培养基的制备、器具包扎和灭菌

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置原则和方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。

待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。

此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。

四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。

将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。

洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。

2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。

包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。

（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。

竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）n源：包括无机氮和有机氮。

（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。

微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

无菌操作技术—仪器设备的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作是在实验室和医疗环境中非常重要的技术，它的目的是防止细菌、病毒和其他微生物的污染，并确保实验结果的准确性和可靠性。

本文档将介绍仪器设备的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制等无菌操作技术。

仪器设备的清洗在使用仪器设备之前，必须先进行彻底的清洗。

以下是清洗仪器设备的基本步骤：1. 检查仪器设备是否有明显的污垢或残留物，如果有，先用洗涤剂和温水进行初步清洗。

2. 使用专用清洗剂和刷子进行细致清洗，注意清洗到难以清除的细微部位。

3. 彻底冲洗仪器设备，确保清洗剂和污垢完全去除。

4. 使用干净的纱布或纸巾擦干仪器设备表面，确保完全干燥。

仪器设备的包扎包扎仪器设备可以防止其在无菌操作中被细菌和其他微生物污染。

以下是包扎仪器设备的基本步骤：1. 在开始包扎之前，将仪器设备放置在干净的工作台上。

2. 使用干净的无尘纱布或无纺布，将仪器设备进行包裹。

确保完全覆盖仪器设备的表面，并将包裹完全封闭。

3. 使用特殊的无菌胶带或绳子固定包扎，确保包裹牢固。

仪器设备的灭菌灭菌是无菌操作过程中不可或缺的一步，其目的是彻底杀灭仪器设备表面和内部的细菌、病毒和其他微生物。

以下是仪器设备灭菌的常用方法：1. 高温湿热灭菌：将仪器设备放置在高压蒸汽灭菌器中，经过一定时间和温度的蒸汽处理，达到灭菌的效果。

2. 乙烯氧化灭菌：将仪器设备放置在乙烯氧化室中，经过一定时间和浓度的乙烯氧化处理，达到灭菌的效果。

3. 紫外线灭菌：将仪器设备暴露在紫外线下，使细菌和其他微生物受到紫外线的照射而被杀灭。

培养基的配制培养基是进行微生物培养的基础，其配制需要严格遵循一定的步骤和比例。

以下是培养基配制的常见步骤：1. 根据所需的培养基种类和用途，准备相应的原料和试剂，如蛋白胨、琼脂等。

2. 根据配方比例，将原料和试剂称量或计量，然后加入适量的蒸馏水。

3. 搅拌混合溶液，直到原料和试剂完全溶解。

4. 调整溶液的pH值，确保其适合微生物的生长。

无菌操作技术—用品的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术是实验室中非常重要的技术，可以保证实验结果的准确性和可靠性。

以下是用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的一些建议和步骤：用品的清洗在进行无菌实验前，确保所有用品是干净的，没有任何污染物。

