急性经口毒性实验

急 性 毒 性 试 验 方 法――改良寇氏法Kärber 法由Kärber 于1931提出，后经Finney 改进，顾汉颐作过改进，1963年孙瑞元教授对该法进一步改进，改进后的计算方法称为点斜法或孙氏法，增加了不含0%和100%死亡率的校正式，所得LD 50及全部有关参数与正规概率单位法相近。

改良寇氏法（Käber）试验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0 %和100 %的剂量组。

一、剂量选择及分组1、剂量选择剂量设计是否合理是急性毒性试验能否成功的关键。

探求外源化学物的急性毒性，测定其LD 50或LC 50时，应首先广泛查阅文献资料，了解该化学物的化学结构和理化性质，如结构式、分子量、溶解度、挥发度、纯度及杂质含量等，其次确定测定LD 50的计算方法，然后设计剂量。

2、预试验：总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b ）和全部不致死的最大剂量（a ），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r ），其比值为1.2~1.5。

进行正式实验。

用于急性毒性试验时，动物的体重为：大鼠180~200g ，小鼠18~22g ，豚鼠200~250ｇ，家兔2~2.5kg ，犬10~12 kg 。

用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。

仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。

当预试中发现化学物的毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、雄两种性别的动物分别进行试验，求出各自的LD 50。

通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。

按下式设计剂量组：1n abr -= 式中：r —相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5，b —最低全致死剂量量， a —最高不致死剂量， n —设计的组数。

实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。

一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。

根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。

三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。

据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。

以次类推，找出Dmin。

2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。

在确定组数后，按下列公式计算r。

1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。

剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。

经口急性毒性试验经口急性毒性试验是一种广泛使用的实验室动物毒性试验，它通常用于评价新化合物、生物制品等物质的毒性，以及评估安全使用剂量的潜在结果。

这篇文章将介绍经口急性毒性试验的背景、方法、注意事项和限制。

背景方法经口急性毒性试验通常使用小鼠、大鼠、兔子或其他哺乳动物，动物必须年龄相似、体重相当且健康状态良好。

实验中使用不同剂量的测试物质来确定它们在动物体内的毒性。

通常，实验中使用的剂量量较低，但有时也会使用较高的剂量以便观察更加严重的毒性反应。

其实验流程如下：1.选取合适且健康的实验动物，检查其体内和体外健康状况；2.确定实验剂量，并将物质以食物、水、灌胃管等方式交予动物口服；3.观察动物的外观、行为和症状，记录观察结果；4.在一定时间后继续观察动物，在必要时应用适当的护理；5.按照实验协议的规则处理动物，以确保其安全。

注意事项在进行经口急性毒性试验时，需要注意以下几点：1.确定剂量：需要选择适当的实验剂量，以确保所测试的物质不会对动物造成过度毒性反应，且可以解释毒性的分级。

2.采取恰当的动物保护措施：对于实验过程可能造成疼痛或不适的情况，应采取适当的保护措施，例如提供充足的饮水、合适的饲料和温度环境。

3.保证实验数据质量：为了确保实验数据质量，需要在实验过程中跟踪记录、分析数据，并确定实验的有效性以及物质毒性分级的准确性。

限制虽然经口急性毒性试验是一种有效的毒性评估方法，但它有一定的局限性。

经口急性毒性试验只能评估物质对动物的急性毒性反应，而对于慢性毒性、免疫毒性或生殖毒性等长期影响，它并不能提供完整的信息。

此外，每种动物特征不同，对物质的敏感程度也会不同，因此难以将实验结果适用于不同品种的动物和不同的物质评估。

因此，除经口急性毒性试验外，还需要完善其他的毒性评估方法以更准确地评估药物、化学物质和其他物质的毒性。

急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本方法规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、技术和要求。

本方法适用于评价化学品的急性毒性作用。

2 规范性引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 401. Feb. 1987 ) OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 425. Feb. 2001 ) USEPA OPPTIS Health Effects Guideline (Series 870.1100 June 1996)3 试验目的3.1 检测化学品对实验动物的急性毒性作用和强度。

