省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题

十溴联苯醚灌胃后小鼠宫颈癌皮下移植瘤组织肿瘤相关成纤维细胞标志基因表达变化及其意义陈楠，李榕，祖尼热·吐尔逊，刘早玲新疆医科大学公共卫生学院，乌鲁木齐830000摘要：目的　观察十溴联苯醚（BDE -209）灌胃后小鼠宫颈癌皮下移植瘤组织肿瘤相关成纤维细胞（CAFs ）标志基因表达变化，并探讨其参与宫颈癌发生发展的相关机制。

方法　将40只雌性C57BL /6小鼠随机分为对照组、BDE -209低剂量组、BDE -209中剂量组、BDE -209高剂量组，每组10只。

各组小鼠均采用右前腋下接种宫颈癌U14细胞悬液的方法建立宫颈癌皮下移植瘤模型，BDE -209低剂量组、BDE -209中剂量组、BDE -209高剂量组经口灌胃给予20、100、500 mg /kg BDE -209，对照组给予等体积玉米油，连续21 d 。

取各组小鼠宫颈癌皮下移植瘤组织，进行转录组测序后筛选差异表达基因，与查阅文献得到的小鼠CAFs 标志基因取交集后获得CAFs 标志差异表达基因。

对CAFs 标志差异表达基因进行基因本体论（GO ）功能和基因组百科全书（KEGG ）通路富集分析，建立蛋白质相互作用网络（PPI ）图后采用Betweenness 算法确定排名前十的CAFs 标志差异表达基因，即为CAFs 标志差异核心基因。

取BDE -209高剂量组与对照组小鼠部分宫颈癌皮下移植瘤组织，采用实时荧光定量PCR 法检测其10个CAFs 标志差异核心基因表达。

结果　共筛选到CAFs 标志差异表达基因30个，其中BDE -209干预后上调29个、下调1个。

GO 功能富集分析结果显示，CAFs 标志差异基因主要富集在细胞外基质（ECM ）、生殖结构发育、PI3K /Akt 信号转导等；KEGG 通路富集分析结果显示，CAFs 标志差异基因主要富集在补体和凝血级联反应、肿瘤发病途径等信号通路。

PPI 图和Betweenness 算法筛选得到排名前十的CAFs 标志差异核心基因分别为核心蛋白聚糖（Dcn ）、细胞间黏附分子1（Icam1）、C -X -C 基序趋化因子配体12（Cxcl12）、基质金属蛋白酶2（MMP -2）、血小板衍生生长因子受体（Pdgfrb ）、Ⅴ型胶原蛋白α2（Col5a2）、补体成分1的子成分1（C1s1）、肝细胞生长因子（Hgf ）、补体成分3（C 3）、纤溶酶原激活物（Plat ）。

T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3在肺结核免疫反应中的作用机制研究进展沃拉孜汗·玛德尼亚提，迪力夏提·图尔迪麦麦提，康绍涛，拜合提尼沙·吐尔地新疆医科大学第一附属医院呼吸重症监护室，乌鲁木齐830000摘要：肺结核的发生发展及预后与机体抗结核免疫功能密切相关，T淋巴细胞功能耗竭是肺结核发病的重要机制。

T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）在肺结核感染后表达升高，能够通过调控效应T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞、黏附蛋白样细胞及单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞的活化和功能，在肺结核的适应性免疫反应和固有天然性免疫反应中发挥作用。

通过调节TIM-3的表达和功能，可以控制肺结核的炎症反应和组织损伤，增强肺结核的清除能力和免疫监视能力。

因此，TIM-3可能是肺结核治疗和预防的一个重要靶点。

关键词：T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3；免疫反应；适应性免疫；固有天然性免疫；肺结核doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.29.022中图分类号：R521 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）29-0090-04肺结核是由结核分枝杆菌（MTB）作为气溶胶侵入宿主肺，感染并破坏肺组织而起病的一种慢性呼吸道疾病。

MTB被吸入肺部后可造成肺部结核菌感染，潜伏性结核感染的症状轻微，在免疫系统健康的人群中，机体通过自身免疫机制包绕结核分枝杆菌，形成结核结节来限制结核分枝杆菌的感染；如果感染者的免疫功能处于不健全状态，结核分枝杆菌会变得异常活跃，从而转变为具有传染性的活动性结核病。

随着研究的深入，越来越多的证据表明免疫系统对肺结核的发生发展具有重要影响，特别是以T淋巴细胞为代表的免疫细胞在肺结核免疫反应中发挥重要作用［1］。

目前普遍认为，在循环池中辅助性T淋巴细胞1（Th1）减少和Th2增加引起的肺结核患者Th1/Th2失衡是肺结核发病的重要机制［2］。

DOI：10.16659/ki.1672-5654.2023.02.009PBL联合CBL教学法在科学实验教学中的应用毕晓娟1，杨宁1，吕国栋1，郭晨明21. 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，新疆乌鲁木齐 830000；2. 新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心乳腺外科，新疆乌鲁木齐 830000[摘要] 目的探讨PBL联合CBL教学法在科学实验教学中的应用成效。

方法选取新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院2020年2—7月的2班医学生共84名作为研究对象，根据不同科学实验教学方法将其分成传统教学组（42名）与联合教学组（42名），传统教学组应用传统教学法，联合教学组应用PBL联合CBL教学法，对比两组医学生的考核成绩、学习效果、个人综合能力、职业抱负与职场正念评分、教学质量以及教学满意度。

