《分离以尿素为氮源的微生物》讲义一、实验目的了解以尿素为氮源的微生物的特点，掌握分离此类微生物的方法和原理，培养微生物实验操作的基本技能。
二、实验原理在自然界中，能够分解尿素的微生物相对较少。
尿素在脲酶的作用下分解产生氨，使培养基的 pH 升高。
基于这一特性，我们可以通过在培养基中添加酚红指示剂来指示 pH 的变化。
当培养基中产生氨时，pH 升高，酚红指示剂会由黄色变为红色，从而筛选出能够分解尿素的微生物。
三、实验材料和用具1、培养基（1）制备尿素固体培养基：葡萄糖1g，NaCl 05g，KH₂PO₄01g，Na₂HPO₄ 02g，尿素 1g，琼脂 15g，水 100mL。
将上述物质溶解后，调节 pH 至 70，加入酚红指示剂 001g，灭菌备用。
（2）制备尿素液体培养基：除了不添加琼脂外，其余成分与尿素固体培养基相同。
2、实验用具无菌培养皿、无菌移液管、无菌涂布器、酒精灯、超净工作台等。
3、样品土壤、污水等。
四、实验步骤1、土壤样品的采集在有植被覆盖的土壤中，选择距离表层 5 10cm 处的土壤，用无菌小铲采集适量土壤，装入无菌袋中。
2、制备土壤稀释液（1）称取 1g 土壤样品，放入装有 99mL 无菌水的三角瓶中，振荡摇匀，制成 10²倍稀释液。
（2）以此类推，进行梯度稀释，制成 10³、10⁴、10⁵等倍数的稀释液。
3、接种（1）平板涂布法：用无菌移液管吸取 01mL 不同稀释度的土壤稀释液，分别涂布在尿素固体培养基表面，每个稀释度做三个重复。
（2）平板划线法：用接种环蘸取少量土壤稀释液，在尿素固体培养基表面进行划线，每个稀释度做三个重复。
4、培养将接种后的培养皿倒置放入 37℃恒温培养箱中培养 2 3 天。
5、观察与筛选观察培养皿中菌落的生长情况，挑选周围出现红色环带的菌落，即为分解尿素的微生物。
五、注意事项1、实验过程中要严格遵守无菌操作原则，防止杂菌污染。
2、土壤稀释液的梯度要合适，过高或过低的稀释度都可能影响实验结果。
