蛋黄卵磷脂的提取
- 格式:doc
- 大小:15.00 KB
- 文档页数:2
【精品】实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定一、实验目的1.了解卵磷脂的结构与性质;2.熟练掌握蛋黄中卵磷脂的提取和鉴定方法;3.通过提取和鉴定,初步了解卵磷脂的含量。
二、实验原理1.卵磷脂介绍卵磷脂是一类含有疏水性脂肪酸、酯等亲脂性成分和疏水性羟基等亲水性成分的复合脂类,具有良好的亲水性和亲油性能。
卵磷脂是细胞膜的组成成分之一,并参与了许多生命过程的调节和控制。
由于分子结构中含有类似细胞膜的磷酸基和羟基,因此卵磷脂可以与水和油相溶液中间的界面上,形成磷双层结构和微乳液,从而可以作为乳化剂、增稠剂、抗氧化剂等在食品、化妆品、医药等领域应用。
2.实验步骤将去壳的新鲜鸡蛋取出蛋黄,用盐水洗净表面的蛋白质,然后压成泥,称取25g,加入160 ml乙醇和70 ml氯仿,振荡提取24h,滤去蛋黄泥,得到提取液。
用氮气吹干提取液,再用5 ml碘化铵溶液的Ninhydrin试剂涂抹于硅胶薄层板上,加热显色,可以看到卵磷脂的蓝色斑点。
通过比对标准卵磷脂反应斑点和实验过程得到的反应斑点,可以初步测定蛋黄中卵磷脂的含量。
三、实验操作3.1 实验仪器和药品仪器:薄层色谱仪、干燥箱、氮气吹口等。
药品:鸡蛋、碘化铵溶液、Ninhydrin试剂。
三、实验注意事项1.实验过程中要避免阳光直射和空气流通;2.对于采用氮气吹干的提取液,需要注意气压和吹干时间,以免造成温度过高或时间过长的现象;3.在硅胶薄层板上涂斑注意均匀和用量的控制,避免溢出或浓度过高导致显色结果出现异常;4.硅胶薄层板在干燥箱中加热时要控制温度和时间,尽量保证试验中硅胶薄层板上出现的斑点的颜色鲜艳而稳定;5.硅胶薄层板上的斑点大小和颜色的变化需要通过标准试验和实验操作的对比来确定实验结果。
四、实验结果分析通过本实验,我们可以初步测定蛋黄中卵磷脂的含量,并通过对标准试剂和实验结果的对比,也可以得到质量较好的卵磷脂含量。
通过初步检测,我们可以确定卵磷脂含量的多少,并初步判断蛋黄的质量。
1.设计背景1.1蛋黄卵磷脂的设计背景介绍蛋黄卵磷脂作为一种天然磷脂,具有重要的生理功能和广泛的应用价值。
在我国,随着食品、医药、化妆品等行业的快速发展,对蛋黄卵磷脂的需求日益增加。
目前国内蛋黄卵磷脂的提取技术相对落后[1],提取效率低、成本高,且产品质量不稳定,严重制约了相关产业的发展。
因此,针对蛋黄卵磷脂提取方案的设计具有重要的现实意义。
蛋黄卵磷脂主要存在于蛋黄中,其含量约为8%-10%。
蛋黄卵磷脂具有独特的分子结构,使其在乳化、分散、稳定等方面具有优异的性能,因此在食品、医药、化妆品等领域具有广泛的应用[2]。
在食品工业中,蛋黄卵磷脂可作为乳化剂、稳定剂、润滑剂等,提高产品的质量和口感;在医药领域,蛋黄卵磷脂具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫等生理活性,可用于制备药物载体和保健品;在化妆品行业,蛋黄卵磷脂具有良好的保湿、修复和保护作用,可用于护肤品的研发。
近年来,尽管我国在蛋黄卵磷脂提取技术方面取得了一定的进展,但与发达国家相比,仍存在较大差距。
传统提取方法如有机溶剂提取、超声波辅助提取等存在提取效率低、成本高、环境污染等问题[3]。
研究一种高效、环保、低成本的蛋黄卵磷脂提取方案,对于提高我国蛋黄卵磷脂产品的市场竞争力、促进相关产业可持续发展具有重要意义。
1.2卵磷脂主要化学成分和药理作用1.2.1主要化学成分磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine, PC):这是卵磷脂中最主要的成分,占卵磷脂总量的40%-50%。
