细胞消化液的配制操作规程

配制组织消化液的方法1.引言1.1 概述本文旨在介绍配制组织消化液的方法。

组织消化液是一种常用的实验试剂，用于在生物学研究中对组织样本进行消化，以提取相关的生物分子或细胞。

本文将从配制组织消化液的方法要点入手，详细介绍组织消化液的制备步骤、配比比例及其注意事项。

在进行组织消化液的配制时，首先需要选择适当的消化酶或酶组合。

常用的消化酶包括蛋白酶、胰蛋白酶、胆酶等，不同的消化酶会对不同的组织产生不同的效果。

因此，在选择消化酶时，需要根据实验目的和组织类型进行合理选择。

其次，在配制组织消化液时，准确计量各种试剂和溶液是非常重要的。

通常，需要根据组织样本的数量和大小来确定试剂的用量，以确保消化液的浓度和作用时间的准确性。

此外，还应注意将试剂逐一加入容器中，并进行充分搅拌或振荡，以保证各种试剂充分混合。

在制备组织消化液时，温度和pH值也需要严格控制。

通常，较高的温度可以加快酶的活性，但超过一定温度会导致酶的降解或失活。

因此，在制备过程中，应根据实验要求和酶的特性来确定最适宜的温度。

同时，pH值的控制也是非常重要的，pH值偏离了酶的最适酶活性范围，会导致酶的活性降低，进而影响组织消化的效果。

最后，在配制组织消化液时，需要注意安全操作。

有些消化液可能具有刺激性气味或有毒性，因此在操作过程中要佩戴适当的防护设备，如手套和护目镜，以确保人员的安全。

综上所述，配制组织消化液的方法是进行生物学实验中必不可少的一部分。

在制备过程中，应合理选择消化酶、准确计量试剂、控制温度和pH 值，并严格遵守安全操作规范。

只有遵循正确的方法，才能获得准确可靠的实验结果。

文章结构部分应包括对整篇文章的结构和组织方式进行介绍，以帮助读者理解文章的内容和思路。

以下是对文章结构部分的内容进行编写：1.2 文章结构本文将按照以下结构进行阐述配制组织消化液的方法：引言：首先，我们将概述本文的主题，并简要介绍组织消化液的背景和重要性。

接着，我们会阐明文章的结构和组织方式，以便读者可以更好地理解整篇文章的内容和思路。

0.25%胰酶-EDTA的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。

低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力实验常用溶液的配制1.革兰氏碘液：称碘化钾2g溶于100ml蒸馏水中，再加1g碘使其溶解，最后用蒸馏水稀释至300m1，盛于棕色瓶内，保存于暗冷处。

2.1.苯酚品红改良液（一）①A液：取3克碱性品红，溶于100ml 70％酒精中（此液可长期保存）。

②B液：取A液10m1，加入90ml 5％苯酚水溶液（一般在两周使用为好）。

③C液：取B液45m1，加入 6ml冰醋酸和6ml 37％甲醛。

④、苯酚品红改良液：取C液10m1，加入90ml45％冰醋酸和1克山梨醇。

2.2.苯酚品红改良液（二）：A液：碱性品红3g＋100ml 70％乙醇。

B液：A液10ml＋5％苯酚水溶液90m1。

C液：B液120ml＋冰醋酯12ml＋甲醛12ml。

D液：C液120ml＋45％冰醋酸480ml。

在D液中加1％山梨醇（600mlD液中加 6g山梨醇），此液配好后至少放4一5天方可使用，可保存几年。

3.1.甲基绿一哌罗宁混合染液（一）：①醋酸缓冲液（pH4.8）0．2mol.L-1醋酸（A.R）（取1.2ml加蒸馏水至100ml）4份0．2mol.L-1醋酸钠（A.R）（取2．72g加蒸馏水至100ml）6份。

BioWiseTech Co., LTD.1AdvCell ®组织/细胞分离消化液AdvCell ® 组织/细胞消化液用于人或动物组织分离过程中的组织或细胞消化， AdvCell ®组织/细胞消化液是严格无菌、无病毒和支原体的污染，性能稳定，适用于原代组织细胞的制备。

