酵母蔗糖酶的提取方法

酵母蔗糖酶的提取实验报告

一、实验目的

本实验旨在学习酵母蔗糖酶的提取方法，并掌握其酶活力的测定方法。

二、实验原理

酵母蔗糖酶是一种重要的生物催化剂，广泛应用于食品工业、医药工业等领域。其提取方法主要包括细胞破碎法和超声波法。细胞破碎法是将酵母细胞经过离心、洗涤后，在低温下使用高压均质机或超声波仪器进行破碎，使得蛋白质与其他杂质分离。而超声波法则是将细胞悬液经过超声波处理，使得细胞壁裂开，释放出内部的蛋白质。

三、实验步骤

1. 酵母菌体培养：将活性酵母菌体接种到含有10%蔗糖和0.5%酵母粉的液体培养基中，在30℃下静置48小时。

2. 细胞破碎：将培养好的菌体通过离心后洗涤两次，然后在低温下使用高压均质机进行破碎，使得蛋白质与其他杂质分离。

3. 超声波处理：将菌体悬液经过超声波处理，使得细胞壁裂开，释放出内部的蛋白质。

4. 酶活力测定：取一定量的提取液，加入含有蔗糖的缓冲液，在37℃下反应30分钟后用硫酸铜试剂测定还原糖的含量。

四、实验结果

通过细胞破碎和超声波法两种方法提取酵母蔗糖酶，测得其酶活力分别为10.5 U/g和12.8 U/g。

五、实验分析

1. 细胞破碎法和超声波法都可以用于酵母蔗糖酶的提取，但是超声波法更加快速、高效。

2. 酵母菌体培养条件对于酵母蔗糖酶的产生有较大影响，应该注意培养基成分和温度等因素。

3. 酵母蔗糖酶的测定方法可以采用硫酸铜法，但是也可以采用其他方法，如比色法和光度法等。

六、实验结论

本实验通过细胞破碎和超声波法两种方法提取酵母蔗糖酶，并测定了其酶活力。结果表明，超声波法更加高效。同时，酵母菌体培养条件对于酵母蔗糖酶的产生有较大影响，应该注意调整培养条件。最后，硫酸铜法可以用于测定酵母蔗糖酶的活力。

第４０卷第４期　２　０　１　３年７月　酿　

ＬＩＱＵＯＲ　酒　

ＭＡＫＩＮＧ　Ｖｏ１．４０．Ｎｏ．４　Ｊｕｌｙ，２０１３　

文章编号：１００２—８１１０（２０１３）０１—００６９—０４　

从啤酒酿造酵母中提取蔗糖酶及酶的性质研究　

邹东恢　一，郭宏文１，２　

（１．齐齐哈尔大学食品学院，黑龙江齐齐哈尔１６１００６；　２．黑龙江省普通高校齐齐哈尔大学农产品加工重点实验室，黑龙江齐齐哈尔１６１００６）　

摘要：采用ＳＤＳ抽提法从啤酒酵母中提取蔗糖酶，通过正交实验对ＳＤＳ浓度、提取时间、ｐＨ、提取温度等条件　进行优化，确定了最佳提取工艺条件是：ＳＤＳ浓度Ｏ．６ｍｍｏｌ／Ｌ，温度５０￣（３，时间１０ｈ，ｐＨ５．０。制得的粗酶经醇沉后，　采用Ｑ一琼脂糖凝胶ＦＦ阴离子交换层析方法得到纯化的酵母蔗糖酶，纯化倍数为１６．８倍，并对蔗糖酶的酶性　

质进行了研究。　关键词：酵母；蔗糖酶；ＳＤＳ法提取；酶｝生质　

中图分类号：ＴＳ２６１．１１；ＴＳ２６１．９；ＴＳ２０１．２　文献标识码：Ｂ　

Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｉｎｖｅｒｔａｓｅ　Ｆｒｏｍ　

Ｙｅａｓｔ　

ＺＯＵ　Ｄｏｎｇ—ｈｕｉ１，２　ＧＵＯ　Ｈｏｎｇ—ｗｅｎ　０　

（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　ｆｏｏｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉｑｉｈａｒ　ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ　１６１００６，Ｃｈｉｎａ；　

２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　Ｑｉｑｉｈａｒ　ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ　１６１００６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｉｎｖｅｒｔａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｂｒｅｗｅｒ’Ｓ　ｙｅａｓｔ　ｕｓｉｎｇ　ＳＤＳ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｏａｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＳＤＳ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｐＨ　ｖａｌｕｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｉｔ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ，ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ：ＳＤＳ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　０．６ｍｍｏｌ／Ｌ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　５０℃，ｔｉｍｅ　ｗａｓ　ｌＯｈ，ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　５．０．Ｔｈｅ　ｃｒｕｄｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗａｓ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏｌ，ａｎｄ　ｕｓｅｄ　Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＦＦ　ａｎｉｏｎ—ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｉｏｎｉｃ　ｓｔｒｅｎｇｔｈ　ｔｏ　ｇｅｔ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｅｄ　ｙｅａｓｔ　ｉｎｖｅｒｔａｓｅ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｗａｓ　ｏｆ　１　６．８　ｔｉｍｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｔｓ　ｑｕａｌｉｔｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｙｅａｓｔ；Ｉｎｖｅｒｔａｓｅ；ＳＤＳ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｅｎｚｙｍｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　

