第5章免疫凝集试验
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免疫学实验-凝集试验实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后,在有适量电解质存在下,抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块,称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原(Agglutinogen),抗体称为凝集素(Agglutinin)。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷,在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合,形成抗原抗体复合物,降低了抗原分子间的静电排斥力,此时已有凝集的趋向,在电解质(如生理盐水)参与下,由于离子的作用,中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷,使之失去了彼此间的静电排斥力,分子间相互吸引,凝集成大的絮片或颗粒,出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度,对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类,本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板,载玻片,试管(1cm x 8cm),试管架,刻度吸管,滴管,微量可调加样器,滴头(tip头),牙签或火柴棒,记号笔。
2. 灭菌的生理盐水,灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原,布氏杆菌病平板凝集抗原,布氏杆菌病虎红平板凝集抗原,布氏杆菌病阳性血清,布氏杆菌病阴性血清,被检血清(牛、羊或猪)。
4. 鸡白痢平板凝集抗原,鸡白痢阳性血清,鸡白痢阴性血清,被检鸡血清。
[实验内容及操作方法](一)试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备:每份血清用试管4支,另取3支试管作为对照,作好标记,置试管架上。
如被检血清有多份,对照只需做1份。
2. 被检血清稀释:第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水,第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水;然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml,加入第1管中,反复吹吸5次混匀,吸取1.5 ml弃之,再吸取0.5 ml加入第2管中,混匀后吸取0.5 ml加入第3管,依此类推至第4管,混匀后吸弃0.5 ml(见表1-1)。
生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后,在适量电解质存在的条件下,可逐渐聚集,出现肉眼可见的凝集现象,成为凝集反应。
直接凝集试验病原菌(如细菌、螺旋体等)颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后,在适量电解质存在的条件下,经过一定的反应时间后,出现肉眼可见的凝集现象,称为直接凝集反应。
试验中的抗原称为凝集原;抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。
1、玻片法:——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内,自加入待检病原体悬液混合均匀,同时做生理盐水或正常血清对照。
放置室温内数分钟后即可观察实验结果,出现颗粒状凝集者为阳性反应。
优点:其操作简便、迅速,适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。
特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。
细菌薄片凝集试验:(1)实验目的:该试验用于菌种的鉴定及分型.(2)实验材料:待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清(3)实验过程:1.取洁净玻片一张,用蜡笔画为四格。
2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。
3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。
4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀,随即转移1环于第1格中混匀。
5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀,然后移一环菌液于第3格中混匀。
灼烧灭菌。
6.结果:已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集,若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集,表明两种菌为同一种或属。
2、试管法:——肥达试验(试管凝集实验)将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合,39℃温育2~24h后观察结果。
生理盐水加抗原作为对照,应用非特异性自凝现象。
以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。
