ADF,NDF测定方法

纤维素含量的计算：纤维素=ADF（%）－经72%硫酸处理后的残渣（%）酸性洗涤木质素（ADL）含量的计算：ADL（%）=残渣（%）－灰分（硅酸盐,%）酸性洗涤木质素和酸不溶灰分（AIA）测定的优化：把酸性洗涤纤维置于50ml烧杯中，加入5ml 72%硫酸，20℃水解3h，然后加水45ml，室温过夜，次日用已称恒重的3号砂芯漏斗过滤，水洗残渣至pH6.5，于60℃烘干，称重。

把剩余残渣在马福炉中550℃经2.5h灰化，测得灰分重量。

洗涤优化：经过实际试验，发现中性洗涤纤维测定和酸性洗涤纤维测定中用丙酮冲洗这步效果不大，测量精度要求不高时，可省略。

方法一：化学滴定法（我们测定出来的结果较文献报道偏低）（一）纤维素含量的测定1.0.1N2.K（2）（3）（4）（5）（6）（7）定，用去（8）（9）1. 0.5%淀粉，2.（1）（2）5min （3）（4）（5）（6）（7）（8）（9）移液管吸取10mL滤液，加入10mL碱性铜试剂，盖好在沸水中煮15min（10）冷却，加入5mL草酸-硫酸混合液，加入0.5mL 0.5%淀粉，用0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去b mL（11）取10mL碱性铜试剂，加5mL草酸-硫酸混合液，再加10mL滤液，加入0.5mL 0.5%的淀粉，0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去a mL（12）生物质中半纤维素的含量计算公式x% = 0.9×100 [ 248－（a－b）]（a－b）/10000×10×n（三）木质素含量的测定1. 所需溶液1%醋酸，丙酮，73%硫酸，10%氯化钡溶液，0.5N重铬酸钾溶液，浓硫酸，0.1 N硫酸亚铁铵溶液，试亚铁灵指示剂。

2. 实验步骤（1）标定新配的0.1N硫酸亚铁铵溶液, 滴定度为K（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.1g，数值为n（3）装入离心管，加入10mL 1％醋酸，摇动5min混匀（4）离心，用5mL 1％醋酸洗沉淀（5）加丙酮3-4mL，在摇荡的情况下浸泡3min，洗三次（6）用玻璃棒将沉淀沿管壁分散开，将离心管放热水中使沉淀充分干燥（7）在干燥沉淀中加入73％硫酸3mL，用玻璃棒搅匀，挤压成均匀的浆液（8）室温下放置一夜（9）加入10mL蒸馏水，搅匀，置沸水中5min（10）冷却，加入0.5mL 10%氯化钡溶液，搅匀，离心，倒出清液，分别用10mL蒸馏水冲洗沉淀两次，每次要混匀原理：生物质（浒苔、锯末和玉米秸秆）在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。

实验六、（Van Soest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法【学习目标】了解饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定意义，掌握饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）检测的原理、实验方法，并注意对测定结果的分析和讨论。

一、目的传统的粗纤维测定方法存在着明显的缺点，即所测得的结果包括部分半纤维素和纤维素，以及大部分木质素在内的一组复合物，又因为有部分半纤维素和少量纤维素、木质素溶解于酸碱溶液中，被计算到无氮浸出物中去了。

因此，传统方法测得的饲料中粗纤维和无氮浸出物的含量均不能反映出饲料本身被家畜利用的真实情况。

而范氏洗涤纤维分析法则能弥补这些不足，可以准确地获得植物性饲料中所含的半纤维素、纤维素、木质素以及酸不溶灰分的含量，这在纤维素的分析测定中是一项非常重要的改革。

二、原理植物性饲料如一般饲料、牧草的粗纤维经中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）分解，则大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白质，统称为中性洗涤剂溶解物（NDS），而不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），这部分主要是细胞壁部分，如半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐和极少量的蛋白质。

酸性洗涤剂可将中性洗涤纤维（NDF）中各组分进一步分解。

植物性饲料可溶于酸性洗涤剂部分称为酸性洗涤剂溶解物（ADS），主要有中性洗涤剂溶解物（NDS）和半纤维素，剩余的残渣称为酸性洗涤纤维（ADF），其中含有纤维素、木质素和硅酸盐。

此外，由中性洗涤纤维（NDF）与酸性洗涤纤维（ADF）值之差即可得到饲料中半纤维素的含量。

酸性洗涤纤维经72.0%的硫酸消化，则纤维素被溶解，其残渣为木质素和硅酸盐，所以，从酸性洗涤纤维（ADF）值中减去72.0%硫酸消化后残渣部分即为饲料中纤维素的含量。

