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诺如病毒实验室检测诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。
NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。
诺瓦克病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中分离的病原。
2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒（Norovirus,NV）。
诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒（Sapporo-like Virus，SLV），正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV)，合称为人类杯状病毒。
诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。
诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。
诺如病毒有许多共同特征：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。
诺如病毒根据遗传性分为5个基因组，至少有29个基因群，其中基因组I （GGI）有8个基因群，基因组II（GGII）有17个基因群，基因组III（GGIII）有2个基因群，基因组IV（GGIV）和基因组V（GGV）各有1个基因群。
与人类有关的主要是GGI、GGII和GGIV。
一、标本采集注意事项：粪便标本应在发病首日采集，至多不能超过发病急性期(48～72h)，此时为稀、软便，病毒排出量最多。
学校及托幼机构诺如病毒感染性腹泻疫情处置指引一、学校、托幼机构主要工作内容学校及托幼机构在未出现疫情时应根据《指引》要求做好日常防控工作，一旦出现聚集性或暴发疫情时，应及时向辖区疾控机构和社区卫生服务中心报告。
在疫情调查处置阶段成立传染病防控小组，明确个人分工，配合辖区疾控中心和社区卫生服务中心开展流行病学调查、病例搜索及报告、病例隔离和环境消毒等工作。
学校、托幼机构作为疫情发生单位是负责控制措施落实的主体责任者，主要工作内容如下：（一）病例管理（二）外环境消毒（三）食品安全管理（四）水卫生管理（五）配合疾控中心工作人员做好疫情处置相关工作（六）暂停聚集性活动（七）开展健康教育二、疫情处置措施（一）病例管理工作1. 加强晨、午检校医或保健老师每天早晨学生进入学校前开展晨检工作。
对于报告有腹泻、呕吐等症状的学生应及时登记并录入晨检系统，- 2 -并通知病例进行停课隔离。
疫情严重期间，学校须增设午检。
疫情发生期间每天上班前询问职工身体健康状况并登记，如出现呕吐或腹泻应立即调离岗位并隔离治疗。
学校托幼机构学生健康监测日报表见附件1。
2. 做好因病缺勤登记工作各班级或年级安排专人进行因病缺勤登记，并设置因病缺勤登记本，及时了解学生缺勤原因，并跟踪其疾病进展及恢复状况。
学生因病缺课情况每日登记表参考附件2。
3. 病例隔离病例均应暂停上课，隔离期为症状完全消失后72小时。
轻症患者可居家隔离治疗，症状重者需送医院按肠道传染病隔离治疗。
寄宿学校须划分足够的独立区域对病例进行隔离。
隔离宿舍设置指引见附件3。
4. 病例日报及零报告疫情发生期间，校方须实施病例日报及零报告制度。
校内病例汇总可按照班级—年级—学校的方式逐级上报，最后汇总至校医室或学校其它指定人员，于当日10时前将病例一览表上报至区疾控中心。
病例为零时亦须逐级、按时上报。
进行病例登记时应按照病例一览表要求进行信息填报，搜索到的病例应及时隔离。
诺如病毒感染性腹泻暴发调查病例一览表见附件4。
附件9广东省诺如病毒感染性腹泻样品检测工作指引诺如病毒的实验室检测方法主要包括核酸检测和抗原检测，核酸检测是目前国际上最常用的检测方法。
这些方法各有优缺点，在操作时可根据技术水平、经济条件和使用目的进行选择，对于检测结果应参照临床症状和流行病学特征进行分析。
一、标本处理（一）粪便将1ml PBS加入至1.5ml EP管或2ml 螺口管中，再加入0.1g 固体粪便标本或0.1ml液体粪便标本，臵于漩涡震荡器充分混匀，≥5000r/min离心5min，或≥3000r/min离心30min，吸上清，制成10%的便悬液，立即检测或臵-20℃冰箱保存备用。
注意便悬液如果过浓，可能导致提取的核酸中抑制物过多，影响核酸检测结果。
（二）肛拭子旋涡振荡器震荡15秒后，吸上清立即检测或臵-20℃冰箱保存备用。