磷脂酰胆碱由甘油、两个脂肪酸链、磷酸和一个胆碱分子组成,其分子结构决定了其在细胞膜中的重要作用。
磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine, PE):这是卵磷脂中的另一主要成分,含量通常在20%-30%之间。
磷脂酰乙醇胺的结构与磷脂酰胆碱类似,但其所连接的亲水性头部基团是乙醇胺。
磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol, PI):磷脂酰肌醇在卵磷脂中的含量相对较少,大约占5%-10%。
蛋黄卵磷脂的提取方法研究
蛋黄卵磷脂是一种重要的营养成分,它含有丰富的卵磷脂、胆碱、不饱和脂肪酸等成分,对人体健康有着重要的作用。
因此,研究蛋黄卵磷脂的提取方法具有重要的意义。
常用的蛋黄卵磷脂提取方法主要有以下几种:
1. 酸水解法
酸水解法是将蛋黄中的卵磷脂通过酸水解反应分离出来的方法。
具体操作步骤为:将蛋黄加入酸性溶液中,使卵磷脂与蛋白质分离,然后通过离心、过滤等步骤分离出卵磷脂。
2. 溶剂萃取法
溶剂萃取法是将蛋黄中的卵磷脂通过溶剂的选择性萃取分离出来的方法。
具体操作步骤为:将蛋黄加入有机溶剂中,使卵磷脂与蛋白质分离,然后通过蒸发、干燥等步骤分离出卵磷脂。
3. 超声波法
超声波法是利用超声波的作用将蛋黄中的卵磷脂分离出来的方法。
具体操作步骤为:将蛋黄加入水中,然后通过超声波的作用使卵磷脂与水分离,最后通过离心、过滤等步骤分离出卵磷脂。
以上三种方法各有优缺点,选择合适的方法需要根据实际情况进行
选择。
在实际应用中,可以根据需要选择不同的方法进行提取。
蛋黄卵磷脂的提取方法研究对于提高蛋黄卵磷脂的利用价值具有重要的意义。
未来,我们还需要进一步深入研究,探索更加高效、环保的提取方法,为蛋黄卵磷脂的应用开发提供更好的技术支持。
蛋黄中提取卵磷脂技术人和动物的肾、肝、小肠和其他器官内均有卵磷脂酶存在,卵磷脂首先水解而生成甘油、脂肪酸、磷酸及胆碱,其中胆碱能在肝脏中对脂肪代谢起作用。
最重要的是它能参与合成乙酰胆碱而成为神经系统活动的重要物质。
在药用方面,可作强身滋补剂,又能治疗婴儿湿疹,可配制成注射剂及乳剂应用,又可作生物试剂,用于细菌培养,其中尤以培养固氮菌及磷菌效果很好。
1卵磷脂的特性卵磷脂主要存在于蛋黄中,含量为10%左右。
卵磷脂溶于乙醚、乙醇、甲醇、三氯甲烷等脂肪溶剂中,但不能溶解于丙酮,也不溶解于水,它的亲水性很强,能在水中膨胀而生成乳状液和胶体溶液,卵磷脂也能与酸、碱和其他盐类如氯化镉等相结合。
卵磷脂一般为淡黄色,但由于卵磷脂分子中含有不饱和脂肪酸,所以很容易氧化而逐渐由淡黄色变为棕褐色。
卵磷脂在空气中易被氧化,同时它能与蛋白质及其他物质生成化合物,所以卵磷脂一般很难得到结晶状态,而是无晶性物质。
2卵磷脂的提取2.1原料及其处理鸡蛋或变质发臭的次劣蛋及全蛋粉、蛋黄粉、冰全蛋和冰蛋黄,均可用于提炼卵磷脂。
除已成为干燥状态的全蛋粉和蛋黄粉外,其他原料还要经过一定的处理。
将鸡蛋或变质发臭的次劣蛋放在存器内,送入-10℃冷库内,使蛋的内容物凝固,然后取出,打蛋壳,将蛋黄分离出来,集中在铝质存器或搪瓷盘中。
如果黄白不能分离的变质蛋或打开壳后取出的蛋液,黄白不能分离的,若不及时提炼,存放在搪瓷盘中,也应送入-10℃冷库里贮存备用。
变质发臭的次劣冰蛋,要分装在搪瓷盘或铝质盘里贮存备用。
将上述原料放入烘箱或烘房内,在55℃下烘6h左右便成干燥状态,研磨成粉末,贮存备用。
2.2提炼卵磷脂2.2.1浸提2.2.1.1浸液的配制处理过的原料(即干燥蛋粉)1份,96%乙醇1份,98.5%甲醇1份。