结果联合教学组医学生理论知识、实验操作的考核成绩均高于传统教学组，差异有统计学意义（P<0.05）；联合教学组医学生学习兴趣、自主学习、实践操作、团队协作、资料查阅、临床思维的评分均高于传统教学组，差异有统计学意义（P<0.05）；联合教学组医学生自学、交流、表达、理解、解决问题的能力评分均高于传统教学组，差异有统计学意义（P<0.05）；联合教学组医学生教学后的职业抱负与职场正念评分均高于传统教学组，差异有统计学意义（P<0.05）；联合教学组态度、内容、方法、效果的评分均高于传统教学组，差异有统计学意义（P<0.05）；联合教学组医学生的教学满意度高于传统教学组，差异有统计学意义（P< 0.05）。

结论PBL联合CBL教学法在科学实验教学中的应用成效较好，能够明显提高医学生的考核成绩、学习效果、个人综合能力、职业抱负与职场正念，教学质量较传统教学模式显著提升，医学生对教学法的满意度高。

[关键词] 科学实验；教学方法；教学质量；满意度；PBL；CBL[中图分类号] R19 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2023）01（b）-0009-05Application of PBL Combined with CBL Teaching Method in Science Ex⁃periment TeachingBI　Xiaojuan1, YANG　Ning1, LYU　Guodong1, GUO　Chenming21.Institute of Clinical Medicine, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang Uygur Autonomous Region, 830000 China;2. Department of Breast Surgery, Center for Digestive and Vascular Surgery, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang Uygur Autonomous Region, 830000 China[Abstract]Objective To explore the effectiveness of the application of PBL combined with CBL teaching method in science laboratory teaching. Methods A total of 84 medical students in class 2 of the Institute of Clinical Medicine, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from February to July 2020 were selected as the study sub⁃jects. They were divided into traditional teaching group (42 students) and co-teaching group (42 students) according to different scientific laboratory teaching methods, and the traditional teaching group applied traditional teaching method and the co-teaching group applied PBL combined with CBL teaching method. The medical students' assessment scores, learning outcomes, personal general ability, career ambition and career positive thinking score, teaching qual⁃ity and teaching satisfaction were compared between the two groups. Results The assessment scores of theoretical knowledge and laboratory operation of the medical students in the co-teaching group were higher than those in the tra⁃[基金项目]省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室，新疆医科大学教改课题（YG2021028）。

• 1304 •中国病原生物学杂志2020年11月第15卷第11期Journal o f Pathogen B iologyN o v . 2020，V o l . 15, N o . 11DOI ：10.13350/j. cjpb. 201113•论著•E p C A M在泡球呦感染所致小鼠肝纤维化中的作用研究杨宁、闫怡2,刘辉、毕晓娟\吕国栋、孙立、柯颖、马文梅、林仁勇(1.新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室，新疆乌鲁木齐830011;2.新疆医科大学第一附属医院皮肤科)【摘要】目的通过检测泡球蚴感染不同时期小鼠肝脏纤维化情况以及上皮细胞粘附因子（Epithelial cell adhesion mole-CUle，E p C A M )在肝脏中的表达水平变化，探讨E p C A M 在泡球呦感染所致小鼠肝纤维化中的作用。

方法36只雌性C 57B L /6小鼠随机分为假手术组和模型组，采用门静脉注射法建立泡球蝴感染模型，于感染后30、90和180 d 各取12只小 鼠处死，H E 染色观察肝脏病理改变，天狼星红染色以及M a s s o n 染色检测肝脏纤维化水平；免疫组化检测泡球蚴感染小鼠肝脏中E p C A M 的表达。

实验设假手术对照组。

采用Pearson相关系数法对E p C A M 以及肝脏纤维化水平进行相关性分 析。

结果H E 染色观察模型组小鼠肝脏中可见泡球呦病灶且病灶周围伴有纤维化。

天狼星红染色结果显示与假手术组相比，感染组病灶周围纤维化程度随着感染时间延长而加重，天狼星红染色两组小鼠阳性面积在感染后30 d 分别为[(19 540. 94士2 607. 76) p m 2 和（2 071. 03± 159. 14) M m 2]，90 d 分别为[(23 641.96 士2 795.52) /xm2 和（2 170.86 ±437.56) /im2]，180 d 分别为[(42 018. 43士2 309. 06) p m 2和（2 125. 30士273. 73) M m 2]，差异均有统计学意义（均 P <0. 05)。

生物电阻抗身体成分检测仪测算的相位角在超重和肥胖预测中的应用余凤1，马依拉·买买提2，赵效国1，张世瑶2，李蓉蓉2，李莉21 新疆医科大学公共卫生学院，乌鲁木齐830011；2 新疆医科大学第一附属医院临床营养科摘要：目的　观察基于生物电阻抗身体成分检测仪测算的相位角（PhA ）在超重和肥胖预测中的应用效果。

方法　663例营养科就诊患者，其中体质量指数BMI≤23.9 kg /m 2（正常组）161例、24 kg /m 2≤BMI<28 kg /m 2（超重组）179例、BMI≥28 kg /m 2（肥胖组）323例，采用InBody 770多频分段生物电阻抗身体成分检测仪检测三组PhA 、体脂肪相关指标、人体肌肉质量相关指标及人体水分相关指标。

