实验十四 血清甘油三酯(TG)的测定
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实验十二 血清甘油三酯（TG）的测定
血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。近年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法：
一、酶法测定甘油三脂
【原 理】
甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油和ATP在甘油激酶（GK）的作用下生成3－磷酸甘油和ADP，3－磷酸甘油经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。过氧化氢、4－氨基替吡啉和苯酚在过氧化物酶（POD）的微化生成红色的醌类化合物，颜色的深浅与含量成正比。反应过程如下：
1、TG 甘油＋脂肪酸
2、甘油＋ATP 3－磷酸甘油＋ADP
3、3－磷酸甘油＋O2 磷酸二羟丙酮＋H2O2
4、H2O2＋4－氨基安替吡啉＋苯酚 红色醌类化合物
【试 剂】
TC酶试剂盒（商品）
【操 作】
取三支试管，按下表操作：
标准管 测定管 空白管
血清（μl） — 20 —
TG标准液（μl）（2mg/ml） 20 — —
TG酶工作液（ml） 1.0 1.0 1.0
H2O（μl） — — 20
混匀，37℃水浴15分钟，保温结束后，以空白管调零，520nm处比色测定光密度。
【计 算】
TG（mg%）×2×0.02×
正常值：50－150mg％
【注意事项】
1、清晨空腹血清为好。
2、干粉配成酶工作液后，在2—8℃条件下可保存7天。
【临床意义】 血清TG随进食脂肪后即见上升并出现混浊。空腹脂肪餐后2—4小时内，血清混浊度及甘油三酯含量达高峰，8小时后，基本恢复空腹水平。血清TG有随年龄而上升的趋势，体重超过标准者也往往偏高。
家庭性脂质代谢紊乱、糖尿病、肾病综合症、粮原累积病、动脉粥样硬化、酒精中毒、垂体、甲状腺功能低下者、胰腺炎等疾病TG可增高。
原发性β－脂蛋白缺乏、甲状腺机能亢进、肾上腺皮质机能不全等疾病TG均可降低。
二、乙酰丙酮法
【原 理】
血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。与同样处理的标准液比色计算，即得血清中甘油三酯的含量，反应式如下：
【试 剂】
1、抽提剂：正庚烷/异丙醇＝2/3.5（v/v）
2、0.04MH2SO4
3、异丙醇（A.R）
4、皂化试剂：取6.0gKOH溶于60ml蒸馏水中，然后取异丙醇40ml混合，置棕色瓶中室温保存。
5、氧化试剂：称取65mg过碘酸钠溶于约50ml蒸馏水，然后加入7.7g无水醋酸铵溶解，再加6ml冰醋酸，并加水至100ml。贮棕色瓶内室温保存。
6、乙酰丙酮试剂：0.4ml乙酰丙酮加到100ml异丙醇中，混匀，置棕色瓶内室温保存。
7、三油酸甘油酯标准液：
贮存液（10mg/ml）：精确称取三油酸甘油酯1.000g，溶解于抽提剂中，定容至100ml，置冰箱存。
应用液（1mg/ml）：贮存液用抽提剂10倍稀释，置冰箱保存。 【操 作】
带塞试管3支，编号，按下表操作：
测定管 标准管 空白管
血清（ml） 0.2 — —
应用标准液（ml） — 0.2 —
蒸馏水（ml） — 0.2 0.2
抽提剂（ml） 2.5 2.3 2.5
0.04MH2SO4(ml) 0.5 0.5 0.5
边加边摇，加好后，剧烈振摇15分钟，静置分成二相后，准确吸取各管上层清液0.3ml，分别加至另外三支试管中。按下表操作：
异丙醇（ml） 1.0 1.0 1.0
皂化试剂（ml） 0.3 0.3 0.3
充分混匀，置65℃水浴中3分钟
氧化试剂（ml） 1.0 1.0 1.0
乙酰丙酮试剂（ml） 1.0 1.0 1.0
混匀，置65℃水浴中15分钟，取出后冷却，于420nm处，以空白管调零点，读取各管光密度。
【计 算】
甘油三酯mg= ×0.2× = ×100
【注意事项】
1、应空腹采血，否则结果偏高。
2、显色后光密度随时间延长而略增高，故应立即比色。标本多时，可置冷水浴中逐管比色，这样对结果影响不大。