2.2.1.2浸泡将上面配制好的醇浸液放入大釉缸中,徐徐加入干燥蛋粉,边加边搅,蛋粉加完后,再继续不断地搅拌4~5h。
醇浸液的液面务必高出原料面约30cm,搅拌4~5h后放在室温下使其继续浸泡24~48h,甚至更长时间。
卵磷脂的提取实验报告卵磷脂的提取实验报告引言:卵磷脂是一种常见的磷脂类化合物,存在于生物体细胞膜中,具有重要的生理功能。
本实验旨在通过提取卵磷脂,了解其提取方法和应用。
实验材料与方法:材料:鸡蛋、乙醇、氯仿、氯化钠仪器:搅拌器、离心机、玻璃瓶、滤纸、移液管等步骤:1. 取适量鸡蛋,将蛋黄与蛋清分离。
2. 将蛋黄放入搅拌器中,加入适量乙醇,搅拌均匀。
3. 将搅拌后的混合物倒入离心机离心,离心后分为两层,上层为乙醇层,下层为沉淀层。
4. 将上层乙醇层转移到另一个玻璃瓶中,加入适量氯化钠,摇匀。
5. 加入适量氯仿,摇匀后放置静置。
6. 静置后,分为两层,上层为氯仿层,下层为水层。
7. 将上层氯仿层转移到另一个玻璃瓶中,加入适量氯化钠,摇匀。
8. 加入适量水,摇匀后放置静置。
9. 静置后,分为两层,上层为水层,下层为氯仿层。
10. 将上层水层转移到另一个玻璃瓶中,加入适量氯化钠,摇匀。
11. 加入适量氯仿,摇匀后放置静置。
12. 静置后,分为两层,上层为氯仿层,下层为水层。
13. 将上层氯仿层转移到另一个玻璃瓶中,加入适量氯化钠,摇匀。
14. 加入适量水,摇匀后放置静置。
15. 静置后,分为两层,上层为水层,下层为氯仿层。
结果与讨论:经过多次提取,我们成功地从鸡蛋中提取到了卵磷脂。
实验过程中,通过乙醇、氯化钠和氯仿的配合使用,能够有效地分离出卵磷脂。
乙醇的作用是溶解蛋黄中的卵磷脂,而氯化钠则用于调节溶液的渗透压,帮助分离。
氯仿则是用来提取卵磷脂的有机溶剂,能够与卵磷脂形成复合物,从而实现分离。
卵磷脂作为一种重要的生物大分子,具有多种生理功能。
首先,卵磷脂是细胞膜的主要组成成分之一,能够维持细胞膜的完整性和稳定性。
其次,卵磷脂还参与细胞信号传导,调节细胞功能。
此外,卵磷脂还具有良好的乳化和分散性能,常被用作食品添加剂和药物载体。
在实际应用中,卵磷脂的提取方法可以根据需要进行调整。
例如,可以根据不同来源的卵磷脂进行提取,以获得特定的卵磷脂种类。
实验申请实验项目:蛋黄中卵磷脂的提取与 TLC 检测实验原料:鲜鸡蛋、 纯化卵磷脂实验试剂: 200ml 丙酮、 150ml 乙醇 、50ml 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇,均为分析纯试剂.实验仪器: 旋转蒸发仪、 真空泵、 布氏漏斗、 抽滤瓶、 吹风机、 层析缸、 玻璃板、电子天平。
辅助器材:毛细管(两支)、玻璃棒、滤纸、100ml 量筒(2个)、烧杯、纱布、镊子、 胶头滴管圆底烧瓶等。
实验目的:1. 掌握从动物中提取有效成分的一般原理和方法。
2. 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。
3. 巩固抽滤等基本操作。
4. 了解薄层层析色谱法的原理及操作。
实验原理:卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中,蛋黄中含量较高,约10%。
可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质,从蛋黄中分离得到。
吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同,及展开剂对它们的解吸附能力的不同,使各成分达到分离。