采用Pearson 相关性分析法分析PhA 与超重和肥胖患者体脂肪相关指标、人体肌肉质量相关指标及人体水分相关指标的相关性，采用多元线性逐步回归分析法分析肥胖和超重患者PhA 的影响因素，绘制受试者工作特征曲线（ROC ）分析PhA 对超重和肥胖的预测效能。

结果　与正常组比较，超重组PhA 水平高、体脂肪相关指标、人体肌肉质量相关指标及人体水分相关指标水平高；与超重组比较，肥胖组PhA 水平高、体脂肪相关指标水平高、人体肌肉质量相关指标及人体水分相关指标水平高（P <0.01）。

PhA 与超重和肥胖患者细胞内水分（ICW ）、肌肉量（SMM ）、骨骼肌指数（SMI ）呈正相关（r 分别为0.305，0.305，0.394；P 均<0.05）；与细胞外水分（ECW ）/ICW 、ECW /全身水分（TBW ）呈负相关（r 分别为-0.825，-0.827；P 均<0.05）。

ICW 、ECW /TBW 、内脏脂肪面积（VFA ）、腰臀脂肪比（WHR ）和SMI 是超重和肥胖患者PhA 的影响因素。

当PhA 为5.05°时，ROC 曲线下面积为0.704（95% CI 为0.661～0.748），PhA 预测超重和肥胖的灵敏度62.0%、特异度67.7%。

天香丹胶囊预处理激活ERα介导的AKT/eNOS 通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤的实验研究吉钊1,2,姜林2,3,王慧敏1,2,杜古加㊃嘎尔玛1,2,岳远佳1,2摘要目的:观察天香丹(TXD)胶囊通过雌激素受体(ER)α介导的蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的改善作用,并探讨其作用机制㊂方法:将70只SD雌性大鼠随机分为正常对照组(Control组,10只)和去卵巢组(OVX组,60只),OVX组摘除双侧卵巢㊂将OVX组分为假手术组(Sham组)㊁模型组(MIRI组)及雌二醇组(OVX+MIRI-E2组,0.8 mg/kg)㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组(0.6g/kg)㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组(0.4g/kg)㊁OVX+MIRI-TXD低剂量组(0.2g/kg),每组10只,连续灌胃给药60d㊂通过结扎心脏冠状动脉左前降支30min后再灌注60min方法建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型㊂记录各组大鼠心脏血流动力学指标;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态学变化,微量法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)㊁肌酸激酶(CK)㊁超氧化物歧化酶(SOD)㊁丙二醛(MDA)㊁总抗氧化能力(T-AOC)㊁一氧化氮(NO)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织雌激素受体ERα㊁AKT蛋白磷酸化水平㊁eNOS磷酸化水平㊂结果:与MIRI 组比较,OVX+MIRI-E2组及OVX+MIRI-TXD各剂量组大鼠心脏血流动力学指标㊁心肌组织形态结构改善,血清LDH㊁CK和MDA 含量降低,NO㊁SOD和ERα蛋白含量升高,抗氧化能力㊁AKT和eNOS磷酸化水平增强(P<0.05)㊂结论:TXD胶囊预处理可减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与激活ERα介导的AKT/eNOS信号通路㊁增加内源性NO释放㊁舒张血管㊁减轻心脏负荷和心肌需氧量㊁对心肌缺血的保护作用有关㊂关键词心肌缺血再灌注;天香丹胶囊;蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶信号通路;大鼠;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.16.006Experimental Study on Pretreatment with Tianxiangdan Capsule to Activate ERα-mediated AKT/eNOS Pathway to Alleviate Myocardial Ischemia-reperfusion Injury in RatsJI Zhao,JIANG Lin,WANG Huimin,DUGUJIA Gaerma,YUE YuanjiaThe Fourth College of Clinical Medical,Xinjiang Medical University,Urumqi830000,Xinjiang,China;State Key Laboratory of Pathogenesis,Prevention and Treatment of High Incidence Diseases in Central Asia,Urumqi830000,Xinjiang,China Corresponding Author JIANG Lin,E-mail:*****************Abstract Objective:To observe the ameliorative effect of Tianxiangdan(TXD)Capsule on myocardial ischemia-reperfusion injury in rats via estrogen receptor(ER)α-mediated protein kinase B(AKT)/endothelial-type nitric oxide synthase(eNOS)pathway,and to explore the mechanism of its action.Methods:Seventy SD female rats were randomly divided into Control group(n=10)and ovariectomized group(OVX group,n=60).Both ovaries were removed in OVX group.The rats of OVX group were divided into sham group,MIRI group, OVX+MIRI-E2group(0.8mg/kg),OVX+MIRI-TXD high-dose group(0.6g/kg),OVX+MIRI-TXD medium-dose group(0.4g/kg),OVX+ MIRI-TXD low-dose group(0.2g/kg),with10rats in each