兽用生物制品无菌检验操作规程

1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。

2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。

3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。

4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。

5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。

5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。

在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。

缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。

5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。

在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。

5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。

取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。

无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。

5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。

5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。

目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。

范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。

责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》2015年版二部附录XI H。

2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。

检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。

若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。

3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。

其全过程必须严格遵守无菌操作。

防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。

操作前环境洁净度应经验证。

日常检验需对试验环境进行监控。

5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。

4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。

6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。

6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤200ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。

7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。

8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。

9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。

9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。

9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。

10、试剂及培养基的配制：10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

(SOP)无菌检验标准操作规程劲芳生物医药孵化器有限公司目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。

范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。

QC检验员责任者：质管部、化验室主任、内容： XI H。

《中国药典》2015年版二部附录、标准依据：1、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。

检查项目包括需气菌、2厌气菌及真菌检查。

若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。

级）的单向级）背景下的局部百级（A3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C流区域内或隔离系统中进行。

其全过程必须严格遵守无菌操作。

防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。

操作前环境洁净度应经验证。

日常检验需对试验环境进行监控。

、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。

5 、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。

4 、检验数量及检验量：6，供试品无菌检查若个（取较少者）或10、接种每种培养基所需的最少检验数量6.1:2%的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供1/2采用薄膜过滤法，应增加试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。

，采用薄膜过滤法200ml）≤半量（100mlV≤6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。

℃。

～℃，真菌培养温度为23287、细菌培养温度为30～35、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、8％酒精棉75双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、、真空泵、一次性使用集菌培养器。

球、紫外光灯365nm 、消毒剂配制：9 ％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。

9.1、75 。

、9.20.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）2。

中国药典2020无菌检查法无菌检查法是药品生产中非常重要的一项质量控制方法，其目的是检验药品是否符合无菌要求，以确保药品的安全性和有效性。

中国药典2020中规定了无菌检查的方法，本文将对无菌检查法进行详细介绍。

无菌检查法是指对药品样品进行无菌试验，以确定是否存在细菌、真菌或其它微生物。

无菌试验包括原料药、制剂和生物制品的无菌试验。

在中国药典2020中，无菌检查法主要分为两种：直接接种法和膜过滤法。

直接接种法是指将待检样品直接接种在培养基上，观察一定时间后是否有微生物生长。

直接接种法适用于液体制剂和原料药的无菌试验。

在进行直接接种无菌试验时，应先将试样用无菌方法处理，使细菌、真菌等微生物减少或清除。

然后将处理后的试样分别接种在含有适当培养基的培养皿上，然后密封培养皿，适当灭菌。

在培养箱中适当温度下培养一定时间，观察培养皿是否有微生物生长。

若有微生物生长，则说明样品不符合无菌要求。

膜过滤法是指将待检样品通过0.45μm孔径的膜过滤器，将微生物截留在膜上，然后将膜放置在含有适当培养基的培养皿上，观察一定时间后是否有细菌或真菌生长。

膜过滤法适用于不易接种的样品，如含固体颗粒的液体制剂和大体积原料药等。

在进行膜过滤无菌试验时，应先将膜过滤器用无菌方法处理，使膜过滤器无菌。

然后将待检样品通过膜过滤器，过滤到含有适当培养基的培养皿中，然后在适当条件下培养一定时间，观察培养皿是否有微生物生长。

若有微生物生长，则说明样品不符合无菌要求。

对于无菌试验中的阴性对照，应分别对无菌生理盐水和培养基分别进行直接接种法或膜过滤法试验，确保试验条件和操作技术正确，并且无菌生理盐水和培养基无污染。

在进行无菌检查法试验时，应严格操作，避免试验污染。

应在无菌操作台上操作，使用无菌培养皿、无菌吸头、无菌吸滤器等。

同时，应严格遵守无菌技术操作规程，确保操作正确、无菌。

总之，无菌检查法是药品生产中非常重要的一项质量控制方法。

中国药典2020中规定了无菌检查法的方法，包括直接接种法和膜过滤法。

无菌检验或纯粹检验法药典1.适用范围：适用于菌毒种、兽用生物制品的无菌检验和纯粹检验。

2.样品数量A.成品的无菌检验或纯粹检验应按每批或每个亚批进行，每批按瓶数的百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，每瓶分别进行检验。