★ 产品内容名称产品号 规格 贮藏条件 运输 AdvCell ®组织/细胞消化液AdvCell ® Tissue/Cell Isolation &Digestion SolutionBTIDS001100 ml-20℃避光干冰★ 产品适用范围适用于人及动物细胞的制备。

★ 使用方法1. 对于块状组织样品的预处理：超净台或者生物安全柜中将组织置于无菌的50 ml 离心管中，再加入2倍 体积的AdvCell ®组织淋洗液清洗三遍；最后将清洗好的脂肪组织置于6 cm 或者10 cm 的细胞培养皿中， 用手术剪把样品迅速剪成约1立方毫米大小（15分钟之内完成）。

2. 对于胶状组织样品的预处理：在超净台或者生物安全柜中，将组织置于无菌的50 ml 离心管中，再加入 等倍体积的AdvCell ® 组织淋洗液清洗两遍，每次离心（1200 rpm ，5 min ）后用吸管去除液体；剩余组 织置于6 cm 或者10 cm 的细胞培养皿中，用手术剪把样品迅速剪成约1立方毫米大小（15分钟之内完 成）。

3. 样品消化：将剪碎的组织样品用无菌的一次性滴管吸入到50 ml 干净无菌的离心管中，并加入等体积的 AdvCell ®组织/细胞消化液后，混合均匀；在37℃水浴锅中消化30-40分钟，期间每隔5分钟就将样 品摇晃均匀一次。

4. 细胞收集：消化完成之后，在超净台中，用一次性无菌滴管用力吹打5到7次（一分钟之内完成），然 后常温离心（1200rpm ，5min ），只保留离心管底部的细胞沉淀。

细胞消化步骤细胞消化呀，这可是个很重要的事儿呢！就好像我们做饭要掌握好火候和步骤一样。

首先呢，得把细胞培养皿拿出来，这就好比厨师要先找到合适的锅。

然后呢，得小心地把培养液吸掉，可别太粗鲁啦，不然细胞宝宝们会不高兴的。

这就像我们洗菜，得轻轻柔柔的，不能把菜叶子弄破了。

接下来，就该加入消化液啦！这消化液就像是神奇的魔法药水，能让细胞们松开彼此的手。

但是可不能加太多或太少哦，这就跟放盐一样，多了咸，少了没味道。

加完消化液后，就得把培养皿放到培养箱里孵育一会儿啦。

这时候呀，细胞们就在里面慢慢发生变化呢，就像面团在发酵一样。

等过了一会儿，就得去看看细胞消化得怎么样啦。

如果看到细胞都变圆了，还飘起来一些，那就差不多啦。

这就像蒸馒头，看到馒头变得白白胖胖的，就知道差不多熟了。

然后呢，再加入适量的培养液终止消化。

这就好比做菜的时候，该加调料了，得恰到好处，不然味道就不对啦。

接着，就可以把细胞混悬液吸出来啦，转移到新的管子或培养皿里。

这就像把做好的菜盛出来一样。

在整个过程中，一定要轻手轻脚的，就像对待宝贝一样对待细胞们。

要是太粗鲁了，细胞们可是会“抗议”的哦！你想想，要是有人对你很粗暴，你会开心吗？细胞们也是有感觉的呀！而且呀，做细胞消化可不能着急，得有耐心。

就像炖汤，得小火慢慢炖，才能炖出美味的汤来。

要是火太大，汤就烧干啦，细胞也会被你搞坏的哟！还有哦，每次做细胞消化都要认真仔细，就像做一件很重要的事情一样。

不能马虎，不能偷懒。

不然细胞养不好，实验可就没法进行下去啦！总之呢，细胞消化虽然看起来简单，但是里面的学问可大着呢！只有认真对待，才能让细胞们茁壮成长，为我们的科学研究做出贡献呀！这可绝对不是开玩笑的哟！。

细胞培养液配制操作规程
试剂和器材准备：
1. 用三角瓶装1L 超纯水，放入搅拌子，盖上铝箔纸，121摄氏度高压灭菌30分钟，冷却过夜。

2. 过滤器装好滤膜后用报纸包装好，121摄氏度高压灭菌30分钟。

3. 装培养液的试剂瓶瓶口用铝箔纸包好，140摄氏度烘烤3小时。

配制过程：
1. 将盛有灭菌超纯水的三角瓶放到磁力搅拌器上，搅拌速度以液面恰能产生漩涡为宜。

2. 打开干粉培养液的包装，将干粉慢慢加入容器，边加边搅拌
3. 往包装袋内加入适量的超纯水使残留的培养液粉末溶解并倾倒入三角瓶内，如此清洗数遍
4. 添加NaHCO3。

