀粉酶活力测定①待测粗酶液的制备：发酵24 h后发酵液4000 r/ min离心10 min,去除菌体，在上清液中加入65％饱和度的硫酸铵，待硫酸铵充分溶解后于4℃盐析2h，然后5000r/min离心20min，得到初步纯化的淀粉酶。