细菌鉴定中常用的生理生化反应.

细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。

用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。

（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。

其代谢产物也不同。

例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。

酸的生成可通过指示剂来确定。

在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。

气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。

（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。

此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。

因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。

如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。

因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。

（4）大分子代谢的实验。

靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。

硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。

为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。

明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。

淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。

它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。

细菌的生理、生化实验简介微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。

因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。

可用指示剂及发酵管检验。

试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。

接种后，置36±°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。

本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。

一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。

淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。

试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培育5天。

然后将碘试剂直接滴浸于培育表面，假设为液体培育物，那么加数滴碘试剂于试管中。

当即检视结果，阳性反映（淀粉被分解）为琼脂培育基呈深蓝色、菌落或培育物周围显现无色透明环、或肉汤颜色无转变。

阴性反映那么无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。

培养基pH必须为中性或微酸性，以最适。

淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。

三：V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。

生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。

本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。

二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。

三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。

四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。

结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。

若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。

2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。

3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。

4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。

结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。

微生物鉴定的生理生化反应各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。

用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。

利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。

生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。

一、碳水化合物的代谢试验1．糖（醇、苷）类发酵试验（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。

检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。

(2)方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。

所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。

将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。

若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。

(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。

不分解糖则无变化。

(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。

即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。

表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类单糖四碳糖：赤藓糖, 五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖果糖半乳糖甘露糖双糖蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖菊糖（多分子果糖）淀粉醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇非糖类肌醇2．葡萄糖代谢类型鉴别试验(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。

在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。

本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。

1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。

如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。

2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。

如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。

通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。

3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。

如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。

通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。

4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。

在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。

如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。

通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读知识专栏：细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读封面图片：一位实验室技术人员在显微镜下观察细菌培养物导语：在细菌学研究领域，生理生化反应实验是常用的方法之一，它可以帮助我们了解细菌的特性、代谢途径以及与环境的相互作用。

本文将对细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告进行具体解读，帮助读者更深入地了解细菌的鉴定过程及意义。

一、实验背景和目的在细菌鉴定中，我们经常需要对待测的细菌进行分类和鉴定。

而生理生化反应实验是一种非常重要的手段，能够通过观察细菌对不同化学试剂的反应，以及产物的生成情况等特征，来判断细菌的性质。

本实验的目的即是通过几项常用的生理生化反应实验，进一步探究待测细菌的特性和代谢途径。

二、实验方法1. 大肠杆菌的蛋白酶试验（编号：1）在本实验中，我们采用的是凝固酶试纸。

观察到试剂的颜色发生变化，即从黄色转变为品红色，说明大肠杆菌在此试验中结果为阳性。

进一步解读：凝固酶是一种能够水解胶原蛋白的酶，大肠杆菌能够产生这种酶，因此在这一试验中呈阳性反应。

这可以帮助我们进一步确认待测菌株是大肠杆菌，从而对其进行鉴定分类工作。

2. 肺炎克雷伯氏菌的氧化/发酵试验（编号：2）我们使用菲斯氏培养基进行此实验，观察培养基颜色变化。

如果培养基由绿色变为黄色，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；如果培养基继续保持绿色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。

进一步解读：肺炎克雷伯氏菌对葡萄糖的氧化/发酵反应具有很重要的意义。

通过此实验，我们可以判断菌株的能量代谢途径是氧化还是发酵，并且可以辅助鉴定菌株的种类。

3. 金黄色葡萄球菌的氧化/发酵试验（编号：3）氧化/发酵试验在金黄色葡萄球菌的鉴定中也扮演着重要的角色。

在此实验中，当培养基由紫色变为黄色时，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；若培养基继续保持紫色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。

进一步解读：金黄色葡萄球菌的氧化/发酵反应结果也能帮助我们确定菌株的代谢途径，并对其分类鉴定提供重要依据。

细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。

这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。

以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。

结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。

2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。

营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。

3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。

5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。

淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。

蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。

6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。

7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。

8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。