group,and the rats were gavaged for60d.The myocardial ischemia-reperfusion injury model was established by ligation of the left anterior descending coronary artery for30min and reperfusion for60 min.Cardiac hemodynamic indexes of rats were recorded in each group.Morphological changes of myocardium were observed by hematoxylin-eosin(HE)ctate dehydrogenase(LDH),creatine kinase(CK),superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde (MDA),total antioxidant capacity(T-AOC)and nitric oxide(NO)of serum were detected by microassay.The estradiol level in serum was measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).The levels of myocardial tissue estrogen receptor ERα,AKT protein phosphorylation,and eNOS phosphorylation were measured by protein Western Blot.Results:Compared with OVX+MIRI group, cardiac hemodynamic indexes and myocardial tissue morphology were significantly improved in OVX+MIRI-E2group and OVX+ MIRI-TXD groups,the levels of LDH,CK and MDA in serum were significantly decreased,while the contents of NO,SOD,ERαprotein content and phosphorylation of AKT and eNOS was significantly increased(P<0.05).Conclusion:TXD capsule pretreatment could alleviate myocardial ischemia-reperfusion injury in rats,and its mechanism might be related to the activation of estrogen receptor ERα-mediated AKT/eNOS signaling pathway,which increased the release of endogenous NO,vasodilation,reduced cardiac load and myocardial oxygen demand,and relieved myocardial ischemia.Keywords myocardial ischemia reperfusion;Tianxiangdan Capsule;protein kinase B/endothelial-type nitric oxide synthase signaling pathway;rats;experimental study冠状动脉粥样硬化㊁炎症㊁栓塞等是导致心肌缺血的主要原因,长期心肌缺血导致心脏供氧降低,心肌细基金项目国家自然科学基金项目(No.81960699);省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题资助项目(No.SKL-HIDCA-2020-8)作者单位 1.新疆医科大学第四临床医学院(乌鲁木齐830000);2.省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室(乌鲁木齐830000);3.新疆中药炮制研究重点实验室(乌鲁木齐830000)通讯作者姜林,E-mail:*****************引用信息吉钊,姜林,王慧敏,等.天香丹胶囊预处理激活ERα介导的AKT/eNOS通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤的实验研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(16):2944-2950.胞死亡㊂由心肌缺血引起的心绞痛㊁心肌梗死甚至猝死逐年增加,心肌缺血的预防和治疗对心血管类疾病具有重要意义[1]㊂中医学将心肌缺血归属于 胸痹 ,属血瘀证范畴,主要是由上焦阳虚㊁阴邪上乘㊁邪正相搏所致,因此,治疗原则是辛温通阳㊁活血化瘀[2-4]㊂流行病学资料表明,绝经后女性罹患冠心病风险㊁脑血管疾病死亡率和全因死亡率更高,提示雌激素在心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)中可能发挥有益作用㊂天香丹(TXD)胶囊是新疆维吾尔自治区中医医院多年使用的医院制剂,由中药丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)㊁降香(Dalbergiaodorifera T.Chen)㊁红景天(Rhodiola rosea L.)及新塔花(Ziziphora clinopodioides Juz.)