RPMI1640添加2.0g NaHCO3，DMEM添加3.7g NaHCO3。

5.搅拌约2小时待干粉完全溶解。

6. 用1N NaOH 和1N HCl调节培养液pH在
7.1～7.2，调节好pH后盖紧容器。

7. 加入5 mL 200×的PS双抗，搅拌均匀。

8. 0.22um微孔滤膜过虑除菌，分装到试剂瓶中，盖好瓶盖密封，4摄氏度保存。

使用前添加血清，使血清含量为10％。

未加血清的培养液可在4摄氏度保存8个月，加血清后应在1个月内用完。

9. 检验。

取过滤后的培养液3～5mL，置于无菌的35mm培养皿中，放入培养箱中培养两天，检查是否有长细菌。

注：
1. 过滤完毕后应及时把过滤器和试剂瓶清洗干净。

清洗过程：自来水冲洗，蒸馏水洗3遍，超纯水洗一遍，沥干，烘干
2. 本操作规程以配制1L为例，配制量多时各组分应等比例增加。

1。

细胞消化实验步骤
1.制备消化液。

将适量的酶加入含有适当缓冲剂和酶作用最适温度的
溶液中，如在体外消化细胞，可使用胰酶、胆盐和缓冲液组成的胰液消化液。

2.收集细胞样本。

可以用组织培养方法培养细胞或取自动物或植物组
织切片。

3.准备细胞样本。

将细胞转移到消化液中，并在适当温度下孵育和混合，使细胞膜破裂，并释放细胞器。

4.观察细胞消化过程。

消化液可通过可见光或电子显微镜等工具观察，并记录消化液对细胞膜、质壁、细胞核、细胞质以及其他细胞器的消化过程。

5.分离细胞残余物。

将消化液离心，得到消化液上清液和残余物。

上
清液中包含被消化的小分子物质，残余物，则可用其他方法进行分析和研究。

细胞消化液的配制操作规程一、目的：建立细胞消化液的配制规程，规范操作。

二、适用范围：0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶溶液的配制、除菌。

三、责任者：操作人员。

四、正文：1.配制：1.1按十万级更衣程序进入配液室,洗手、消毒手臂。

1.2按规程准备相应的化学试剂：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、蛋白酶（1：250）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）1%酚红溶液。

1.3准备所需要的器具：根据配制量准备相应大小的洁净的血清瓶、玻璃棒、天平等。

1.4检查注射用水水质是否符合要求，注射用水冷却至25℃以下备用。

1.5根据所要配制的体积量，计算所需要的化学试剂量，具体配方如下：1L 0.02%EDTA-0.25%胰酶消化液配方NaCl 8.5gKCl 0.2gNa2HPO4·12H2O 2.9gKH2PO4 0.2gEDTA-2Na 0.2g胰酶(1:250) 2.5g1%酚红溶液 0.2ml1.6取一相应大小洁净的血清瓶,加入注射用水800毫升，按上述配方依次称量各试剂，加入水中搅拌溶解,当第一种试剂完全溶解后加入下一种试剂，依次加完所需的试剂，其中EDTA和胰蛋白酶(1：250)可采用分别单独溶解的办法,溶解后分别加入上述溶液中，补水到1L摇匀，注意不能起泡沫。

1.7 4℃温放置6小时以后（或过夜），在层流罩下，用微孔除菌滤器（0.1um）正压过滤，分装到小瓶中（根据细胞产量确定装量），做好标识（溶液名称、批号、日期）。