在硅胶薄层板上,样品中的两成分是两种结构近似的染料,在展开剂四氯化碳的作用下。
在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸,再吸附,再解吸,由于极性不同从而分离,展开结束以后,会在薄层板上形成斑点,混合物中的成分得以分离。
参考文献: 刘宝全,所给实验资料.tpml-1实验操作实验操作步骤实验一卵磷脂的制备与提取1.取四个煮熟的鸡蛋,分别将其刨壳,把四个鸡蛋的总的蛋壳,蛋白和蛋黄分别称重并记录数据。
2.将所得蛋黄全部放入烧杯中,用筷子捣碎,取100ml丙酮倒入其中,搅拌30min成糊状后用6层厚纱布过滤,收集滤渣。
3.将滤渣再次放入烧杯,取100ml丙酮倒入杯中,重复上步操作,收集滤渣。
4.制备乙醇-石油醚混合溶剂。
用量筒分别量取50ml石油醚和150ml乙醇,放入烧杯中混合均匀。
5.取100ml混合液放入盛有滤渣的烧杯中,搅拌30min后用布氏漏斗抽滤,收集滤液。
6.将抽滤后的滤渣重新放入烧瓶中,再取100ml混合液浸泡搅拌30min,然后抽滤,将所有滤液收集,倒入圆底烧瓶中进行旋转蒸发,旋转蒸发仪温度设为40摄氏度。
实验五:蛋黄中卵磷脂的提取、纯化与鉴定一、实验目的⏹掌握从鲜鸡蛋中提取卵磷脂的方法与原理。
⏹卵磷脂鉴定的方法与原理。
⏹加深了解磷脂类物质的结构和性质。
二、实验内容磷脂是一类含有磷酸的脂类,机体中主要含有两大类磷脂,由甘油构成的磷脂称为甘油磷脂(phosphoglyceride);由神经鞘氨醇构成的磷脂,称为鞘磷脂(sphingolipid)。
其结构具有由磷酸相连的取代基团(含氨碱或醇类)构成的亲水头(hydrophilic head)和由脂肪酸链构成的疏水尾(hydrophobic tail)。
在生物膜中磷脂的亲水头位于膜表面,而疏水尾位于膜内侧。
磷脂是重要的两亲物质,它们是生物膜的重要组分、乳化剂和表面活性剂。
磷脂依照氨基醇的不同可分:(1)磷脂酰胆碱(卵磷脂)(PC),分布:植物主要有大豆等,动物主要有脑、精液、肾上腺、红细胞,蛋卵黄(8-10%)。
其主要作用是控制肝脂代谢,防止脂肪肝的形成;(2)、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)(PE),参与血液凝结;(3)、磷脂酰丝氨酸(PS);(4)、磷脂酰肌醇(PI);(5)、磷脂酰甘油(PG);(6)、二磷脂酰甘油(心磷脂)。
蛋黄磷脂属动物胚胎磷脂,含有大量的胆固醇和甘油三酯及许多人体不可缺少的营养物质和微量元素。
卵磷脂是生命的基础物质,人类生命自始至终都离不开它的滋养和保护。
卵磷脂存在于每个细胞之中,更多的是集中在脑及神经系统、血液循环系统、免疫系统以及肝、心、肾等重要器官。
卵磷脂也被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。
蛋黄卵磷脂可将胆固醇乳化为极细的颗粒,这种微细的乳化胆固醇颗粒可透过血管壁被组织利用,而不会使血浆中的胆固醇增加。
三、实验原理、方法和手段原理一:卵磷脂是生物体组织细胞的重要成分,主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心、卵等组织中,尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。
卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮,利用此性质可将其与中性脂肪分离开;卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶,利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。