将经72.0%硫酸消化后的残渣灰化，灰分则为饲料中硅酸盐的含量。

而在灰化中逸出的部分即为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。

滤袋法测粗纤维的含量1、滤袋用2B铅笔编号，于105 ℃烘干1 h，取出于干燥器冷却30 min，准确称重。

记录每个滤袋重量W1。

2、准确称取0.5 g样品放入袋中（记录样品的重量W2及所在的滤袋编号），每个样品做2个平行样，另取1个空滤袋作为空白。

用封口机封口。

3、往1000 ml搪瓷杯中加入中性洗涤剂400 ml（每个滤袋约需80 ml）和2-3滴正辛醇；若试样淀粉含量高，加入1 ml 高温α-淀粉酶；将搪瓷杯置于电磁炉上，盖上冷凝器，接通自来水，加热溶液至即将微沸时，将滤袋内容物打散、展平，放入搪瓷杯中，用重物压在滤袋上以防浮起。

要求溶液在2-5 min内微沸，保持微沸处理1-2 h。

4、将处理完的滤袋在离心机内甩干2 min，放入装有90－100 ℃沸纯水的烧杯中洗涤至pH为中性（试纸测定），然后将滤袋放入离心机中甩干2 min。

5、分别用石油醚、丙酮浸泡滤袋，于烧杯中超声提取5 min后取出，将滤袋放入离心机中甩干5 min，放在打开的通风橱下吹1 h（若采用测脂肪后的样品，石油醚萃取步骤可免，仅用丙酮萃取即可）。

6、待丙酮完全挥发干净（！）后，将滤袋放入干净坩埚内于105 ℃烘箱中烘2 h，取出放在干燥器里冷却并称重。

重复上述步骤至恒重，记录重量W3。

按下列公式计算NDF：NDF = W3 - W17、往1000 ml搪瓷杯中加入酸性洗涤剂400 ml（每个滤袋约需80 ml）和2-3滴正辛醇；将搪瓷杯置于电磁炉上，盖上冷凝器，接通自来水，加热溶液至即将微沸时，将测定NDF之后的滤袋内容物打散、展平，放入搪瓷杯中，用重物压在滤袋上以防浮起。

要求溶液在2-5 min内微沸，保持微沸处理1-2 h。

8、将处理完的滤袋在离心机内甩干2 min，放入装有90－100 ℃沸纯水的烧杯中洗涤至pH为中性（试纸测定），然后将滤袋放入离心机中甩干2 min。

9、将滤袋放在250 ml烧杯中，加入丙酮浸没，于烧杯中超声提取5 min后取出，将滤袋放入离心机中甩干5 min，放在打开的通风橱下吹1 h。

秸秆中纤维素/半纤维素和木质素的几种测定方法对比陈贤情 商晋 宋慧芳 郭康权（西北农林科技大学机械与电子工程学院，陕西杨凌西农路22号，712100）摘 要：农作物秸秆的基本物理化学特性是的其综合利用重要依据。

秸秆的主要成分是纤维素、半纤维素和木质素，其测定方法各有利弊。

本文对比了几种不同测试方法和测试手段，从耗时、操作难易程度和数据可靠性等方面对纤维素、半纤维素和木质素的测定方法进行综合比较，给出了各测试方法的优缺点，并对几种改进方法作了介绍。

其中，Van Soest方法比较简单实用，一般实验室都能进行，但结果准确性低并且过滤困难；王玉万法可以同时进行多个试样的分析，但测定纤维素含量偏高，半纤维素含量偏低；高效液相色谱法数据可靠，重复性好，但仪器贵，测试成本较高。

关键词：秸秆，纤维素，半纤维素，木质素0 引 言中国秸秆资源丰富，但是大部分被当作肥料直接还田或者被当作燃料烧掉，随着科技的发展，一些较深层次的秸秆加工技术应运而生，如秸秆生物质气化技术、颗粒炭化技术、秸秆纤维的生物转化等。

农作物秸秆的基本物理化学特性是的其综合利用重要依据，秸秆的基本组织是纤维素、半纤维素和木质素，其含量的多少为其综合利用提供重要依据。

纤维素、半纤维素和木质素的测定方法有多种。

Van Soest于1967年提出纤维素、半纤维素、木质素的测定程序，得到研究学者的普遍应用； 1987年王玉万等提出了木质纤维素固体基质发酵物中半纤维素、纤维素和木质素的定量测定分析程序；Van Soest于1991年对其方法进行了改进；李华针对Van Soest法进行了进一步改进，取得了良好的效果；国际可再生能源实验室发布了高效液相色谱法测定纤维素、半纤维素、木质素，测定结果比较可靠。

本文对纤维素、半纤维素、木质素的几种测定方法进行了对比分析，旨在为测定秸秆中的纤维素、半纤维素、木质素提供方法参考，为不同检测目的的学者提供选择依据。

1 方法原理1.1 Van Soest法Van Soest法在国内又称范式法，它是将样品经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、酸不溶木质素和硅酸盐。