1. 使用洗碗液和温水彻底清洗所有用品，包括培养皿、试管、移液器等。

2. 用专用的刷子和洗涤剂清洗玻璃器皿，保证器皿内外表面完全清洁。

3. 用去离子水或者超纯水冲洗所有用品，以除去洗涤剂和其他杂质。

4. 沥干并摆放用品在干净的工作台上。

用品的包扎包扎是为了防止用品在操作过程中受到外界污染。

1. 在无菌环境下，将用品放在无菌纸上。

2. 使用无菌纸或箔纸将用品包裹好，封口处用无菌胶带固定。

3. 将包扎好的用品放入无菌中，并密封。

用品的灭菌灭菌是为了杀死用品上的细菌和其他微生物。

1. 使用常见的灭菌方法包括高温干热灭菌和湿热灭菌。

2. 对于耐高温的器皿，如玻璃器皿，可以选择高温干热灭菌。

将器皿放入预热至160°C的高温灭菌器中，保持30分钟。

3. 对于耐湿热的器皿，如塑料器皿，可以选择湿热灭菌。

将器皿放入预热至121°C的压力灭菌器中，保持15-20分钟。

培养基的配制培养基是进行微生物培养的基础，配制过程需要严谨操作。

1. 根据需要的培养基种类和配方，准备所需的培养基成分。

2. 使用称量器具准确称量所需成分，并将其加入无菌中。

3. 向无菌中添加适量的热蒸馏水，并搅拌混合，直到成分溶解彻底。

4. 根据需要调整pH值，并使用pH计进行测量和校准。

5. 分装培养基到无菌培养皿或试管中。

6. 对于固体培养基，添加适量琼脂糖，并将其加热至混合溶解。

然后将培养皿冷却，直到琼脂糖凝固。

以上是无菌操作技术中用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的基本步骤和建议。

通过严格遵循这些步骤，可以提高实验的可靠性，并避免实验结果的污染和误差。

实验四培养基的配制与灭菌一、实验教学目标基本与要求1、明确培养基的配制原理。

2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。

3、熟悉准备微生物培养准备器械的方法二、实验内容1.无菌移液管、无菌平皿，准备无菌水、棉塞（试管和在三角瓶）；2.配制五类菌培养基(细菌、放线菌、霉菌、酵母培养基，双歧杆菌厌氧培养基)、分装。

(每人参与配制一种，但要求四种都会配)3.高压蒸汽灭菌，灭菌后摆放斜面；4.实验室常用消毒灭菌方法(示范)。

三、实验操作（一）吸管的包扎与灭菌：•在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。

•棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑）；•然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。

（二）培养皿的灭菌：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。

（三）无菌水的制备无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。

1.无菌分离试管水的准备●试管中装入4.5ml自来水，每组共准备12支，盖上塑料盖，包扎；2.三角瓶无菌水的准备●三角瓶装入99ml水，共装3瓶，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。

3.无菌玻璃珠的准备●三角瓶中装入玻璃珠，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。

（四）培养基的配制：1、标识同学们先将试管和三角瓶贴好标签。

注明培养基名称，组别，日期。

标签粘贴位置在离管口1/3管身处。

注意：标签用记号笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。

2、培养基的配制程序●称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。

●溶化：在搪瓷杯中加入所需水量自来水，玻棒搅匀，加热溶解。

●调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。

●定容：将溶化的培养基倒入量筒中，补充水量至所需体积；●加琼脂溶化：加所需量的琼脂，加热融化并不断搅拌。

3、培养基配方●牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)（1组）（p275）●牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl 0.5克，水100mL，琼脂2g ，pH7.2～7.4●高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)（2组）（p275）●可溶性淀粉2.0g，KNO300.1g ，K2HPO40.05g，MgSO40.05g，NaCl 0.05g，FeSO40.001g，水100mL，琼脂2g ，pH7.2～7.4●马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（3组）（p276）（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基），其配方如下：去皮马铃薯20g （或鲜豆芽10g），葡萄糖5g，自来水100mL ，琼脂2g ，pH 自然。

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌一、实验目的1 学会常用器皿包扎方法2 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤3 学会实验室灭菌锅的使用方法二、常用器具和仪器试管(test tube),德汉氏小管(Durham tube),玻璃吸管(glass pipette),吸器,微量加样器(micropipette),吸嘴(tip),培养皿(petri dish),三角瓶(erlenmeyer flask),接种铲(inoculating shovel),玻璃涂布器(glass spreader),接种环(inoculating loop),接种钩(inoculating hook),接种针(inoculating needle),小塑料离心管(Eppendorf tube),滴瓶(dropper bottle),双层瓶(double bottle),酒精灯(alcohol burner),煤气喷头(coal gas sprinkler head),试剂瓶,量筒,烧杯,温度计,石棉网,漏斗,烘箱,卧式灭菌锅,手提式灭菌锅,无菌操作台/室,过滤除菌设备,厌氧操作设备,小型发酵罐,离心机,培养箱/摇床,冷冻干燥机,蒸馏水器,超声波清洗仪,磁力搅拌器。

三、玻璃器皿的包装1、培养皿的包装方法一:用旧报纸密密包紧,一般以5-8套培养皿作一包。

包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。

方法二:将培养皿放入金属(不锈钢)筒内,干热灭菌。

金属筒配有盖子,内部还有一个可以放培养皿的带底框架。

框架可以从筒内提出,以便装取培养皿。

包好的培养皿金属筒和内部的框架塑料培养皿架2、吸管的包装准备好干燥的吸管,在粗头端塞入一小段棉花,以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。

将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端,与报纸成45°角,左端多余的一段覆折在尖头上,再将整根吸管卷入报纸,右端多余的报纸打个小结。

包好的吸管再用一张大报纸包好,干热灭菌。