3.2 为亚急(慢)性等毒性试验提供剂量选择的依据。

3.3 试验结果可作为化学品急性毒性分级和标签标识。

４定义4.1 急性经口毒性(Acute Oral Toxicity): 一次或在24h内多次经口给予实验动物受试样品后，动物在短期内出现的健康损害效应。

4.2 经口半数致死剂量（Oral Median Lethal Dose）: 经口一次或24h内多次经口给予受试样品后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。

以单位体重接受受试样品的质量(mg/kg bw或g/kg bw)来表示。

4.3 剂量-反应关系(Dose-response Relationship)：表示化学毒物的剂量与某一群体中质效应的发生率之间的关系。

5 试验基本原则以经口灌胃法给予各试验组动物不同剂量的受试样品，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。

染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。

试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行大体解剖。

本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。

6 试验方法6.1 受试样品的处理受试样品应溶解或悬浮于适宜的赋形剂中，（不溶性固体或颗粒状物质研磨、过100目筛）建议首选水或食用植物油（如玉米油）作溶剂，也可考虑使用其它赋形剂（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）等配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其它形式(如糊状物等)，但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。

化学品丽斑麻蜥急性经口毒性试验1范围本文件规定了化学品对丽斑麻蜥急性经口毒性试验的测定方法，包括试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求。

2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

2.1半数致死剂量median lethal dose在急性经口毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时的供试物剂量，用LD50（mg/kg 体重）表示。

2.2急性毒性acute toxicity是指生物体短时间（天）暴露于某种化学物质中产生的明显不良反应。

在本试验中，丽斑麻蜥急性经口毒性用半数致死剂量(LD)来表示，即在特定时间内（7d）导致50%数量的50供试蜥蜴死亡的供试物浓度。

2.3供试物test substances试验中需要测试的物质。

2.4化学品chemicals化学品是指各种元素组成的纯净物和混合物，无论是天然的还是人造的。

3方法原理将不同浓度的供试物以一次经口灌注的方法暴露给丽斑麻蜥，以7d为一试验周期，记（mg/kg体重）录丽斑麻蜥的死亡情况，确定50%试验丽斑麻蜥死亡时的供试物剂量，用LD50表示。

4试剂和材料4.1供试生物试验应选择同一种群、体长、体重和年龄相似的丽斑麻蜥（Eremias argus）成年蜥蜴。

试验用丽斑麻蜥体重变异系数不超过平均体重的20%。

试验前至少需要驯养7d，驯养条件和照明条件与试验时的条件一致。

驯养期间死亡率小于5%，且生长状态符合物种生长规律视为健康良好，可用于后续试验。

雌性丽斑麻蜥用于试验不能在其繁殖期。

丽斑麻蜥驯养环境参数见附录A。

4.2试剂丽斑麻蜥的饮水可使用自来水。

配置不同浓度供试物溶液过程中的溶剂一般选择水（GB/T6682-2008规定的实验室一级用水）或者食用油（例如玉米油）。

试验用水的pH值应为6.5-8.5。

试验期间水质保持恒定。

对于难溶于水或者油的供试物，可使用少量对丽斑麻蜥毒性小的有机溶剂助溶,例如乙醇，二甲基亚砜等，其中有机溶剂用量一般不得超过0.1mL/L(0.1%)，用前应了解溶剂的毒理学特性。

经口毒性急性试验实验报告一、实验目的本次经口毒性急性试验的主要目的是评估测试物质通过口腔摄入后在短时间内对实验动物可能产生的毒性反应，包括但不限于观察中毒症状、确定致死剂量范围以及了解毒性作用的特点和机制，为后续的毒性评估和安全性研究提供基础数据。