蔗糖酶的分离提纯

【实验目的】

1．了解蔗糖酶分离提纯的方法。

2．掌握离心技术、电泳技术、层析技术、膜分离技术和分光光度法。

【实验原理】

蔗糖酶[Ec 3．2．1．26]习惯命名β--D--Fructofuranosidase系统命名：β--D—Fructofuranosideffructonydrolase。

蔗糖酶是一种水解酶，能使蔗糖水解为果糖和葡萄糖。它所催化的反应是：

H OH OH H

蔗糖

+

H OH OH H

葡萄糖 果糖

蔗糖酶的分布相当广，在微生物、植物及动物中都有它的存在。在微生物中，酵母中的含量很丰富。在研究中用的最多的是面包酵母和啤酒酵母。

我们实验室的研究表明采用菌体自溶法破碎酵母细胞，采用乙醇分级和DEAE--纤维素柱层析两步分离提纯步骤，就可制备纯度较高的蔗糖酶制剂，而且收率也较好。从酵母中制备蔗糖酶，材料来源十分方便，而且以自己提纯的酶制剂进行蔗糖酶的性质、动力学研究也十分方便。

【实验材料、仪器和试剂】

1．实验材料和试剂

(1)0．2％葡萄糖标准液；(2)3，5-二硝基水杨酸试剂；(3)新鲜啤酒酵母；

(4)甲苯；(5)乙酸钠；(6)稀乙酸溶液；(7)95％乙醇；(8)DEAE--纤维素；(9)0.5mol／L NaOH；(10)0.5mol／L HCl；(11)0.005mol／L，pH6.0的磷酸钠缓冲液；(12)含O.15mol／L NaCl的O.005mol／L，pH6.0的磷酸钠缓冲CH2OH H OH H H OH CH20H

O 蔗糖酶 液；

(13)5％蔗糖；(14)测定蛋白质浓度试剂；(15)聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂

2．仪器

(1)恒温水浴；(2)烧杯、量筒、移液管、容量瓶、玻棒；(3)冰盐浴；

(4)离心机；(5)721型分光光度计；(6)柱层析装置；(7)天平；(8)pH计；

酵母蔗糖酶的提取实验报告

酵母蔗糖酶的提取实验报告

1. 引言

酵母蔗糖酶是一种重要的酶，在许多生物过程中起着关键作用。通过提取酵母蔗糖酶，我们可以深入了解其结构和功能，以及其在实际应用中的潜力。本实验旨在通过一系列步骤，从酵母细胞中提取酵母蔗糖酶，并评估其活性和效果。

2. 方法和材料

2.1 材料

- 新鲜酵母菌浆液

- 蒸馏水

- 磷酸缓冲液

- 蔗糖溶液

- 高速冷离心机

- 低速冷离心机

- 离心管

- 离心管架

- 塑料吸管

- 双室温度计 - 分光光度计

- 试管

2.2 实验步骤

步骤1：制备酵母酶提取液

a) 将10ml新鲜酵母菌浆液倒入离心管中，并以1500rpm的速度在低温下离心10分钟。

b) 将上清液转移至另一个离心管中，再次进行高速离心，以去除细胞碎片。

步骤2：沉淀酵母蔗糖酶

a) 将上一步中得到的上清液倒入一个含有7ml蔗糖溶液的试管中。

b) 在室温下孵育搅拌2小时，让酵母蔗糖酶与蔗糖结合形成沉淀。

c) 用低速离心将沉淀分离。收集上清液备用。

步骤3：测定酵母蔗糖酶活性

a) 在分光光度计中设置波长为540nm。

b) 取1ml上清液和1ml磷酸缓冲液混合，作为空白对照。

c) 另取1ml上清液和1ml含20%蔗糖溶液的试管中，作为实验组。

d) 在不同时间点（例如0、1、2、3、4分钟）测定两个试管的吸光度，并记录数据。

e) 计算酵母蔗糖酶的活性。

3. 结果与讨论

通过以上实验步骤，我们成功地提取了酵母蔗糖酶，并可以测定其活性。根据测定结果，我们观察到酵母蔗糖酶在一定时间范围内对蔗糖的降解表现出线性增加的趋势。这表明酵母蔗糖酶在一定程度上具有稳定的催化作用。

通过本实验，我们还可以根据酵母蔗糖酶的活性表征其在不同条件下的稳定性、催化效率和适应性。我们可以改变温度和pH值，观察对酵母蔗糖酶活性的影响，从而了解其最适宜的操作条件。通过进一步的研究，我们还可以探索酵母蔗糖酶在生物制药、食品加工和能源生产等领域的应用潜力。