免疫增殖病的检测方讲义法.PPT

概念：正常人血清中出现M蛋白，但不伴有浆细胞 恶性增殖的疾病。
表现：注意少数恶化为多发性骨髓瘤。 免疫学特征：①血清M蛋白水平一般不太高，不超过
20g／L，不呈进行性增加； ②血中抗体水平及活性正常； ③血中及尿中没有游离的轻链及重链。 ④骨髓中浆细胞数不超过骨髓细胞总数
的10％，且形态正常。 表21-5 比较
②正常Ig水平降低→→感染 。
◆类型： ①多克隆丙种球蛋白病(polyclonal immunoglobulinopathy)
两个克隆以上的浆细胞同时增生，血清中多种 Ig异常增多和（或）尿中出现L链或H链的病理现象。
多良性且继发，因免疫应答所致。 ②单克隆丙种球蛋白病(monoclonal immunoglobulinopathy)
◆单克隆蛋白（monoclonal protein，MP，M蛋白） 因单株浆细胞异常增殖所产生的大量理化性质 十分均一的Ig或肽链。
◆性质：①无免疫活性即副蛋白（paraprotein） ②Ig的类，或轻链的型
◆本周蛋白（Henry Bence-Jones protein，B-J蛋白） 1848年，第一个肿瘤标志物。
◆免疫球蛋白病（immunoglobulinopathy）或 丙种球蛋白病（gammopathy） 指外周血中超常增高或尿液中出现异常免疫球蛋白 （无活性）的疾病。 （属于病理现象，即血症或尿蛋白症 ）
◆高免疫球蛋白血症(hyperimmunoglobulinemia)
表现：① 血清蛋白总量﹥100g／L→→高血黏度综合征；
沉淀物：絮状或胶冻状。
类型： ①单克隆型（Ⅰ型）：约占总数的25％。
主要是IgM类， 偶有IgG，罕有IgA或本周蛋白。 ②混合单克隆型（Ⅱ型） 约占总数的25％。 主要是IgM（类风湿因子），偶有IgG或IgA， 存在形式：IgM-IgG复合物状态。 ③混合多克隆型（Ⅲ型） 约占总数的50％ 存在形式： IgM-IgG或IgM-IgG-IgA等。

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（四）其它检测方法
本周蛋白检测：多发性骨髓 病阳性率极高
本周蛋白在PH5.0的条件 下，加热至50~60ºC时出现沉 淀，继续加热至90ºC后又重 新溶解。根据这种理化性质 ，又将其称为凝溶蛋白。
免疫增殖病的检验
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小结：
1、掌握免疫增殖病的定义 2、熟悉免疫增殖病的免疫损 伤机制
3、熟悉常见的免疫增殖病的 临床表现及免疫学特征
第一节 免疫增殖病的分类
一、定义
免疫增殖病（
immunoproliferative disease）是
指免疫器官、免疫组织或免疫细
胞（包括淋巴细胞和单核—巨噬
细胞）异常增生（包括良性或恶
性）所致的一组疾病。
这类疾病的表现有免疫功能
异常及免疫球蛋白质和量的变化
免疫增殖病的检验
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二、免疫增殖病的分类
增殖细胞
增高不显著，一般在
20mg/ml以下。
免疫增殖病的检验
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免疫增殖病的检验
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图26-3
免疫增殖病的检验
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1、如果待测标本与某型球 蛋白重链及轻链抗血清产生 相同迁移度的特殊沉淀弧， 提示存在单克隆丙种球蛋白 (M蛋白)，此现象多见于IgG 、IgA、 IgM型多发性骨髓 瘤或原发性巨蛋白血症。
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(三)免疫固定电泳
将待测血清或其它标本在琼脂平
板上作区带电泳，分离后于其上
覆盖含抗k或r轻链或各类重链的
抗血清滤纸，当抗体与某区带中
的单克隆免疫球蛋白结合后，便
形成复合物而沉淀下来，再通过
漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着
色区带，即可判断单克隆丙种球
蛋白的轻链或重链型别。
免疫增殖病的检验