组方而成,临床实践中治疗心肌缺血疗效显著[5],现已完成临床前研究,获得中药复方6类新药临床批件㊂相关研究表明,多条信号通路参与抗心肌缺血再灌注损伤,TXD胶囊是否对心肌缺血发挥保护作用及通过调控雌激素受体(ER)发挥作用尚未明确[6-7]㊂本研究观察TXD胶囊通过ERα介导的蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的改善作用,并探讨其作用机制,为TXD胶囊在临床的应用提供药理学依据㊂1材料与方法1.1实验动物无特定病原体(SPF)级SD雌性大鼠,10周龄,体质量(200ʃ40)g,手术及饲养,实验动物及实验环境由新疆医科大学动物实验中心提供,许可证号:SCXK(新疆)20190003㊂1.2实验药品与试剂TXD胶囊(由新疆医科大学附属中医医院提供,批号:20190901);乳酸脱氢酶(LDH)㊁肌酸激酶(CK)㊁丙二醛(MDA)㊁超氧化物歧化酶(SOD)㊁一氧化氮(NO)试剂盒(北京Solabio科技有限公司,批号分别为:bC0685㊁bC1145㊁bC0025㊁bC0175㊁bC1476);总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号:A015-3-1);17β-雌二醇(Sigma公司,批号:E8875-5G);ERα㊁AKT㊁磷酸化AKT(p-AKT)㊁eNOS㊁磷酸化eNOS(p-eNOS)㊁GAPDH抗体(proteintech公司,批号分别为21244-1㊁10176-2㊁28731-1㊁27120-1㊁28939-1㊁60004-1);大鼠雌二醇(E2)酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(上海优选生物科技有限公司,批号:YX-E21147);高效RIPA组织/细胞快速裂解液(北京Solabio科技有限公司,批号:R0010);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)制备试剂盒(北京Solabio科技有限公司,批号:P1200)㊂1.3实验仪器HX-300S动物呼吸机(成都泰盟软件有限公司)㊁BL-420S生物机能实验系统(成都泰盟软件有限公司)㊁多样品冷冻研磨仪(上海净信实业发展有限公司)㊁低速多管离心机(上海安亭科学仪器厂)㊁垂直电泳仪(美国BIO-RAD公司)㊁倒置荧光显微镜(日本OLYMPUS公司)㊁Benchmark PLUS全波长酶标仪(美国BIO-RAD公司)㊁Azure蛋白成像仪(美国Azure公司)㊂1.4实验方法1.4.1动物分组㊁摘除卵巢及给药70只雌性SD大鼠,SPF级环境适应7d,分为正常对照组(Control组,10只)和去卵巢组(OVX组,60只),术前禁食12h,腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液深度麻醉,摘除双侧卵巢后缝合㊂喂养7d后,将OVX 组分为假手术组(Sham组)㊁模型组(MIRI组)㊁E2组(OVX+MIRI-E2组,0.8mg/kg,E2灌胃)㊁TXD胶囊高剂量组(OVX+MIRI-TXD高剂量组,0.6g/kg,TXD灌胃)㊁TXD胶囊中剂量组(OVX+MIRI-TXD中剂量组, 0.4g/kg,TXD灌胃)㊁TXD胶囊低剂量组(OVX+MIRI-TXD 低剂量组,0.2g/kg,TXD灌胃),每组10只㊂Sham组和MIRI组双蒸水灌胃60d㊂造模过程中大鼠进行了2次手术及60d的饲养,在此期间各组大鼠均有死亡,综合最终各组大鼠只数,统计样本数为6只㊂1.4.2大鼠MIRI模型的建立灌胃60d的雌性SD大鼠,术前禁食12h,不禁水,腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液深度麻醉,固定在大鼠手术台上㊂颈部和胸部备皮消毒,气管切开插管,连接呼吸机(频率65次/min,潮气量18mL,呼吸比为2ʒ1);四肢皮下插入针连接电极,连接BL-420S生物机能实验系统,记录Ⅱ导联心电图㊂左胸部第3肋间㊁第4肋骨间开胸,撕开心包膜,充分暴露心脏,可逆性结扎冠状动脉左前降支,阻断冠状动脉血流,结扎30 min后,松开结扎线再灌注60min,Sham组只穿线不结扎㊂结扎后心电图ST段明显抬高或心肌有明显发白为缺血成功;松开结扎后,ST段回落为再灌注成功[8-9]㊂1.4.3血流动力学指标连接呼吸机后进行颈动脉插管,记录左室收缩压(LVSP)㊁左室舒张末压(LVEDP)及心率(HR)变化㊂1.4.4血清生化指标MIRI造模结束后取腹主动脉血液,以3000r/min 离心15min,取上清液,按试剂盒说明书,ELISA夹心法检测血清E2含量;微量法检测血清LDH㊁CK㊁SOD㊁MDA㊁T-AOC㊁NO含量㊂1.4.5苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤取每组大鼠左心室,置入4%多聚甲醛溶液中固定48h后,脱水,石蜡包埋㊁切片㊂HE染色:将切片分别置于二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ㊁梯度乙醇各5min,自来水冲洗3min;苏木精㊁伊红染色;乙醇浓度由低到高梯度脱水,二甲苯透明,中性树脂封片,200倍光学显微镜观察心肌组织病理学变化㊂1.4.6蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织ERα㊁AKT㊁p-AKT㊁eNOS㊁p-eNOS蛋白表达分离左室缺血区心肌组织约50mg,置于冰箱冷冻后,剪碎,按照每20mg组织加入200μL裂解液的比例加入裂解液,加入2粒钢珠,研磨心肌组织(60Hz, 60s,3次),离心后分离上清液,测定蛋白浓度㊂蛋白上样总量为50μg,室温下SDS-PAGE电泳分离60 min,将蛋白转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,用5%脱脂牛奶室温封闭2h,分别采用ERα㊁AKT㊁p-AKT㊁eNOS㊁p-eNOS㊁GAPDH一抗4ħ摇床上孵育过夜,用1ˑTBST洗涤3次,加入二抗,室温孵育1h,采用电化学发光(ELC)底物试剂盒,在蛋白成像仪上成像并采集㊂1.5统计学处理采用SPSS25.0统计软件进行数据分析,符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1TXD对OVX大鼠MIRI前后及给药后血清E2含量的影响与OVX前比较,各组大鼠OVX7d后血清E2含量均降低(P<0.05);与OVX7d后比较,OVX+ MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD低剂量组大鼠血清E2含量升高(P<0.05);与MIRI组比较,各给药组血清E2含量升高(P<0.05)㊂详见图1㊂图1TXD对OVX大鼠MIRI前后及给药后血清E2含量的影响(与OVX前比较,әP<0.05;与OVX7d后比较,#P<0.05;与MIRI组比较,*P<0.05)2.2TXD对OVX+MIRI大鼠心电图ST段的影响OVX后的大鼠结扎冠状动脉左前降支后与未结扎比较,心电图ST段抬高㊂再灌注60min后ST段均有不同程度回落㊂详见图2㊂图2TXD对OVX+MIRI大鼠心电图ST段的影响(A为未结扎时;B为结扎左前降支30min后;C为再灌注60min后)2.3TXD对OVX+MIRI大鼠血流动力学的影响与Sham组比较,MIRI组LVSP和HR下降, LVEDP升高(P<0.05);与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD低剂量组LVSP和HR升高, LVEDP降低(P<0.05)㊂详见表1㊂表1TXD对OVX+MIRI大鼠血流动力学的影响(xʃs)组别只数LVSP(mmHg)LVEDP(mmHg)HR(次/min) Sham组6131.97ʃ4.1323.19ʃ2.86364.83ʃ8.84 