二、实验材料1、测试物质本次实验所选用的测试物质为_____，其纯度为_____，物理状态为_____。

2、实验动物选用健康的_____种属动物，体重范围在_____至_____克，雌雄各半，共_____只。

实验动物均来自具有资质的供应商，并在实验前经过适应性饲养，确认健康状况良好。

3、饲料和饮水实验动物在实验期间给予标准的饲料和清洁的饮用水，自由摄取。

4、实验器材包括灌胃针、电子天平、计时器、观察笼等。

三、实验方法1、剂量设计根据预实验结果和相关文献资料，设置了_____个剂量组，分别为_____、＿____、＿____等，同时设立了阴性对照组（给予等量的生理盐水）。

2、动物分组将实验动物随机分为不同的剂量组和对照组，每组动物数量为_____只，确保分组的随机性和均衡性。

3、染毒途径采用一次性经口灌胃的方式进行染毒，灌胃体积根据动物体重进行计算，控制在_____毫升/千克体重。

4、观察指标及时间在染毒后的_____小时内，对实验动物进行密切观察，观察指标包括一般行为表现（如活动、进食、饮水、毛发状态等）、神经系统症状（如抽搐、震颤、昏迷等）、呼吸系统症状（如呼吸急促、呼吸困难等）、消化系统症状（如呕吐、腹泻等）以及死亡情况。

观察时间点分别为染毒后_____分钟、＿____小时、＿____小时等。

四、实验结果1、中毒症状在不同剂量组中，实验动物表现出了不同程度的中毒症状。

低剂量组动物可能仅出现轻微的活动减少、食欲不振等症状；中剂量组动物可能出现呕吐、腹泻、呼吸急促等症状；高剂量组动物则可能出现抽搐、昏迷甚至死亡。

2、死亡情况随着剂量的增加，实验动物的死亡率逐渐升高。

新兽药一般毒性试验技术要求一、急性毒性试验根据供试药物临床应用的给药途径不同，本试验可分为：(一)经口或注射给药的急性毒性试验1、动物选用小鼠(体重18—22g)、大鼠(180—200g)或其他敏感动物。

应注明动物品系。

ÿ组小鼠不少于10只，大鼠不少于6只，雌雄各半，雌性应δ产无孕。

2、供试药物的配制一般用水为溶剂，将药物配制成一定浓度的溶液。

若选择其他溶剂或助溶剂，一般要求LD50>15000mg／kg。

3、给药方式与最大体积经口急性试验宜用灌θ法，一次剂量直接灌入，给药前需禁食4—8小时，但不限制饮水。

一次最大灌θ量，小鼠不超过1.0ml／只，大鼠不超过4.0ml／只。

若灌θ量太大，可在24小时分成2—3次给药，但合并作为一日剂量计算。

经注射急性毒性试验多采用腹腔注射，一次最大注射量，小鼠不超过1ml，大鼠不超过3ml。

4、剂量与分组在正式试验前，首先用少量动物做预备试验，确定受试动物全部致死的最小剂量和全部不致死的最大剂量，正式试验一般分为5—7个剂量组。

组间剂量呈等比级数，其比值为1.2—1.4。

5、观察指标观察动物一般健康状况，中毒表现和死亡过程。

观察时间一般为一周。

对死亡动物应作大体剖检，必要时进行病理组织学检查。

6、LD50计算采用寇氏或机率单λ对数图解法计算供试药的LD50。

值及其95％可信限范Χ。

7、结果评定大鼠一次经口LD50在1mg/kg以下者为极毒，1—50mg／kg为剧毒，50—500mg／kg为中等毒，500—5000mg／kg为低毒，5000mg／kg以上者为实际无毒。

(二)经皮给药的急性毒性试验1、动物选用健康家兔(2.0—3.0kg)、豚鼠(350—450g)或大鼠(200—300g)。

ÿ组动物不少于6只，雌雄各半。

2、供试药物的配制供试药物如是固体，应磨成细粉状，过120目筛，并用适量水或无毒无刺激性赋形剂(橄榄油、羊ë脂、凡士林等)混匀。