主要表现骨髓外浸润，以淋巴结、肝和脾 肿大等为主要体征并伴有血黏滞过高综合征。
实验室检查： • 血清中患者血清IgM水平往往超过300mg/dl • 血清分离不出或呈胶冻状，电泳时血清有时难以
泳动，集中于原点是该病的电泳特征 • 骨髓象可见淋巴细胞、浆细胞和介乎两者之间的
浆细胞样淋巴细胞明显增多 • 有些IgM分子具有冷球蛋白的特征 • 有约40％的病人可出现本周蛋白尿
免疫电泳： 免疫电泳是将琼脂糖电泳和免疫双向扩散相结
合的一项技术。 血清标本先行区带电泳分成区带，继而用特定
的抗血清进行免疫扩散，阳性样本的M蛋白将在适 当的部位形成异常沉淀弧，根据抗血清的种类、 电泳位置及沉淀弧的形状可以对M蛋白作出判定。
正常及某些患者免疫电泳图谱
上孔中为血清，下孔中为尿液，槽中为抗血清，箭头所指为骨髓瘤蛋白 a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗IgA血清；d：抗IgM血清 e：抗κ血清；f：抗λ血清A：IgA/λ型骨髓瘤； B：IgG/κ型骨髓瘤； C：IgG重链病
单克隆免疫球蛋白病（单一克隆、恶性）
第二节 单克隆丙种球蛋白病的临床免疫学特征
• 突出特点：患者血清存在异常增多的单克隆 免疫球蛋白 • M蛋白（monoclonal protein）：单克隆免 疫球蛋白理化性质十分均一，但是多无免疫活 性，可以是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD，也可 以是κ或λ轻链中的任何一型。 • 本周蛋白（Bence-Jone protein）：M蛋白 的轻链分子量较小，容易从尿中排出，最早由 Bence-Jones测知。
第一节 概述
免疫增殖病的概念 免疫器官、免疫组织或免疫细胞异常增生（包
括良性或恶性）所致的一组疾病。
免疫增殖病的分类

二、免疫增殖性疾病的免疫损伤机制
3.异常免疫球蛋白增多所造成的病理损伤 浆细胞异常增殖产生大量无活性的异常免疫球蛋白 或其片段，沉淀于组织后可引起组织变性和淋巴细胞 浸润，进而导致相应器官的功能障碍。此外，免疫球 蛋白浓度过高还可导致血液黏稠度增加，产生一系列 直接或间接的病理损害。 4.溶骨性病变 浆细胞瘤患者大多伴有溶骨性破坏 ，可能是由骨质形成细胞调节功能紊乱所致。
肠道等
多发性骨 髓瘤患者 骨破坏所 致头颅肿 物及眼球 突出
三、常见免疫球蛋白增多病
免疫学检测： 1. 免疫球蛋白测定时相应单克隆IgG、IgA、IgM、 IgD、IgE升高。 2. 血、尿轻链测定时相应轻链κ 或升高，κ /比 值异常。 3. 血清区带电泳时出现狭窄浓集的异常区带，其区 带宽度与Alb带大致相等或较其狭窄，即M蛋白带。 4. 免疫固定电泳时泳道出现相应的异常条带，可以 对多发性骨髓瘤进行进一步的鉴定和分型。
3. 原发性良性单克隆丙种球蛋白病 包括一过性单克隆丙种球蛋白增多病和持续性单克隆丙 种球蛋白增多病等。
单克隆免疫球蛋白增殖病的分类
二、免疫增殖性疾病的免疫损伤机制
浆细胞恶性增殖
1.浆细胞异常增殖 在内因和外因的作用下，浆细胞发生永生
性病变。
内因 HLA位点：如骨髓瘤发生于与HLA有关 染色体脆弱位点：主要发生在1、11和14号染色体上，使B在向
第二十四章 免疫增殖性疾病及其免疫检测
目录
第一节 概述 第二节 免疫增殖性疾病常用检验项目及其临床意义 第三节 异常免疫球蛋白的检测方法及应用原则
第一节 概述
重点提示
免疫增殖性疾病的概念及分类 免疫增殖性疾病的免疫损伤机制 常见免疫球蛋白增多病
免疫增殖性疾病的概念及分类