MIRI组692.07ʃ2.99①55.37ʃ2.43①246.83ʃ16.88①OVX+MIRI-E2组6129.59ʃ5.32②33.67ʃ2.33②337.33ʃ14.17②OVX+MIRI-TXD高剂量组6127.62ʃ5.41②35.63ʃ1.11②342.00ʃ17.74②OVX+MIRI-TXD中剂量组6109.34ʃ5.60②40.78ʃ3.21②285.33ʃ9.11②OVX+MIRI-TXD低剂量组6103.72ʃ4.17②36.74ʃ2.04②314.14ʃ41.38②注:MIRI组与Sham组比较,①P<0.05;与MIRI组比较,②P<0.05㊂2.4TXD对OVX+MIRI大鼠血清心肌损伤指标含量的影响与Sham组比较,MIRI组血清LDH㊁CK含量升高(P<0.05);与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD低剂量组大鼠血清LDH㊁CK含量降低(P<0.05)㊂详见表2㊂表2TXD对OVX+MIRI大鼠血清指标LDH㊁CK含量的影响(xʃs)单位:U/mL 组别只数LDH CK Control组6140.12ʃ5.94 1.81ʃ0.09 Sham组6176.87ʃ5.94 1.85ʃ0.13 MIRI组6287.91ʃ8.94① 5.82ʃ0.13①OVX+MIRI-E2组6199.38ʃ5.68② 2.59ʃ0.32②OVX+MIRI-TXD高剂量组6198.77ʃ7.80② 2.25ʃ0.30②OVX+MIRI-TXD中剂量组6225.43ʃ3.63② 2.60ʃ0.18②OVX+MIRI-TXD低剂量组6247.98ʃ5.73② 3.35ʃ0.30②注:MIRI组与Sham组比较,①P<0.05;与MIRI组比较,②P<0.05㊂2.5TXD对OVX+MIRI大鼠血清氧化应激指标及总抗氧化能力的影响与Sham组比较,MIRI组大鼠血清SOD活性和T-AOC含量降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD 高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD 低剂量组大鼠血清SOD活性和T-AOC含量升高(P< 0.05),MDA含量降低(P<0.05)㊂详见表3㊂表3TXD对OVX+MIRI大鼠血清指标SOD㊁MDA及T-AOC含量的影响(xʃs)组别只数SOD(U/mL)MDA(nmol/mL)T-AOC(μmol/L) Control组624.86ʃ1.38 1.27ʃ0.06 1.49ʃ0.05 Sham组622.78ʃ0.57 1.85ʃ0.08 1.29ʃ0.02 MIRI组69.12ʃ0.72① 4.54ʃ0.11①0.81ʃ0.04①OVX+MIRI-E2组619.67ʃ1.15② 1.47ʃ0.11② 1.37ʃ0.08②OVX+MIRI-TXD高剂量组619.62ʃ0.65② 1.40ʃ0.08② 1.38ʃ0.15②OVX+MIRI-TXD中剂量组617.27ʃ0.91② 1.68ʃ0.10② 1.14ʃ0.09②OVX+MIRI-TXD低剂量组615.55ʃ0.87② 2.34ʃ0.07② 1.04ʃ0.05②注:MIRI组与Sham组比较,①P<0.05;与MIRI组比较,②P<0.05㊂2.6TXD对OVX+MIRI大鼠血清内源性NO含量的影响与Sham组比较,MIRI组大鼠血清内源性NO含量降低(P<0.05);与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD低剂量组大鼠血清内源性NO含量升高(P<0.05)㊂详见图3㊂2.7TXD对OVX+MIRI大鼠心肌病理损伤的影响与Sham组比较,MIRI组和OVX+MIRI-TXD低剂量组心肌细胞出现肿胀,细胞间质水肿,界限模糊,大量交叉条纹;与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组心肌细胞排列紊乱和心肌损伤减轻㊂详见图4㊂图3TXD对OVX+MIRI大鼠血清内源性NO含量的影响(MIRI组与Sham组比较,әP<0.05;与MIRI组比较,#P<0.05)图4TXD对OVX+MIRI大鼠心肌组织病理损伤的影响(HE,ˑ200)(A为Control组;B为Sham组;C为MIRI组;D为OVX+MIRI-E2组;E为OVX+MIRI-TXD 高剂量组;F为OVX+MIRI-TXD中剂量组;G为OVX+MIRI-TXD低剂量组)2.8TXD对OVX+MIRI大鼠心肌细胞ERα蛋白表达水平的影响与Sham组比较,MIRI组心肌细胞ERα蛋白水平降低(P<0.05);与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD低剂量组大鼠心肌细胞ERα蛋白表达升高(P<0.05)㊂详见图5㊂图5TXD对OVX+MIRI大鼠心肌细胞ERα蛋白表达水平的影响(A为各组ERα蛋白表达条带图;B为各组ERα蛋白表达比较的柱状图;与Sham组比较,әP<0.05;与MIRI组比较,#P<0.05)2.9TXD对OVX+MIRI大鼠心肌细胞p-AKT及p-eNOS蛋白表达水平的影响与Sham组比较,MIRI组心肌细胞p-AKT及p-eNOS蛋白表达水平降低(P<0.05);与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组及OVX+MIRI-TXD低剂量组大鼠心肌细胞p-AKT蛋白表达水平表达升高;与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组㊁OVX+MIRI-TXD高剂量组㊁OVX+MIRI-TXD中剂量组大鼠心肌细胞p-eNOS蛋白表达水平升高(P<0.05)㊂详见图6㊂图6TXD对OVX+MIRI大鼠心肌细胞p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平的影响(A㊁C为p-AKT及p-eNOS蛋白表达条带图;B㊁D为各组p-AKT及p-eNOS蛋白表达比较的柱状图㊂MIRI组与Sham组比较,әP<0.05;与MIRI组比较,#P<0.05)3讨论本研究摘除大鼠双侧卵巢,目的是降低大鼠机体产生的E2对ERα的激活作用,摘除卵巢后大鼠血清E2含量降低,表明大鼠摘除卵巢手术成功㊂心电图ST段抬高可反映心肌损伤程度,结扎冠状动脉左前降支后,ST段抬高,再灌注后ST段回落;心肌缺血发生后,心肌细胞线粒体㊁内皮细胞膜受到损伤,使细胞膜通透性增高,细胞内LDH㊁CK等心肌酶漏出入血[10-11],检测到二者在血清中含量均增高㊂上述结果说明OVX+MIRI模型造模成功㊂建立去卵巢+心肌缺血-再灌注模型目的