大鼠失血性休克致肠道菌移位模型
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多种因素可引发肠 源性感染 , 如严重创伤、 烧 伤、 休克、 肝切除、 胰腺炎、 应用免疫抑制剂等。大鼠 烫伤和失血性休克所致肠道菌移位是肠源性感染的 常用模型。本实验室曾以大鼠失血性休克模型进行 肠源性感染机制及改善措施的研究 , 现将模型制作 方法及一些基础数据简要介绍如下。
持续 70min 后, 以输回所有放出血液( 放出的血液在 37 ! 温箱保温) 的方法使动物复苏。对照组动物除 不放出和输回血液外, 其他处理与模型组相同。另 外 , 动物复苏时血液回输速度要慢, 以 < 2ml min 为 宜。 1 32 检测项目: 在复苏后 0、 2、 6、 12、 24、 48h 各处 死 1 组动物, 对照组插管 70min 后处死 , 分别检测以
54. 4 22. 3 102. 3 142. 4
9. 3
0. 9
*
19. 7 10. 2
1548. 5 1038. 1* * 2267. 7 1768. 1 1104. 8 598. 9 745. 4 487. 7 844. 4* 649. 1
**
238. 2 143. 5** 328. 2 203. 9 275. 5 166. 8
1
1 1
材料和方法试剂 戊巴比妥钠, 批号 :来自860901, 佛山市化工 实验二
下指标 : 血液生化 : 以日立 - 7150 型自动生化分析仪检 测血 清 磷 酸 激 酶 ( CK) , 天门 冬 氨 酸 氨 基转 换 酶 ( AST) 、 丙氨酸氨基转换酶( ALT) 、 肌酐 ( CR) 、 尿素氮 ( BUN) 和血糖( GLU) 。 细菌培养与鉴定: 在超净工作台中, 无菌取心室 血和肠系膜淋巴结 ( MLN) 、 肝、 脾、 肾组织块, 迅速置 20g, 由解放 硫乙酸 钠液体培养基 中, 37 ! 培养 , 分别 于 24h 和 48h 观察结果。阳性管进行需氧菌与厌氧菌分离培 养 , 分别用 G 菌和 G 菌鉴定实验卡进行鉴定, 以 自动微生物系统仪判定结果。 病理检查: 取心、 肺、 肝、 脾、 肾、 胃和不同肠段, 以 10% 福尔马林溶液固定, 常规制作石蜡切片, H. E. 染色, 胃 肠道增 加细 菌染色 , 光 学显 微镜观 察。 每组另取 4 例回肠组织, 以 pH7. 4 的戊二醛和锇酸 双固定, 醋酸双氧铀 ∀ 柠檬酸铅染色, 日立 H- 7000 型透射电子显微镜观察。
收稿日期 : 2000 05 15
2
结果
2 1 放血量
作者简介 : 刘亚千 ( 1973- ) , 男 , 满 族 , 技师 , 现从事实验动物学方面的研究工作。
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实验动物科学与管理
2001 年 ( 第 18 卷 ) 第 3 期
多数大鼠首次放血 7 ∀ 8ml 后血压即可降至 30 mmHg 。此后血压将逐渐回升, 这时应该注意缓慢少 量放血 , 并以放出或回输血液的方法使血压稳定在 30mmHg。模型 制作过 程中, 多数 大鼠放 血总量 在 11 ∀ 12ml 左右 , 个别动物接近 15ml。 2 2 血液生化检测结果( 表 1)
[ 1] Baker J W, Deitch EA, M a L, et al . Hemorrhagic shock in duces bacterial translocation from the gut. J Trauma, 1988, 28: 896. [ 2] Brandtzaeg P, Sollid L M , Bjerke K, et al . Interactions of lym phoid cells with the epithelial environment. Monogr Allergy, 1988, 24: 51.