（三）呕吐物臵于漩涡震荡器充分混匀，≥5000r/min离心5min，或≥3000r/min 离心30min，吸上清，立即检测或臵-20℃冰箱保存备用。
（四）环境涂抹标本经旋涡振荡器震荡15秒后，吸上清立即检测或臵-20℃冰箱保存备用。
二、标本检测（一）核酸检测- 38 -1.核酸提取目前有多种商业试剂可用于粪便等标本的核酸提取，可用病毒RNA提取试剂，也可用RNA&DNA总核酸提取试剂，具体提取方法按照试剂说明书。
采用总核酸提取试剂，在使用逆转录聚合酶链反应扩增核酸时容易受到来自人、细菌等非目标物种基因的影响，产生假阳性，因此以RNA提取试剂为佳。
核酸提取完成后，尽快放入冰箱保存，如果3天内开展核酸检测，10℃以下保存即可，超过这个时间需放入-70℃冰箱保存。
注意尽量不要让核酸被环境中、手套上的细菌、灰尘中含有的RNA酶降解，也不要反复冻融。
2．荧光逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)本方法是诺如病毒核酸检测的首选方法，特异性和敏感性较高，出现假阳性的机率也远低于传统RT-PCR，但受病毒核酸变异影响较RT-PCR大。
病毒性腹泻标本的处理和病原检测方法一、标本的处理制备10％的便悬液：将粪便标本加到1.5mlEP管中，加入标本处理液，震荡3次，每次10秒。
然后静臵10分钟，再以8千转/分钟离心5分钟，吸取上清进行下一步试验或-20℃短期保存。
二、轮状病毒ELISA检测采用ProSpect轮状病毒ELISA检测试剂盒，详细事宜请参考试剂盒说明书。
（一）检测前：1将试剂和待检测标本臵于室温（15～30℃）30min。
2每次检测均至少一个阳性对照和一个阴性对照。
3空白对照：空气4洗液的配制：1倍体积的洗液浓缩液（WASH BUFFER×10）加9倍体积的去离子水，当天用当天配。
（二）检测步骤：1将需要数量的微孔板臵于微孔板架上。
2每孔加入100µl 10％便悬液以及阴性对照，阳性对照。
3每孔加入2滴（或100µl）酶结合物（conjugate），轻微震荡混匀或用枪头轻柔混匀（上下5次左右），20～30℃静臵60±5min。
4每孔加入350～400µl洗液（用手轻微摇动1 min左右），弃去洗液，在卫生纸上拍干，共洗5次。
5每孔加入2滴（或100µl）底物液（Substrate），20～30℃静臵10min。
待蓝色显现后迅速观察颜色。
6每孔加入2滴（或100µl）终止液（Stop solution），充分混匀。
7读取OD450值，打印输出或记录值。
结果必须在加入终止液后30min内读取。
8如果酶标仪有参考波长620nm或630nm可供使用，最好使用双波长检测。
（三）结果判定：1阴性对照：肉眼观察无色或OD450值<0.15。
2阳性对照：肉眼观察呈现独特的蓝色或OD450值>0.50。
3临界值（cut-off value）＝阴性对照OD450值平均值＋0.10。
4标本：a)肉眼观察蓝色比阴性对照颜色深判定为阳性，肉眼观察无色判定为阴性。
b)OD450值>临界值＋0.01判定为阳性，<临界值－0.01判定为阴性，OD450值在临界值±0.01范围内判定为可疑，应重复检测或重新取样。
深圳市感染性腹泻病原谱哨点监测工作方案（2015版）感染性腹泻是我市急性传染病中发病数最多、流行面最广、影响群众生活生产的一组疾病。
其中霍乱虽得到有效控制，但每隔几年仍会有散发病例出现；伤寒副伤寒、细菌性痢疾的发病数和发病率一直位居全省前列；而其它感染性腹泻病发病数也一直居高不下，常年位居所有传染病的首位或第二位，所引起的暴发疫情也不断出现，疫情防控压力仍较大。
鉴于感染性腹泻包含众多病种且病原更为复杂多样，单纯的症状监测和单一的腹泻病原监测体系已难以适应当前防控工作的需要，为进一步完善重点肠道传染病监测预警系统，及时有效处置感染性腹泻暴发疫情，遏制肠道传染病高发态势，结合深圳实际，特制定本方案。
一、目的（一）建立以实验室为基础的感染性腹泻病原谱监测网络，了解深圳市感染性腹泻的病原谱构成，追踪病原谱变迁趋势，探明病原毒力因子。
（二）构建病原菌分子分型数据库，并结合病例流行病学资料和病原学资料为暴发疫情的早期预警预测提供基础数据，探索一种更灵敏的疾病监测模式。
（三）协助早期识别特定感染性腹泻的暴发疫情，分析流行因素，引导对重点地区和人群的主动监测。
（四）对菌株进行抗菌药物敏感性监测，指导临床合理的治疗和预防用药。
（五）促进临床实验室和公共卫生实验室数据的交流。
（六）为食品安全微生物风险评估提供疾病监测的本底数据。
二、工作内容（一）细菌性腹泻监测。
1.监测病例的纳入标准。
（1）每日排便3次或以上，且大便性状有改变呈稀便、水样便、粘液便或脓血便等。