在于减少内源性E2供给,凸显TXD胶囊对ERα的作用㊂血流动力学指标LVSP㊁LVEDP和HR均可反映心脏功能是否正常,在心肌缺血再灌注过程中,实时采集血流动力学指标LVSP㊁LVEDP和HR,结果表明TXD预处理可改善心肌缺血-再灌注心脏功能㊂本研究中,缺血30min,再灌注60min后,大鼠血清SOD㊁T-AOC含量降低,MDA含量升高㊂原因是氧自由基清除酶功能降低,导致氧自由基清除减少,总抗氧化能力降低,进一步引起脂质过氧化代谢物MDA增多[12],表明心肌缺血再灌注损伤诱导了心肌细胞氧化应激反应,而TXD预处理可提高SOD㊁T-AOC含量,降低MDA含量,提高机体总抗氧化能力㊂大鼠发生心肌缺血再灌注后,过多的氧自由基,尤其是超氧阴离子与内源性NO结合生成过氧亚硝酸盐,降低血清内源性NO含量[13-15],表明心肌缺血-再灌注损伤可降低血清内源性NO含量,TXD预处理可提高内源性NO含量,内源性NO通过舒张血管平滑肌,降低血小板聚集㊁浸润,改善冠状动脉供血,发挥对心脏的保护作用㊂通过观察心脏病理切片,发现TXD 的预处理可减轻摘除卵巢大鼠心肌缺血-再灌注对心肌细胞损伤的程度,进一步证实了TXD改善大鼠MIRI 损伤作用的机制与提高机体抗氧化能力㊁产生内源性NO有关㊂为进一步探讨TXD胶囊抗心肌缺血再灌注损伤的分子机制,对ERα介导的AKT/eNOS信号通路进行了分析,通过对相关蛋白进行检测,结果显示,MIRI组心肌细胞中ERα蛋白表达量降低,心肌缺血再灌注损伤后p-AKT和p-eNOS蛋白水平降低,TXD预处理可提高心肌缺血再灌注大鼠心肌组织ERα蛋白水平㊁p-AKT 及p-eNOS蛋白表达水平㊂表明信号通路的激活主要依赖于激活ERα后p-AKT蛋白表达水平提高,活化的AKT可进一步活化eNOS进而诱导内源性NO生成,发挥对心脏保护作用㊂综上所述,TXD胶囊对心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制可能通过提高机体总抗氧化能力及激活ERα介导的AKT/eNOS信号通路,增加内源性NO合成,舒张血管,减轻心脏负荷和心肌需氧量,从而发挥对心肌细胞的保护作用㊂参考文献:[1]马文君,马涵萍,王运红,等.‘2021年中国心血管病医疗质量报告“概要[J].中国循环杂志,2021,36(11):1041-1064.[2]黄婷,李绍旦,高路,等.中医药防治心肌缺血再灌注损伤的研究进展[J].医学信息,2018,31(4):31-33;37.[3]栾彤,潘涛.丹参酮注射液对心肌再灌注损伤保护作用及其不同中医证型的疗效差异[J].中西医结合心脑血管病杂志,2012,10(5):524-526.[4]BU W Y,ZHANG Z Y,OCANSEY D K W,et al.Research onnatural products from traditional Chinese medicine in thetreatment of myocardial ischemia-reperfusion injury[J].AmericanJournal of Translational Research,2022,14(3):1952-1968. [5]宋小鹏,安冬青,李方帅,等.天香丹胶囊治疗冠心病心绞痛37例疗效观察[J].河南中医,2012,32(5):588-590.[6]聂阳,黄海潮,陈新颖,等.甘木通总黄酮对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用[J].中成药,2016,38(12):2677-2679.[7]FUENTES N,SILVEYRA P.Estrogen receptor signaling mechanisms[J].Advances in Protein Chemistry and Structural Biology,2019,116:135-170.[8]WANG H W,LIU H J,CAO H A,et al.Diosgenin protects rats frommyocardial inflammatory injury induced by ischemia-reperfusion[J].Medical Science Monitor,2018,24:246-253.[9]RANI N,BHARTI S,MANCHANDA M,et al.Regulation of heatshock proteins27and70,p-AKT/p-eNOS and MAPKs by NaringinDampens myocardial injury and dysfunction in vivo afterischemia/reperfusion[J].PLoS One,2013,8(12):e82577. [10]HE F,XU B L,CHEN C,et al.Methylophiopogonanone Asuppresses ischemia/reperfusion-induced myocardial apoptosisin mice via activating PI3K/AKT/eNOS signaling pathway[J].ActaPharmacologica Sinica,2016,37(6):763-771.[11]GUAN B F,DAI X F,HUANG Q B,et al.IcarisideⅡamelioratesmyocardial ischemia and reperfusion injury by attenuatinginflammation and apoptosis through the regulation of the PI3K/AKT signaling pathway[J].Molecular Medicine Reports,2020,22(4):3151-3160.[12]申静,刘冲,陈文.芳香新塔花总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2018,24(14):115-121.[13]岳志杰,余志斌.一氧化氮对心肌的抑制性保护作用[J].生理学报,2011,63(3):191-197.[14]HEUSCH G,BOENGLER K,SCHULZ R.Cardioprotection:nitricoxide,protein kinases,and mitochondria[J].Circulation,2008,118(19):1915-1919.[15]JONES S P,BOLLI R.The ubiquitous role of nitric oxide incardioprotection[J].Journal of Molecular and CellularCardiology,2006,40(1):16-23.(收稿日期:2022-08-03)(本文编辑薛妮)。