Source: 周同惠. 国际标准常规分析方法大全[M]. 北京: 科学出版社, 1998Source: 大连轻工业学院等. 食品分析[M]. 中国轻工业出版社,1994. ISBN:7-5019-1719-1 美国谷物化学家协会（AACC）纤维素、半纤维素和木质素的分析步骤总体流程：AD = acid detergentADF = acid detergent fiber CE = celluloseCS = cell soluble HC = hemicelluloseND = neutral detergentNDF = neutral detergent fiber1、取※g湿样（颗粒度＜10mm＝在烘箱70℃下烘干48hr。

制得干样。

研碎（一般用20~30目为宜），备用。

2、取※g干样在烘箱103℃下烘干24hr。

减重法计算含水率。

将上述样品与坩埚一起在马弗炉550℃下烘24hr（至少6hr）或600℃，2hr。

减重法计算总固体TS和灰分ASH。

3、取0.5 g风干粉碎样品测量NDF（中性洗涤纤维）分析原理：样品经热的中性洗涤剂（硫酸月桂脂纳）浸煮后，细胞内容物被溶出，残渣用热蒸馏水充分洗涤，除去样品中游离淀粉、蛋白质、矿物质，然后加入α-淀粉酶溶液以分解结合态淀粉，再用蒸馏水、丙酮洗涤，以除去残存的脂肪、色素等，洗脱后烘干测定其残渣。

该法又叫中性洗涤剂纤维素法。

（包括全部纤维素、半纤维素和木质素的总量，但不包括水溶性非消化性多糖）。

缺点：对于蛋白质、淀粉含量高的样品，易形成大量泡沫，粘度大，过滤困难。

A．试剂的制备1）1/15mol/l磷酸盐缓冲液（pH：6.8）：①取23.88 g AR级Na2HPO4.12H2O，定容至1L，配成1/15mol/L溶液；②取9.072g AR级KH2PO4，定容至1L，配成1/15mol/l溶液；③取9份磷酸氢二纳溶液和10份磷酸二氢钾溶液混合，配成pH = 6.8的缓冲溶液。

山东畜牧兽医 2017年第38卷不同方法测定饲草中NDF与ADF含量的比较姜慧新 柏杉杉 刘 栋 王兆凤 曹 阳 于家利（山东省畜牧总站 山东省草产品质量检测中心 山东 济南 250022）摘要 试验旨在研究不同测定方法对饲草中NDF 和ADF 含量的影响。

采集山东省内草捆、草粉、草颗粒和青贮饲料4类草产品8个样品，分别采用传统抽滤法和ANKOM 滤袋法测定各样品中NDF 和ADF 的含量。

结果显示：（1）滤袋法测定8个样品的NDF 值与抽滤法(GB/T20806-2006)差异不显著(P ≥0.05)，变异系数(CV)小于3%，且精密度优于国标法。

（2）滤袋法测定8个样品的ADF 值与抽滤法(NY/T1459-2007)差异不显著(P ≥0.05)，变异系数(CV)小于3%。

滤袋法测定饲草中NDF 和ADF 含量，正确度和精密度符合检验分析的要求，适于饲草中NDF 和ADF 的测定。

关键词 饲草 抽滤法 滤袋法 NDF ADF中图分类号：S816.32 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2017)08-0006-02中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)是饲草的重要营养成分，也是各类草产品质量分级的主要理化指标之一，对其快速准确的测定是科学配置牛羊日粮的前提，也是草产品质量分级的依据。

我国现有NDF [1]和ADF [2]的检测标准均采用抽滤法，该方法操作步骤控制难、耗时长，尤其是抽滤过程常常因样品堵塞过滤眼而延长检测时间、影响样品清洗程度，造成检测效率低、测定值误差大[3]。

自上个世纪90年代以来，滤袋法检测技术逐步被国内外大学和科研机构研究与应用，该检测方法用特制滤袋替代抽滤步骤，显著提高了检测效率和精确度[4]。

1993年，美国康奈尔大学和加拿大共同合作开发了ANKOM 纤维分析仪，实现了滤袋法检测技术的自动化操作，加快了该项技术在企业和检测机构的应用。

有研究表明，滤袋法检测技术中样品粉碎粒度[5-7]、滤袋种类[3,8,9]、淀粉酶[9-11]、脱脂[11]等因素影响NDF 和ADF 的检测结果，对以上技术参数优化筛选后，滤袋法测定青贮料、青干草、农作物秸秆、全混合日粮和单一饲料中的NDF 和ADF 含量与国标法和行标法基本一致[3,9,11]。

范氏测定纤维素含量法原理采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理: 植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。

植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。

酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。

将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。

试剂的配制中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和10ml 乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）；1N硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml 容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；操作步骤中性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。

将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。

煮沸完毕后，取下直筒烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的已知重量的玻璃坩埚中进行过滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗玻璃坩埚与残渣，直洗至滤液呈中性为止。