蛋黄卵磷脂的提取
[实验目的]
1.了解从动物中提取有效物质的一般原理和方法。
2.更好的理解和利用相似相容原理。
3.熟悉从蛋黄中提取卵磷脂的操作。
4.掌握薄层液相色谱的原理及操作方法。
[仪器与试剂]
烧杯、量筒、三口瓶(100mL)、圆底烧瓶(100mL)、烧杯、分液漏斗、旋转蒸发仪、水浴锅、分液漏斗。
氯仿、无水乙醇、乙醚、三乙胺、氯化钠溶液(10%)、无水MgSO4、丙酮、GF254硅胶板。
[实验原理]
实验采用混合溶液萃取法。
薄层色谱法又称薄板色谱法。
薄板色谱法按其固定相性质和分离机理可分为:吸附薄层法,分配薄层法,离子交换薄层法及尺寸排阻薄层法等。
薄层色谱法基本原理实质是吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程。
[实验步骤]
1.蛋黄卵磷脂的提取
取新鲜的熟鸡蛋一个,完整的取出蛋黄,置于装有搅拌器、回流冷凝管和温度计的100mL三口瓶中,加入20mL混合溶剂(氯仿:乙醇=1:3),控制反应温度为35—40℃,搅拌30min。
抽滤,滤饼在同样条件下再提取一次。
滤液转入分液漏斗中,以5mL氯仿清洗抽滤瓶后一并加入分液漏斗中,加入40mL 10%氯化钠溶液。
分出氯仿层,用无水MgSO4干燥。
干燥后的氯仿层减压蒸馏近干,加入10mL丙酮,搅拌,冰水冷却后分离沉淀物。
用可能少的乙醚溶解沉淀物,转入烧杯,用1mL乙醚清洗烧瓶后也转入烧杯。
在搅拌下缓慢加入10mL丙酮,冰水冷却后除去溶剂,将产品置于真空干燥箱中干燥,得到白色或浅黄色蜡状卵磷脂产品,计算产率。
2.薄层色谱法(TLC)定性检测
点样:取管口平整的毛细管吸取配置好的2%的卵磷脂氯仿溶液,点在薄层板上,点的直径一般为2-3cm,样品点在离薄层一端为1cm左右的起始线上,离板边约有1cm的距离。
展开:点样完毕,待溶剂挥干后,用氯仿、乙醇、三乙胺与水(体积比=1:1:1:0.3)的混合溶剂中进行展开,其方法是将薄层板斜放在盛有展开剂的层析槽内,薄板与展开剂液面成15°左右的夹角,点有样品的一端浸入溶剂中,深达0.5cm左右、切勿使溶剂浸没原点,盖好层析槽盖,当溶剂前沿达板的另一端1cm左右时,即可去除薄层板,标出溶剂前沿位置。
显色:取出薄层板,立即喷洒重铬酸钾显色剂(0.6%的重铬酸钾的55%的硫酸),120℃烘干10min使其显色,观察到红色斑点,计算R f值。
[要点与注意事项]
1.卵磷脂提取是应注意提取温度,卵磷脂中常含有不饱和脂肪酸,易氧化,使颜色变深,故需严格控制提取温度在45℃以下。
2.使用丙酮、乙醚,室内应严禁避免明火,并有良好的通风条件。
3.薄层色谱法定性检测时要注意展开剂的极性,要小心仔细配置。
[思考题]
1.单一溶剂在蛋黄卵磷脂提取中的缺陷是什么?
答:如果只用极性溶剂如甲醇、乙醇对脂质溶解能力差;单一的非极性溶液乙烷乙醚、氯仿
难以破坏脂蛋白复合物。
而蛋黄是一下种相当稳定的乳状液,其中乳化剂是磷脂和蛋白质的结合脂蛋白复合物,要把磷脂完全提出来,所用溶剂必须能破坏这种复合物,所以单一溶剂不能满足要求。
2.化学方法鉴别磷脂举例。
答:薄层色谱法对胡麻卵磷脂进行定性鉴别,表明胡麻卵磷脂主要成分是磷脂酰胆碱(PC)。
3.影响R f值的因素。
答:它与展开剂的极性有关,若R f太小,要把极性调大;太大。
要把极性调小。
在展开剂一定时,温度对与分离度的印象特别明显,影响R f。
R f的大小与物质结构、溶剂结构、滤纸种类、温度、PH值、时间等有关。
但同样条件下只和物质的分配系数有关。