第 18 卷 第 3 期 2001 年 9 月
实验动物科学与管理 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINISTRATION
Vol. 18 No. 3 Sep. 2001
技术 方法
大鼠失血性休克致肠道菌移位模型
刘亚千 , 陈 华, 黄丽杰
100853) ( 解放军总 医院医学实验动物中心 , 北京 关键词 : 动物模型 ; 肠源性感染 ; 失血性休克 ; 大鼠 中图分类号 : Q865 1+ 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1006- 6179( 2001) 03 0047 03
血液生化检测结果 ( X
ALT ( iu l ) 34 7 6 3
*
S)
CR ( mmol l) BUN ( mmol l ) 7 0 1 5
**
AST ( iu l) 54 3 8 3 86. 1 25. 8
**
GLU ( mmol l ) 9 8 1 5 9. 3* * 3. 0
41 4 5 1 90. 9 59. 1 55. 7 46. 1 49. 7 46. 7 8. 9
**
79. 2 51. 6 105. 5
452. 3 349. 9** 128. 6 96. 2
*
57. 6**
42. 6 19. 7
注 : 与对照组相比 , * p < 0. 05; * * p < 0. 01
2 3
细菌培养与鉴定结果 ( 表 2)
大鼠复苏后 6h 在肠系膜淋巴结 ( MLN) 中检出 肠道菌, 24h 肠道菌在血液中出现 , 48h 脏器中细菌 检出率最高。培养阳性细菌经鉴定 , 根据出现频率 依次为 : 大肠杆 菌、 D 族 链球菌、 粪肠球 菌、 丁酸 梭 菌、 嗜酸乳杆菌、 G 杆菌、 奇异变形杆菌。
90min 三个不同时间 , 比较肠道菌移位情况 , 结果发 现休克持续 90min 组的大鼠肠道菌移位发生率 ( 5 5) 高于 30、 60min 组, 但动物死亡率 ( 5 10) 也高。本 实验室将大鼠 休克持续在 70min, 肠道 菌移位发生 率为 6 10, 动物死亡率为 2 10, 肠道菌移位发生率高 于 Baker 所 作 60min 组, 动 物 死 亡 率低 于 其 所 作 90min 组。因此认为, 以 大鼠失血性休 克复制肠道 菌移位模型 , 在血压维持 30mmHg 时 , 休克时间选择 在 60 ∀ 90min 之间为宜。 此外, 本模型在大鼠复苏后可观察到明显的胃 肠道、 肝脏和心脏损 伤, 在复 苏后 48h 损伤 基本恢 复 , 但胃粘膜损伤可持续至 48h 后。 参考文献:
+
厂生产。肝素钠 , 批号: 970318, 徐州生物化 学制药 厂生产。硫乙酸钠培养基 , 批号: 970424, 国 家卫生 部药品生物制品检定所生产。 1 2 实验动物及分组 清洁级雄性 S. D. 大鼠, 体重 350 军总医院医学实验动物中心提供 , 合格证: D98010; 动物实验环境为清洁级, 合格证 : D98006。将大鼠随 机分为对照组和休克复苏后 0、 2、 6、 12、 24、 48h 组 , 每组取存活动物 10 只。 1 3 实验方法 [ 1] 1 3 1 模型复制: 参照 Baker 的方法 , 将大鼠禁食 12h 后, 以戊 巴比妥钠麻醉 ( ip, 45mg kg) , 将大 鼠仰 卧固定 , 剪去腹股沟及大腿内侧被毛, 用碘伏消毒 , 无菌剥离股动脉 , 以聚乙烯塑料管行动脉插管 , 该管 经三通阀与血压计和 10ml 注射器相连接, 插管后立 即注入 0 3ml 肝素生理盐水 ( 含肝素 300iu) , 通过放 出和输回血液的方法使大鼠血压保持在 300mmHg,
** **
58. 4** 133. 1
* *
17. 8** 8. 7 5. 7 5. 7* * 4. 5
**
11. 5 2. 1** 11. 9 2. 1 6. 6 7. 0 6. 9 1. 4 1. 7 1. 1
**
9. 6 2. 4 8. 0 0. 8** 9. 0 0. 9 9. 6 1. 6
表 2 细菌培养 结果( 阳性例数 )
分组 对照组 0h 2h 6h 12h 24h 48h 血 兼 0 0 0 0 0 4 1 厌 0 0 0 0 0 1 1 MLN 兼 0 0 0 3 2 1 6 厌 0 0 0 2 1 1 6 兼 0 0 0 0 2 4 4 肝 厌 0 0 0 0 0 5 3 兼 脾 厌 兼 0 0 0 0 1 0 4 肾 厌 0 0 0 0 0 0 2
+
整 , 固有层可见结缔组织增生。12h, 胃及所有小肠 段均可见细菌侵入粘膜层甚至粘膜下层 , 以空肠粘 膜最多见。胃粘膜变性坏死灶范围扩大 , 严重部位 波及粘膜全层。小肠有的中央乳糜管扩张 , 固有层 仍可见结缔组织增生。 24h, 胃粘膜坏死灶波及粘膜 全层 , 肠粘膜有的部位固有层仍见增生相。48h, 胃 粘膜变化与 24h 时类似 , 肠粘膜已 基本恢复 正常。 ( 2) 电镜检查: 细菌进入肠上皮细胞的过程主要见于 休克复苏后 0h 和 2h。在 2h, 固有层也可见细菌侵 入。6h, 固有层可见坏死细胞 , 同时可见成纤维细胞 活化现象。在淋巴管中发现细菌。12h, 有的肠绒毛 中央乳糜管扩张 , 偶见红细胞漏出血管外。48h, 基 本与对照组无差异。 2 4 2 其 他脏器 : 与对照 组相比 , 检 测脏器 中心、 肝、 脾出现形态异常。 心脏 : 休克复苏后, 心肌细胞出现轻度肿胀, 横 纹不清。 2 ∀ 6h 后, 心肌轻度淤血 , 少数动物发展为 轻度颗粒变性。12 ∀ 24h, 少数动物心肌病变进一步 加重, 严重部位肌细胞胞浆趋于均质 ; 而有的动物仍 为肌细胞轻度肿胀 ; 有的却已 基本恢复 ; 至复苏后 48h, 大部分动物已基本恢复正常。 肝脏: 休克复苏后 , 肝细胞肿胀、 颗粒变性, 以中 央静脉周围变化明显。 2 ∀ 6h 后, 发展 为广泛的颗 粒变性。 12h, 又出现中央静脉周围肝细胞变性显著 的现象, 此时可见少量散在的肝细胞发生凝固性坏