B.制造疫苗用的各种原菌液、毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌或纯粹检验，应每瓶（罐）分别抽样进行，抽样量为2～10ml。

3.检验用培养基A.硫乙醇酸盐流体培养基（TG）Fluid Thioglycollate Medium检验厌氧菌和需氧菌B.胰酪大豆胨液体培养基（TSB）（大豆酪蛋白消化物培养基）Trypticase Soy Broth 检验真菌和需氧菌C.适宜本菌生长的培养基半成品的检验1、细菌原液（种子液）、细菌活疫苗半成品的纯粹检验：2管TG+2管本菌取供试品接种TG小管及适宜于本菌生长的其他培养基斜面各2管，每支0.2ml，1支置35～37℃培养，1支置23～25℃培养，观察3～5日，应纯粹。

2、病毒原液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验：2管TG+1管TSB取供试品接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35～37℃，1支置23～25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23～25℃培养，均培养7日，应无菌生长。

3、灭活抗原的无菌检验A、灭活细菌菌液的无菌检验 2管本菌细菌灭活后，用适于本菌生长的培养基2支，各接种0.2ml，置35～37℃培养7日，应无菌生长。

B、灭活病毒液的无菌检验 2管TG+1管本菌病毒液灭活后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35～37℃培养，1支置23～25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23～25℃培养，均培养7日，应无菌生长。

C、类毒素的无菌检验 2管TG+1管TSB毒素脱毒过滤后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35～37℃培养，1支置23～25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23～25℃培养，均培养7日，应无菌生长。