中国卫生产业[基金项目]新疆维吾尔自治区自然科学基金青年基金项目(2018D01C175);省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题基金项目(SKL-HIDCA-2018-26)。

[作者简介]冯志寅(1986-),男,硕士,住院医师,研究方向为肿瘤病理学。

[通信作者]董娟娟(1988-),女,硕士,实验师,研究方向为肿瘤病理学,E-mail:********************。

病理学是重要的医学基础学科,在医学专业学生进行执业考试(如执业医生、执业护士)以及职称考试中都是必考科目,所以学好病理学对医学生来说至关重要。

病理学课程的学习依赖于人体解剖与组织胚胎学、生理学、生物化学等基础学科,是一门授课难度较大、较难掌握的桥梁学科[1]。

高校需充分利用网络资源及平台服务积极开展线上授课和线上学习等在线教学活动,保证教学进度和教学质量。

病理实验教学在病理课程学习中占有很大比例,扎实实验教学是该学科的重要环节[2]。

如何开展线上实验教学帮助学生理解理论课堂上枯燥乏味的DOI:10.16659/ki.1672-5654.2020.32.014数字切片在病理学线上实验教学中的应用探索冯志寅1,吴怡娴2,陈邬锦2,赵雨欣2,董娟娟21.新疆医科大学第一附属医院病理科,新疆乌鲁木齐830011;2.新疆医科大学基础医学院,新疆乌鲁木齐830011[摘要]目的探讨数字切片运用于线上实验教学中的效果与反响保证病理学实验教学质量。

方法2020年3—4月随机将本科2018级临床医学专业中的60名学生分成两组,均通过“钉钉”进行线上授课。

实验组引入“数字切片”联合“中国大学MOOC 病理实验形态学视频”的方式授课,而“传统PPT 讲授”和“中国大学MOOC 病理实验形态学视频”的方式作为对照组,分析比较两组课后绘图作业成绩与阶段性考核成绩,并收集学生关于数字切片运用于线上实验教学的反馈意见。

结果两组学生课后绘图成绩比较差异无统计学意义(P >0.05),而阶段性测试成绩引入数字切片教学组高于传统PPT 教学组,差异有统计学意义(P <0.05)。

新疆医学第49卷基金项目：省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题（项目编号：SKL-HIDCA-2017-7）。

作者简介：陈复刚，男，在职研究生。

研究方向：妇科肿瘤。

通信作者：马彩玲，女，教授/博士生导师，主任医师。

研究方向：妇科肿瘤及妇科内分泌，Email ：hymcl@ 。

·专题研究·患者源性异种移植模型（P DX）在妇科肿瘤领域的研究及应用陈复刚，马彩玲（1新疆医科大学第一附属医院/省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室，乌鲁木齐830054；2新疆医科大学第一临床医学院，乌鲁木齐830011）中图分类号：R 446.8文献标识码：A 文章编号：1001—5183（2019）05—446—05患者源性异种移植模型（Patient-derived xenograft ，PDX ）是通过将患者原发肿瘤或新鲜组织移植到免疫缺陷小鼠体内而建立的模型。

患者源性异种移植模型（PDX ）成瘤率因肿瘤类型、植入部位和肿瘤侵袭性而异。

与传统肿瘤移植模型（小鼠源性异种移植模型和人类肿瘤细胞系小鼠模型）相比，PDX 与患者肿瘤特征非常相似，并保留了分子和组织学特征（如异质性、遗传特性）。

因此PDX 在新药的研发、个体化治疗、肿瘤发病机制的研究等方面成为了理想的临床前模型。

并且随着高度免疫缺陷小鼠的迅猛发展，PDX 的技术也有了新的突破。

本文综述了近年来PDX 在妇科肿瘤领域的研究及其实用性，为妇科肿瘤的研究提供新的视角，提高临床试验结果转化为临床实践的成功率。

1.PDX 的发展肿瘤研究的关键之一是建立合适的动物模型。

其中最重要和最具挑战性的是小鼠肿瘤模型的建立，作为肿瘤标志物的识别工具以及治疗药物筛选的临床前模型，小鼠肿瘤模型必须能模拟疾病的不同阶段[1，2]。

在过去的60年里，小鼠肿瘤模型已经经历了从基因工程小鼠（Genetically engineered mice ，GEM ）到人类肿瘤细胞系再到同种或异种移植模型[3，4]。