试管凝集实验为半定量试验,常用于某病原微生物感染的免疫学诊断,亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。
(1)材料:病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。
第五章(2)凝集反应Chapter 15 Agglutination Test第一部分教学内容和要求一、目的要求·掌握:凝集反应的原理、类型及临床应用;熟悉:凝集反应的技术要点、实验影响因素、方法评价、间接凝集常用的载体;了解:凝集反应各阶段的特征。
二、教学内容1。
凝集反应的特点与类型。
2。
直接凝集反应:玻片凝集试验,试管凝集试验。
3。
间接凝集反应:间接凝集反应的类型,间接血凝试验,胶乳凝集试验,间接凝集试验的临床应用。
4.自身红细胞凝集试验。
5.抗球蛋白试验。
第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1.直接抗球蛋白实验用于检测A.血清中结合的抗体B.血清中游离的不完全抗体C.红细胞表面结合的不完全抗体D.红细胞表面结合的完全抗体E.血清中游离的完全抗体2.玻片凝集实验A.只能检测抗原,不能检测抗体B.既能检测抗原,又能检测抗体C.只能检测抗体,不能检测抗原D.为半定量实验E.不能用于ABO血型鉴定3。
下列哪一项不属于玻片凝集试验A。
菌种鉴定 B。
血清学分型 C。
人类ABO血型鉴定D.定量检测前筛选试验 E。
血清抗体效价测定4.试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象A.“+”B.“+或++”C.“++”D.“+++”E.“++++”5.间接抗球蛋白实验用于检测A.血清中结合的抗体B.血清中游离的不完全抗体C.红细胞表面结合的不完全抗体D.红细胞表面结合的完全抗体E.血清中游离的完全抗体6.协同凝集试验所用的载体是A.新鲜红细胞B.洗涤红细胞C.醛化红细胞D.聚苯乙烯颗粒E.金黄色葡萄球菌7.自身红细胞凝集试验红细胞是A.标准新鲜红细胞B.标准洗涤红细胞C.标准醛化红细胞D.受检者未致敏红细胞E.受检者致敏红细胞(二)多项选择题(X型题)1.实验中,促进凝集现象的措施有A.低温离心 B.增加电解质或蛋白质 C.加入右旋糖酐或葡聚糖D.用胰酶处理 E.加入抗原2。
免疫凝集实验一、凝集试验的一般原理当颗粒性抗原与其相应抗血清混合时,在有一定浓度的电解质环境中,抗原凝集成大小不等的凝集块,叫做凝集反应。
通常,细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷,周围吸引一层与之牢固结合的正离子,外面又排列一层松散的负离子层,构成一个双离子层,使颗粒相互排斥。
当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时,抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的电位,而使颗粒聚集在一起二、凝集试验的发生分两阶段1、抗原抗体的特异结合;2、在电解质的参与下,出现可见的凝集颗粒三、凝集试验的分类1、直接凝集试验细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原,在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。
(1)玻片凝集反应(为定性实验方法)材料:1.诊断血清:1:10稀释的伤寒杆菌诊断血清2.菌种:伤寒杆菌、痢疾杆菌24小时琼脂斜面培养物3.生理盐水、载玻片、毛细吸管方法:1.取清洁玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。
无菌操作下,用接种环于1、2格内加1:10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴,第三格加1-2滴生理盐水。
2.无菌操作下,用接种环取伤寒杆菌培养物少许,混于第三格中,再混于第一格中(不能先混第一格再混第三格,因为这样将使诊断血清混入盐水而影响对照结果),将细菌与盐水或血清混合均匀使呈乳状液。
此时取菌量不可过多,使悬液呈轻度乳浊即可。
3.同法取枯草杆菌培养物少许,于第二格内混匀。
4.轻轻摇动玻片,经1-2分钟后肉眼观察,出现乳白色凝集块者,即为阳性反应;仍为平等的乳浊液者,即为阴性反应。
如结果不够清晰,可将玻片放于低倍显微镜下观察。
应用:此法简便、快速,适用于:细菌分离株的鉴定与分型;红细胞ABO血型的鉴定。
(2)试管凝集反应(为定量实验方法)为一种定量试验,用已知抗原检查血清中有无特异抗体,并测定其相对含量。
材料:1.诊断血清1:10稀释伤寒杆菌“H”血清,1:10稀释伤寒杆菌“O”血清。
2.菌液:伤寒杆菌“H”菌液,伤寒杆菌“O”菌液。
免疫学凝集反应实验报告详解标题:免疫学凝集反应实验报告详解摘要:免疫学凝集反应实验是一种常用的实验方法,用于检测体内特定抗原与抗体的相互作用。
本实验报告将详细解释免疫学凝集反应的原理、操作步骤和结果分析,并重点讨论其在医学诊断和研究中的应用。
引言:免疫学凝集反应是基于抗原与抗体之间的特异性结合发生凝集现象的原理的实验方法。
这种反应在许多领域具有重要的应用,特别是在免疫学研究和临床诊断中。
本篇实验报告将对免疫学凝集反应进行详细讲解,以便读者对其原理和应用有更深入的理解。
1. 原理:1.1 抗原与抗体结合的基本原理1.2 凝集反应的产生机制2. 实验操作步骤:2.1 实验所需材料和试剂2.2 准备工作2.3 操作步骤的详细说明2.4 容器和条件的选择2.5 实验控制组的设置2.6 实验操作的注意事项3. 结果分析:3.1 凝集反应的结果观察和记录3.2 凝集度的评价和解读3.3 实验结果的统计分析4. 免疫学凝集反应的应用:4.1 医学诊断中的应用4.2 免疫学研究中的应用4.3 其他领域的应用概述5. 总结和回顾:5.1 免疫学凝集反应的优点和局限性5.2 实验操作中需注意的问题5.3 前景和发展方向观点和理解:在本实验报告中,我对免疫学凝集反应原理和应用有了更深入的理解。
