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实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
单染色1、涂片：用接种环沾取细菌培养液，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。
（Tip:菌量不宜过多，以免标本过厚，影响染色结果）2、干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干，但切勿靠近火焰以免烤焦标本。
（注意：如烘干，以玻片不烫手为宜。
）3、固定：火焰固定。
将标本涂片在火焰外层内来回通过3次。
固定的作用一是杀死细菌，同时可改变对染料的通透性（因为活的细菌一般不让各种染料进入细胞内）。
再者使细菌与玻片粘附牢固，三是使细菌蛋白凝固后保持其固有的外形。
4、染色：滴加结晶紫、稀释复红或碱性美兰液1～2滴，使染液盖满涂膜，1～2分钟后，用细小流水洗去多余的染液，在空气中自然干燥或用吸水纸轻轻吸干（切忌拖、拉）。
5、镜检结果：用结晶紫染色的细菌葡萄球菌、大肠杆菌呈紫色；用复红染色者均为红色；用碱性美兰染色者均为蔚蓝色。
复染革兰染色法过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟每步染色完后均需水洗。
葡萄球菌的革兰染色变形杆菌的革兰染色链球菌的革兰染色紫碘酒红一一半半球阳杆阴阳紫阴红注：脑淋卡白抗孢除外过程1、涂片：用棉签或接种环沾取细菌培养液，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。
2、干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干。
但切勿靠近火焰以免烤焦标本。
3、固定：火焰固定。
4、革兰染色过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟5、镜检：球阳杆阴阳紫阴红化脓性球菌分离鉴定化脓性球菌主要有葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。
触酶实验原理：产生过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和氧分子-出现气泡。
操作步骤：在洁净玻片上滴一滴生理盐水，用接种环取少许细菌培养物与生理盐水中乳磨均匀，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。
结果观察：有大量气泡产生者为阳性。
一、实验背景微生物学是研究微生物的形态、结构、生理、生态、遗传、变异以及与人类生活、生产、健康等方面关系的一门科学。
在微生物学实验中，观察玻片是了解微生物形态结构的重要手段。
本实验旨在通过观察玻片，加深对微生物形态结构的认识，提高实验操作技能。
二、实验目的1. 掌握显微镜的使用方法；2. 熟悉微生物玻片的制作与观察；3. 识别常见的微生物种类；4. 培养实验操作规范和科学思维。
三、实验原理微生物玻片观察是利用显微镜观察微生物的形态结构，通过对比显微镜下的图像，可以识别微生物的种类。
实验过程中，需要掌握显微镜的使用方法，制作合格的玻片，以及观察微生物的技巧。
四、实验材料与仪器1. 实验材料：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等微生物斜面，生理盐水，革兰氏染色液，载玻片，接种环，酒精灯，显微镜等。
2. 仪器：光学显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，镊子，滴管等。
五、实验步骤1. 涂片：取一块载玻片，滴一小滴生理盐水于玻片中央，用接种环挑取少量微生物，混匀并涂成薄膜。
2. 干燥：室温自然干燥。
3. 热固定：将载玻片通过火焰2～3次，使细胞质凝固，固定细胞形态。
4. 初染：加草酸铵结晶紫溶液，约1～2分钟，水洗。
5. 媒染：滴加革兰氏碘液，冲去残水，并覆盖约1分钟，水洗。
6. 脱色：用95%乙醇滴洗至流出酒精刚刚不出现蓝色时为止，约20～30秒，立即用水冲净酒精。
7. 复染：用番红染液染1～2分钟，水洗。
8. 镜检：干燥后，置油镜下观察。
六、实验结果与分析1. 枯草芽孢杆菌：革兰氏阳性菌，呈球形或椭圆形，成链状排列，有芽孢。
2. 金黄色葡萄球菌：革兰氏阳性菌，呈球形或椭圆形，单个或成对排列，无芽孢。
3. 大肠杆菌：革兰氏阴性菌，呈杆状，单个或成链状排列，无芽孢。
通过观察玻片，可以了解到微生物的形态结构特点，为微生物的分类、鉴定和实验研究提供依据。
七、实验总结与心得体会1. 实验过程中，掌握了显微镜的使用方法，提高了实验操作技能。