无菌检验操作规程无菌检验操作规程一、目的和适用范围为了保证实验室无菌检验的准确性和可靠性，规范无菌检验操作，并确保实验室工作人员的安全和健康，特制定本操作规程。

本操作规程适用于实验室进行无菌检验的所有工作，包括培养基制备、无菌器具处理、样品采集和处理、培养方法等方面。

二、基本要求1. 实验室应具备无菌检验所必需的设施和设备，并保持良好的清洁卫生环境。

2. 实验室工作人员应严格按照操作规程进行操作，并保持良好的个人卫生习惯。

3. 实验室应保证培养基的质量，确保无菌性和适用性。

4. 实验室应建立必要的记录和档案，对无菌检验的结果进行及时记录和分析。

三、无菌器具处理1. 确保无菌器具的质量，每批次器具在使用前应进行质量检验。

2. 器具的清洗和消毒应在专门的消毒台上进行，使用无菌的工具和材料。

3. 清洗器具时应使用无菌特效洗涤剂，并充分冲洗干净。

消毒时应使用适当浓度的消毒剂，消毒时间应符合标准要求。

4. 清洗后的器具应存放在无菌柜或密封的袋子中，以防再次污染。

四、样品采集和处理1. 采集样品前，要对采样器具进行清洁和消毒处理，并使用无菌容器保存样品。

2. 采样时要保持无菌采样器具的封闭性，避免外界环境的污染。

3. 对于液体样品，应在无菌操作台上进行，严禁倒杯操作。

对于固体样品，应在无菌条件下处理。

4. 样品采集完成后，应及时将采样器具和容器送到实验室，并妥善保存，以防止再次污染。

五、培养基制备1. 制备培养基的操作应在无菌操作台上进行，工作台面应经过清洁和消毒处理。

2. 使用的培养基应经过质量检验，确保无菌性和适用性。

3. 制备培养基时，要注意保持操作的无菌性，避免污染。

4. 制备完成的培养基应标明名称、批号和有效期，并妥善保存，避免污染和变质。

六、培养方法1. 培养前要将培养基及所需器具放置在无菌操作台上，以使其达到与环境相同的温度。

2. 培养时要保持培养器具的密封性，避免外界空气和微生物的污染。

3. 培养容器的开启和关闭要快速，并尽量避免与空气接触时间过长。

产品无菌检验操作规程一、引言无菌检验是产品质量控制中一项重要的程序。

本操作规程旨在规范无菌检验的操作步骤，确保产品达到无菌检验标准，保证产品质量和安全性。

二、检验前准备1. 检验员应按照要求穿戴无菌工作服，并佩戴口罩、手套和帽子等相关防护装备。

2. 准备好检验所需的器械和试剂，包括培养基、试管、针头、培养皿等。

3. 确保工作区域的清洁和无菌，使用消毒剂对操作台面进行消毒。

4. 检验前应对培养基和试剂进行严格的质量控制，确保其无菌性。

三、样品准备1. 根据产品特性和规定要求，选择合适的样品量，并在符合无菌操作条件下进行取样。

2. 将样品转移到无菌试管或培养皿中，避免污染。

3. 特殊产品的样品准备应根据产品特性和相应的要求进行试验。

四、培养基接种1. 使用无菌针头，将样品均匀接种于含有培养基的培养皿中。

2. 对于液体产品，将样品转移到含有培养基的试管中，并确保样品和培养基充分混合。

3. 确保培养基接种过程中无空气污染，避免培养皿或试管周围的细菌进入培养基。

五、培养条件控制1. 根据产品特性和试验要求，选择适宜的培养温度和时间，并进行相应的标注。

2. 确保培养过程中温度的稳定性和恒定性，避免对微生物生长产生影响。

3. 需要进行气体环境控制的试验，应在无菌条件下进行，并根据要求调节相应的气体浓度和流速。

4. 在培养过程中需注意观察培养皿或试管的状态，及时记录培养结果。

六、检验结果判读1. 在规定的培养时间后，检查培养皿或试管中是否有细菌菌落的形成。

2. 对于有细菌菌落形成的培养皿或试管，使用显微镜进行观察，确定是否有可疑细菌。

3. 对于液体产品，进行相关的物理化学指标测定，确定是否符合质量标准。

4. 根据样品的培养结果和其他相关数据，判断产品是否符合无菌要求。

七、记录和报告1. 检验员应及时记录无菌检验的操作步骤和检验结果，确保数据的准确性和可追溯性。

2. 写明样品的标识、培养温度和时间等相关信息。

3. 对于不合格的样品，应及时通知相关部门，并进行相应的处理。

产品无菌检查操作规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范产品无菌检查过程，使无菌检查操作、控制等符合ChP2015规定。

2.0适用范围适用于产品的无菌检查操作和控制。

3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南《微生物实验室管理规程》《菌种管理规程》《培养基管理规程》《工作环境控制程序》4.0职责微生物QC负责根据本规程执行产品无菌检查，QA负责实施监督并参与OOS调查。

5.0程序5.1术语和定义无菌检查系用于检查药品药典要求的医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查的的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

5.2环境无菌检查区域应该符合B＋A的要求，环境应该定期进行监测，监测的频率及要求参照《微生物实验室管理规程》和《工作环境控制程序》执行。

5.3仪器与设备电子天平、高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、霉菌培养箱、试管、镊子、酒精灯等。

5.4培养基硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、pH7.0NaCl-蛋白胨缓冲液或无菌生理盐水。

5.5菌种因产品无抑菌作用，选择以金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌。

5.6无菌检查操作5.6.1方法选择因产品为胶原黏膜，不溶于冲洗液，无法进行过滤，选择直接接种法进行无菌检查。

5.6.3抽样量与检验量5.6.3.1抽样量每个灭菌批应该对其中的不同生产批单独抽样检测。

产品批量抽样数量≤100 10%或4件（取较多者）100＜N≤200 10件＞500 2%或20件（取较少者）5.6.3.2检验量供试品采用无菌操作均分为两份。