小鼠急毒实验标准操作LD50 SOP

小鼠口服枸橼酸托烷司琼原料急性毒性试验摘要小鼠一次灌胃枸橼酸托烷司琼原料，连续观察14 天。

观察行为反应并记录死亡情况。

死亡小鼠解剖可见心脏瘀血。

存活者第15 天全部解剖，肉眼检查主要脏器未见明显病变。

其死亡率用Bliss 法求得枸橼酸托烷司琼LD50 为418.29 mg/kg；95 可信限为390.74 447.79 mg/kg。

1.0 实验目的观察受试物一次口服对小鼠产生的急性毒性反应和死亡情况。

2.0 受试物2.1 名称：枸橼酸托烷司琼原料，白色粉末。

2.2 提供单位：中国科学院上海药物研究所朱友成组2.3 批号: 99022.4 含量：99.7%2.5 配制方法：将受试药物用0.5％CMC-Na 研磨配制成混悬液，并稀释成相应浓度，使各剂量组给药体积相等。

2.6 溶剂：0.5％CMC-Na3.0 动物3.1 来源、种属、合格证：昆明种小鼠60 只，（♀30 只，♂30 只）由中国科学院上海实验动物中心提供，合格证：中科动管第005 号。

经一周适应性饲养。

饲料购自中英合资上海西普尔必凯实验动物有限公司。

自由取水，饲养温度为23 2℃。

3.2 体重：给药时体重为18 22 克。

3.3 性别：雌雄各半。

3.4 每组动物数：按体重随机分组，实验时以每10 只(♀5 只，♂ 5 只)为一组4.0 剂量4.1 剂量设置：按预初实验结果，最高剂量定为570 mg/kg。

以0.9 的比例递减，即为570、513、461.7、415.5、374、336.6 mg/kg，6 个剂量组。

4.2 每只动物接受容量：口服体积为0.2 ml/10g 体重。

5.0 给药途径小鼠禁食 6 小时一次灌胃给药。

6.0 方法动物按体重随机分 6 组，每组10 只，雌雄各半，每组的小鼠体重分布相似。

给药后即观察动物各方面反应情况，死亡动物即进行解剖，检查内脏。

记录每天动物的死亡数。

7.0 观察指标7.1 观察期：14 天7.2 毒性反应：观察检查小鼠外观、行为、进食、粪便等情况，死亡动物进行尸解。

急性毒性试验佚名试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。

选用其他动物应说明原因。

年龄一般为7-9周龄。

同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。

实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。

2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。

若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。

应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。

（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。

1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。

2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。

4．单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。

选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。

实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。

如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。

根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。

实验一药物急性半数致死量（LD50）的测定【目的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。

【原理】LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。

由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。

在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。

【实验材料】1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。

2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。

3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。

【方法和步骤】（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（D m及D n）。

方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。

2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。

计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出D m及D n和确定组数后，可按下列公式求出公比r：r再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m，其中D1=D n=最小剂量，D2=D1⨯r; D3=D2⨯r; D4=D3⨯r; D5=D4⨯r; ……D G=D G-1⨯r。

r值一般以1.7~1.15之间为宜。

计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。

先代入公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg,D2=76.8⨯1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及D G(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。

.药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定(一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。

(二)动物分组和剂量1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。

2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液.(三)试验方法1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。

2.给药途径和容积:给药途径:应与临床试验的途径相一致。

口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。

水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。

给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。

大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。

3.测定LD:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。

给受试物后立即观察50动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。

详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD值及95%可信限。

504.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。

死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。

若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。

(四)试验报告和结果评价应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。

LD 值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量的值及其相当于临床剂量的50倍数.详细报告实验过程中动物出现的中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大小。

动物急性毒性试验(Acute toxicity test,Single dose toxicity test),研究动物一次或24小时内多次给予受试物后,一定时间内所产生的毒性反应.拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1].急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段,对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义.急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值,并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息[实验目的]通过实验，培养学生科研设计能力，提高学生科研思维素质；学习药物急性毒性实验的测定方法（统计方法）及观察方法。

1、计算敌百虫半数致死量。

[实验材料]小白鼠（雌雄均可，18-22 g）、鼠笼、1ml注射器、苦味酸溶液、敌百虫等。

（计算机仿真实验）[实验方法]1. 预试验：取小鼠24只，以4只为一组分成6组，选择组间距较大的一系列剂量，各组分别灌胃给药敌百虫，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。

2. 正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量，相邻剂量之间的比例为1：0.7。

将小鼠随机分组，每组10只小白鼠灌胃给药敌百虫。

3. 观察纪录给各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。

通常药后要观察3-7天。

根据各组动物的死亡率，用改良寇氏法（Korbor）或简化机率单位法算出LD50和可信限。

[实验结果]在给药后1 小时内，随药物剂量的增加，小鼠中毒的潜伏期逐渐缩短，中毒症状随药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐加重（口吐泡沫→大小便失禁→肌肉僵直→兴奋→死亡）。

给药后3 小时内各组小鼠死亡情况见下表：组别动物数（n ）给药剂量（mg/kg）对数剂量（X）动物死亡数死亡率（P）P21 10 384 2.58 1 0.1 0.012 10 548 2.743 0.3 0.093 10 784 2.89 4 0.4 0.164 10 1120 3.056 0.6 0.365 10 1600 3.20 8 0.8 0.64i=0.15 ∑P=2.2∑P2=1.26 [结果计算]实验完毕后，清点各组死亡鼠数并计算出死亡率（P），采用改良寇氏（Korbor）法计算LD50。