是突变的单克隆浆细胞产生大量轻链， 血浆中轻链含量异常增加，增加的轻链从肾 脏排泄或沉积于肾脏和其他内脏组织引起淀 粉样变性。
㈠ 临床特点
1、发病的年龄轻；2、以发热、贫血，严重 肾功能损害（λ型）为特点；3、多数有溶骨 性损害。4、有淀粉样变性。
㈡ 免疫学特征
1、血清中异常轻链水平↑，轻链蛋白 κ/λ型比值明显异常，正常Ig水平↓或明 显↓；
第三节 单克隆免疫球蛋白增殖病
该病突出的特点是患者血清中存在异常 增多的单克隆蛋白（M蛋白），其在类别、亚 类、H链、L链抗原结构等方面完全相同，但 多无免疫活性，又称副蛋白。
本周蛋白（Bence-Jones protein）——为过量合成的κ或λ型轻链， 游离存在于血清中，可从患者尿中排出。
一、多发性骨髓瘤
熟悉：⑴ 单克隆丙种球蛋白的临床免疫 学特征 ⑵ 常见的免疫球蛋白增殖病
了解：免疫增殖性疾病的免疫损伤机制
A 正常人
B
白蛋白 α1 α2 β γ
IgG型浆细胞骨髓瘤
C 原发性巨球蛋白血症
D
多克隆丙种球蛋白血症
E 低丙种球蛋白血症
图1 血清蛋白区带电泳和扫描图谱示意图
－
＋
孔中为血清标本，槽中
A
3、骨髓中有淋巴细胞样浆细胞浸润；
4、血清相对粘度↑，＞4；
5、本周蛋白尿（10～30%患者可有，常为 κ）。
三、重链病
是由于浆细胞发生突变和异常增 生，致使血清和尿中出现大量游离的 无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致 的疾病。
根据重链的不同可进一步进行免 疫分型，以γ、α、μ型为多见。
四、轻链病
3、正常的Ig水平明显↓。
㈣ 诊断标准
免疫学特征3项中具备2项即可诊断；但 IgM或IgD除具备免疫学特征1、2项外，还须 有多处溶骨性损害。

操作步骤
❖ 样本处理:
用生理盐水将血清标本适当稀释后备用,其中同一份血清第 一泳道样本稀释3倍,第二至第六泳道样本稀释5倍。
❖ 区带电泳
上样
胶Hale Waihona Puke 准备电泳❖ 沉淀反应
加抗血清 洗涤、烘干
着色
结果分析
❖ 对染色烘干后得胶片进行判读。将第一泳道作为血清蛋白 分子量参考道,观察第二至第六泳道有无对应得特异性单克 隆免疫球蛋白条带。如图12-1所示, 其中sp泳道为血清蛋 白参考道,由下至上分别为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、 β球蛋白、γ球蛋白。第2、3、4、5、6泳道分别为IgG、 IgA、IgM、κ、λ抗血清泳道。
❖ 染色之前得胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤,以出去 游离得血清与抗血清成分,降低染色后凝胶得背景色。
临床应用
❖ 本法可对各类Ig及其轻链进行分型,最常用于临床常 规M蛋白得分型与鉴定。通常用于单克隆Ig增殖病, 单克隆Ig病,本周蛋白与游离轻链病、多组份单克隆 Ig病,重链病、脑脊液寡克隆蛋白鉴别、多克隆Ig病 得诊断与鉴别诊断。
❖ 分析测量范围指对没有进行任何预处理(稀释,浓缩等)得 标本,分析方法能够直接测定出得待测物范围,也就就是系 统最终得输出值(活性或浓度)与被分析物得活性或浓度 成线性比例得范围,它反映整个系统得输出特性。
❖ 临床可报告范围 就是指对临床诊断、治疗有意义得待测 物浓度范围。此范围如果超出了分析测量范围,可将标本通 过稀释、浓缩等预处理使待测物浓度处于分析测量范围内, 最后结果乘以稀释倍数。
试剂与器材
❖ 选用与检测仪器相配套得试剂、校准品及其她 辅助试剂
❖ 参考选用检测系统中血清IgG得检测范围选择 低浓度标本与高浓度标本
操作步骤