1.8分装后按分装前、中、后顺序各抽样1瓶，在酒精灯控制下做无菌检验， 5～7天以后观察结果。

分装好的溶液-20℃保存冷冻保存，待鉴定溶液无菌后，方可投入生产。

2 使用时，用7.5%碳酸氢钠溶液调整pH值至7.6-7.8。

3.填写记录：批记录。

细胞培养液配制的流程
细胞培养液配制的流程：
①材料准备：
- 准备所需的所有化学试剂、培养基粉末、抗生素、血清、pH指示剂、无菌水或三蒸水。

②滤器消毒：
- 准备0.45μm和0.22μm孔径的滤膜，浸入三蒸水中，然后置于滤器上，打包后进行高压蒸汽灭菌。

③容器准备：
- 确保所有使用的容器（如烧杯、量筒、移液管等）都是干净且无菌的。

④溶解培养基：
- 将培养基粉末倒入无菌容器中，加入预热的三蒸水，使用磁力搅拌器充分搅拌直至完全溶解。

⑤添加补充成分：
- 按照实验需求，向溶解的培养基中加入nahco3、抗生素（如青霉素和链霉素）、L-谷氨酰胺等成分。

⑥加入血清：
- 如果配方需要，加入胎牛血清或其他类型的血清，通常为10%或20%体积比。

⑦ pH调节：
- 使用pH计检测溶液的pH值，根据需要加入1N HCl或1N NaOH进行调节，直至达到目标pH值。

⑧温度控制：
- 将配制好的培养液加热至接近细胞培养的温度（37°C左右），以防止温度骤变影响细胞。

⑨过滤除菌：
- 通过0.22μm孔径的滤器过滤培养液，以除去任何可能存在的微生物。

⑩分装：
- 将过滤后的培养液转移到无菌的细胞培养瓶或培养皿中，避免空气中的微生物污染。

⑪标记与记录：
- 在容器上标记培养液的类型、批号、配制日期以及有效期，并记录所
有操作细节。

⑫储存：
- 将配制好的培养液储存在适当的温度下，通常是4°C，直到使用前再恢复至室温或培养温度。

细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。

（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。

(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。

(4)调节pH值至7.2~7.4。

(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。

此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。

(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。

（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。

配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。

3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。

细胞实验乳腺组织块贴壁迁出细胞后胰酶消化：先把培养液、pbs、胰酶消化液放37℃水浴锅，倒掉培养液，加入0.25%（0.125%也可以）胰酶3 min，镜下观察细胞消化情况。

若消化不完全则继续消化，消化完全则加入等量培养液终止消化，反复吹打，将液体加入1.5 ml离心管。

对于一次难以消化下来的组织块，可以多加几次胰酶，每次消化后都要加入pbs洗一洗，然后再加入胰酶继续消化。

将离心管1000 rpm离心5分钟，去上清，加入培养液，重悬，置于合适的培养皿。

细胞换液：将pbs、培养液放37度水浴锅预热。

取出细胞镜下观察生长情况和杂质多少，倒掉原有培养液，用pbs洗一遍（杂质较多时可洗两遍），从壁上加入培养液。

细胞传代：先把培养液、pbs、胰酶消化液放于37℃水浴锅，取出细胞镜下观察生长情况和杂质多少，倒掉原有培养液。

加入0.25%胰酶，消化3 min，镜下观察消化情况。

消化完全则加入等量培养液终止消化，加入离心管内，1000 rpm离心5 min，去上清，加入培养液，重悬，置于合适的培养皿。

标记传了第几代。

注意：（1）293T细胞只需用胰酶消化大概1 min，不用放入培养箱；（2）293T 细胞不需要用PBS重悬，直接加培养液重悬。

对于加入裂解液或者原代培养的细胞需要PBS重悬来洗杂质；（3）加入6孔板时，用1 ml培养液重悬后，每孔加入100 μl。

可根据细胞数量调整加入的量。

细胞复苏：1.调节水温至37℃，取出细胞（4#5号第四格），放入手套中再浸入水中解冻；2.1000 rpm离心5 min，弃上清，用PBS清洗1遍（做磁珠的话用Buffer洗），加入培养液培养。

细胞冻存：需冻存的细胞先用PBS洗一遍，再加入胰酶消化3 min，1050 rpm离心5 min。

沉淀用细胞冻存液重悬，加入冻存管，-80℃保存过夜，第二天转移到液氮罐（4#5号第四格）。

注意：1.配置10% DMSO细胞冻存液：900 μl过滤的血清+100 μl DMSO。