凝集反应是免疫学研究中一种重要的实验方法,通过观察抗原与抗体结合的凝集现象,可以对某些疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
在实验操作中,我们需要注意实验步骤的正确性和实验条件的控制,以确保实验结果的可靠性。
免疫学凝集反应的应用非常广泛,涉及医学、兽医学、食品安全等多个领域,其未来的发展势必会更加广阔。
结论:本实验报告详细探讨了免疫学凝集反应的原理、操作步骤和结果分析,并强调了其在医学诊断和研究中的重要性。
通过深入理解免疫学凝集反应的原理和应用,我们可以更好地利用这一实验方法来服务于生物医学领域的发展和进步。
(字数:416)。
第五章凝集反应细菌、红细胞等颗粒抗原,或可溶性抗原(或抗体)与载体颗粒结合成致敏颗粒后,它们与相应抗体(或抗原)在适当电解质存在下,形成肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应。
第一节凝集反应的特点凝集试验是一个定性的检测方法,即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性;也可进行半定量检测,即将抗体作一系列稀释,与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。
凝集反应分为两个阶段:①抗原抗体的特异性结合;②出现可见的颗粒凝聚。
第二节直接凝集反应一、原理细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原,在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。
参加凝集反应的抗原称凝集原,抗体则称为凝集素。
二、方法有玻片法和试管法两类。
(一)玻片凝集试验主要用于抗原的定性分析,短时间便能观察结果。
一般用来鉴定菌种或分型;也用于人类ABO血型的测定。
(二)试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合,保温静置后,根据每管内颗粒凝集的程度,以判断待检血清中有无相应抗体及其效价。
可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。
例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。
第三节间接凝集反应一、原理间接凝集反应是将可溶性抗原(或抗体)先吸附于适当大小的颗粒性载体表面,然后与相应抗体(或抗原)作用,在适宜电解质存在的条件下,出现特异性凝集现象。
二、间接凝集反应的类型(一)正向间接凝集反应可溶性抗原致敏载体,用以检测标本中待测抗体的凝集反应,称为正向间接凝集反应。
(二)反向间接凝集反应特异性抗体致敏载体,用以检测标本中待测抗原的凝集反应,称为反向间接凝集反应。
(三)间接凝集抑制反应先将可溶性抗原(或抗体)与相应的抗体(或抗原)混合,然后再加入抗原(或抗体)致敏的载体颗粒,则能抑制原先的凝集现象,称为正向(或反向)间接凝集抑制试验。
间接凝集抑制试验可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体,也可测定抗原。
(四)协同凝集反应协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似,但所用载体为金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)。
免疫凝集反应实验报告免疫凝集反应实验报告免疫凝集反应是一种常用的实验方法,用于检测特定抗原和抗体之间的相互作用。
通过观察凝集反应的形成与否,可以判断样品中是否存在目标物质,从而进行疾病的诊断和治疗。
在本次实验中,我们选择了血清中的抗体作为检测目标。
首先,我们需要制备一系列稀释的抗原溶液,以便与待测抗体发生反应。
这些抗原溶液可以是细菌、病毒、细胞膜蛋白等。
在实验中,我们选择了一种常见的病原体,即流感病毒。
接下来,我们需要将待测抗体与抗原溶液混合。
在混合过程中,抗体与抗原之间会发生特异性结合,形成免疫复合物。
当抗原与抗体的浓度适当时,免疫复合物会发生凝集反应,即形成可见的沉淀物。
为了观察凝集反应的结果,我们采用了显微镜进行观察。
将混合液滴在载玻片上,然后放置在显微镜下进行观察。
如果出现了凝集反应,我们可以看到显微镜下形成的沉淀物。
沉淀物的形状和大小可以提供有关抗原与抗体结合程度的信息。
在实验过程中,我们发现了一些有趣的现象。
首先,我们发现凝集反应的程度与抗原与抗体的浓度有关。
当抗原或抗体的浓度过高或过低时,凝集反应的程度都会减弱。
这是因为在过高或过低的浓度下,抗原与抗体的结合机会减少,从而减少了凝集反应的可能性。
其次,我们还观察到了凝集反应的时间和温度对实验结果的影响。
在适宜的温度下,凝集反应的速度会加快,形成的凝集物也更为明显。
然而,过高或过低的温度都会影响凝集反应的进行,甚至完全阻止凝集的形成。
因此,在进行免疫凝集反应实验时,选择适宜的温度非常重要。
最后,我们还进行了一些控制实验,以确保实验结果的准确性。
例如,我们在反应中添加了阴性对照组,即不含抗原的溶液。
通过与阴性对照组进行比较,我们可以排除非特异性凝集的可能性。
此外,我们还进行了阳性对照实验,即添加已知含有抗原的溶液。
阳性对照实验的结果可以验证我们实验的可靠性和准确性。
总结起来,免疫凝集反应是一种简单而有效的实验方法,用于检测特定抗原和抗体之间的相互作用。