（2）监测病例的排除标准：符合下列标准中的其中一条即可排除。
①已经使用抗生素的患者（针对细菌性腹泻）；②不恰当服用化学物质、食用毒蕈等所导致的腹泻患者；③可以明确诊断为阿米巴痢疾等寄生虫性腹泻的病例；④慢性腹泻超过2周的病例。
2.监测内容。
（1）标本数量和采样要求。
哨点医院采集门诊腹泻/腹泻住院病例急性期（发病3日内）的粪便样本（包括肛拭子）或呕吐物进行致病菌的分离培养。
附件3广东省诺如病毒感染性腹泻暴发现场调查收集信息一览表需收集资料已收集的请填一般情况社区基本信息（位置、面积、自然村、人数等）单位（学校）基本信息（单位名称、成立时间、性质、地点）各部门（班级）的花名册若无花名册，则需各部门（班级）的名称和人数部门（班级）的楼层分布单位（学校）内、外住宿人数宿舍楼数量和名称宿舍房间的楼层分布每个宿舍房间住宿人数近期天气异常（如长期暴雨）或灾害（如内涝）情况其它：病例搜索和个案调查辖区内的其它集体单位是否发生类似疫情辖区内医疗机构/医务室近2个月每日腹泻病例数、就诊总人数近一个月学生缺勤登记近一个月教师考勤记录近一个月厨工考勤记录近一周是否有厨工发生呕吐、腹泻等胃肠道症状病例调查个案表和一览表（手机、宿舍务必登记！务必区分是否现症病例和轻/重症）病例血常规检测结果，有检测的全部收集其它：食品卫生单位供餐方式食堂的数量和名称每个食堂用餐人数/打卡记录近一周内每餐食谱备餐流程食堂用水来源厨工调查一览表其它：- 20 -需收集资料已收集的请填水卫生生活用水来源及使用情况本单位生活用水管网分布图饮水来源及使用情况桶装水分配记录社区供水管网图（标记与该单位相同分支供水管线上的集体单位）自来水处理工艺流程（重点是何种方式加氯，加氯的频次，每次加氯的量）直饮水处理工艺流程（重点是过滤器使用时间、过滤膜更换记录及维护记录）最近一个月社区/单位供水管网维修记录最近一个月学校内各类生活用水的水质检测报告相同供水区域内集体单位是否发生类似疫情其它：环境卫生教室、宿舍、食堂、厕所等场所及外周环境通风及清洁卫生现况洗手液或肥皂、洗手设施等配备及使用情况场所被病例粪便、呕吐物污染情况现场清洁消毒情况其它：个人防护护理人员的防护及清洁消毒情况清洁人员的防护及清洁消毒情况其它：- 21 -。
感染性标本的采样、储存、运输的具体操作方法所有的采样工作都必须根据疾病的特点，在严格做好防护的基础上进行。
常见传染病需采集的标本见表1（一）呼吸道标本的采集（如不明原因肺炎）1．采样器材拭子、压舌板、塑料瓶、采样杯或器皿、15ml 的离心管、移液管、注射器、10ml真空取血管、冰壶、采样运输管、有生物安全标志或标有“感染性物质”的外包装容器（见图1）；其他：酒精灯、剪刀、纸漏斗、酒精、碘酒、吸耳球、塑料袋、记号笔、标签、登记表等。
2．采集方法（1）鼻拭子（上呼吸道）：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
以同一拭子拭两侧鼻孔。
将棉签浸入4-5 ml采样液的管中，尾部弃去。
然后，塞紧或盖好管盖。
（2）咽拭子（上呼吸道）：用棉签用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁（见图2），同样将棉签头浸入4-5 ml采样液的管中，尾部弃去，塞紧或盖好管盖。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
（3）鼻洗液（上呼吸道）：患者取坐姿，头稍后仰，用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭鼻腔。
然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
（4）鼻咽抽取物或抽取气管和支气管分泌物（下呼吸道）：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取气管和支气管分泌物。
先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。
近来国内有用小孩导尿管接在50 ml注射器上来替代收集器。
（5）漱口液：用10 ml采样液漱口。
漱时让患者头部微后仰，发噢声，让洗液在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集漱液。
注：取漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有，含漱液中不应含抗菌素。
（6）肺活检材料：肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入上述提到的抗菌素。