毒理学实验二经口急性毒性试验1、实验目的1、掌握实验动物分组方法2、测定LD50的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物：（1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g（2）样品来源：首都医科大学实验动物部2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。

3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。

3、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。

动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。

）肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性2、实验动物称重、编号和随机分组选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。

3、受试化学物溶液的配制（1）确定灌胃量：0.1ml/10g（2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积（3）药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。

5、毒性体征的观察和LD50计算（1）毒性体征的观察：染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min（2） LD50的计算：a、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。

剂量组距 d 为：d为相邻两个剂量组剂量对数之差利用lgLD0依次加d，取反对数，即可得出各组剂量。

b、LD50的计算（见附件）：C、求半数致死量的95%可信区间4、实验过程1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A组和B组)，分别在不同实验室。

每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。

集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。

各小组活动：每小组1人（共4人），进行动物标记。

药理毒理研究资料申报资料22 动物急性毒性试验资料及文献资料1. 摘要：分别以iv和ip两种给药途径，一次给予小鼠注射用X（冻干粉针），。

试验结果表明：观察14天内小鼠死亡情况，测定注射用X（冻干粉针）的LD50为139.58g/kg(生药量，下同)，95%的可信限为小鼠静脉注射给药的LD50130.40g/kg～149.40g/kg；小鼠腹腔注射给药的LD为195.99g(生药量)/kg，其5095%的可信限为183.03g/kg～209.85g/kg。

2. 试验目的: 观察注射用X（冻干粉针）的急性毒性反应和死亡情况，测定药或最大耐受量，为临床应用的安全性提供试验依据。

物的或LD503. 试验材料3.1 受试药物名称：注射用X（冻干粉针）（简称X）；批号：20011217；规格：100mg/支（9g生药/支），内容物为棕黄色粉末；由贵州益佰制药股份有限公司提供。

配制方法：试验前用生理盐水配制成所需浓度。

3.2 受试动物健康昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由南京中医药大学实验动物中心提供。

实验动物合格证号：苏SYXK 20020053。

3.3 试验条件给药前后，实验小鼠雌雄分笼，全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温22℃—26℃，实验室相对湿度：55～70%。

4. 给药途径采用腹腔注射（ip）和与拟推荐的临床用药途径（iv）两种给药途径给药。

5. 剂量设计理由通过预实验已知LD0为5.5ml/kg,LD100为17.5ml/kg.正式实验 LD0/LD100≈3倍 k＝0.75查表可得分5组第一组17.5ml/kg第二组13.13ml/kg第三组 9.85ml/kg第四组 7.38ml/kg第五组 5.53ml/kg6. 试验方法6.1 小鼠静脉注射给药急性毒性预试验后，取健康昆明种小鼠50只，体重18～22g，雌雄各半。

随机分为5组，每组10只。

即X1：97.87g/kg；X2：115.14g/kg；X3：135.46g/kg； X4：159.38g/kg；X5：187.50g /kg。

急性经口毒性试验2.3.1.1 目的（1)检测消毒剂对实验动物的急性毒性作用和强度。

（2)为亚急（慢）性毒性等试验提供剂量选择的依据。

2.3.1.2 实验动物小鼠或大鼠任选一种，雌雄各半。

小鼠体重18g～22g，大鼠体重180g～220g，根据不同的计算LD50方法，选用适当的动物数量。

2.3.1.3 试验分组如应用概率单位-对数图解法计算LD50，随机分为5个～6个剂量组。

通常最高剂量组的动物死亡率应≥90%，最低剂量组动物死亡率应≤10%。

可先以较大的组距较少量动物进行预试，找出其粗略致死剂量范围，然后再设计正式试验的剂量分组。

2.3.1.4 操作程序（1）动物的准备：试验前，一般禁食过夜，不限制饮水。

（2）受试物的配制：常以水或食用植物油为溶剂配制成溶液，或采用0.5%羧甲基纤维素配制成混悬液。

灌胃给予受试物的最大容量，小鼠不超过0.2ml/10g体重，大鼠不超过1.0ml/100g体重。

（3）染毒方法：用灌胃方式将受试物一次给予动物。

若受试物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在24h内分成2次～3次给予，其总剂量作为一日剂量计算。

（4）染毒后观察动物的中毒表现和死亡数及死亡时间，并对死亡动物和观察期满处死动物进行尸体解剖，肉眼观察，发现有异常的组织或脏器，尚需进一步作组织病理学检查。

观察时间14d。

2.3.1.5 LD50的计算方法根据给受试物后14d内的各剂量组动物死亡率计算LD50(半数致死剂量)。

2.3.1.5.1概率单位-对数图解法：（1）根据各剂量组动物死亡率，从表2-9 中查各组的概率单位。

因死亡率为 0% 和 100%的概率单位，与所试动物数有关，故需另在表2-10中查找。

例如：对死亡率为45%的概率单位，可查表2-9。

先在表的左侧纵标目上找到 40，而后在表的上行横标目处找到5，两者交叉点处的4.87，即为45% 的概率单位。

又如:某组用 10 只实验动物，如果全部存活(死亡率为0%)，查表2-10，其概率单位为 3.04。