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牦牛PRKAG3、FAS基因多态性与肉质相关性研究牦牛PRKAG3、FAS基因多态性与肉质相关性研究引言：牦牛是一种重要的家畜动物，以其高产肉和适应恶劣环境的特性受到广泛关注。
肉质是评价牦牛品质的重要指标之一，而PRKAG3和FAS基因多态性在肉质性状中起着重要作用。
本文旨在探究牦牛PRKAG3和FAS基因多态性与肉质相关性的研究进展，为提高牦牛肉质品质提供基因遗传学的参考。
一、PRKAG3基因多态性与肉质质量PRKAG3基因，也被称为AMPKγ3基因，编码表达在肌肉组织中的蛋白质。
研究表明，PRKAG3基因在骨骼肌纤维类型、能量代谢和生长等方面具有重要作用。
PRKAG3基因的多态性主要表现为两种常见基因型：RR和QR。
研究发现，RR基因型牛的肉质品质相对较好，具有较高的肌肉pH值、色泽、嫩度和风味等特点；而QR基因型牛的肉质相对较差，呈现较低的pH 值、色泽暗淡、质地较粗糙等特点。
因此，PRKAG3基因多态性对牛肉质质量的影响不可忽视。
二、FAS基因多态性与肉质脂肪含量FAS基因是脂肪酸合成关键酶--脂肪酰辅酶A合成酶的编码基因，在调控脂肪代谢和肉质脂肪含量中发挥重要作用。
FAS基因的多态性主要表现为两种常见基因型：AA和AB。
研究发现，AA基因型牛的肉质脂肪含量相对较高，其背膘厚度和背膘面积较大；而AB基因型牛的肉质脂肪含量较低。
因此，FAS基因多态性对牛的脂肪积累和肉质脂肪含量有着一定的调控作用。
三、PRKAG3和FAS基因多态性与牦牛肉质的关联性研究一项研究分析了PRKAG3和FAS基因的多态性与牦牛肉质的关联性。
结果显示，RR基因型牦牛具有更好的肉质质量，包括较高的肌肉pH值、明亮的色泽和柔软的质地。
相比之下，QR 基因型牦牛的肉质质量较差，表现为较低的肌肉pH值、暗淡的色泽和较粗糙的质地。
此外，AA基因型牦牛的脂肪含量较高，而AB基因型牦牛的脂肪含量较低。
结论：牦牛PRKAG3和FAS基因的多态性与肉质性状之间存在一定的相关性。
牦牛MSTN基因内含子2多态性及与生长性状的相关性梁春年;阎萍;刑成峰;裴杰;郭宪;包鹏甲;丁学智;褚敏;朱新书【期刊名称】《华中农业大学学报》【年(卷),期】2011(30)3【摘要】采用PCR-SSCP技术对大通牦牛、甘南牦牛和天祝白牦牛(共277头)肌肉抑制素基因(MSTN)内含子2的部分序列进行了多态性研究,分析该基因与牦牛生长性状的相关性。
结果表明,牦牛MSTN基因内含子2存在2个等位基因和3种基因型。
在该基因座上,甘南牦牛、天祝白牦牛呈Hardy-Weinberg平衡状态,大通牦牛呈不平衡状态。
3种基因型与牦牛部分生长性状的最小二乘法分析表明,MSTN 基因内含子2对成年牦牛胸围、体质量、胸围指数、体长指数和肉用指数均显著相关(P<0.05),而不同基因型的牦牛体高、管围、体长和管围指数差异不显著。
初步推断牦牛MSTN基因内含子2可作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。
【总页数】5页(P285-289)【关键词】牦牛;MSTN基因;多态性;遗传标记;PCR-SSCP【作者】梁春年;阎萍;刑成峰;裴杰;郭宪;包鹏甲;丁学智;褚敏;朱新书【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所【正文语种】中文【中图分类】S823.85【相关文献】1.甘肃高山细毛羊及其杂种羊GH基因第3内含子多态性与生长性状的相关性 [J], 张恩宇;罗玉柱;李少斌;王继卿;刘秀;闫伟;管生栋;徐洪福2.草科鸡 MSTN 基因多态性与其生长性状的相关性 [J], 任冰冰;王康环;蒋利;刘光伟;王海;徐亚欧3.黄颡鱼MSTN基因多态性及其与生长性状的相关性分析 [J], 朱媛媛;梁宏伟;李忠;罗相忠;李林;张志伟;邹桂伟4.吉富罗非鱼MSTN基因结构及其多态性与生长性状的相关性 [J], 唐永凯;李建林;俞菊华;陈雪峰;李红霞5.缢蛏EGFR基因内含子1内SNP位点多态性与生长性状相关性 [J], 卫侃韵;谢淑媚;王沈同;陈宇宽;牛东红;李家乐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牛羊朊蛋白基因(PRNP)多态性与抗病性的研究进展席冬梅;刘情;于虹漫;杨玉艾;毛华明;邓卫东【摘要】朊蛋白(PRNP)是近年来造成人和部分哺乳动物传染性海绵状脑病(TSE)的主要根源,该基因的多态性显著影响了人和动物对TSE的易感性或抗病性.本文分析了朊蛋白基因及其编码蛋白的结构与功能;简要介绍了绵羊基因编码区突变与致病性的关系;系统分析了牛科动物启动子区域内23bp的插入/缺失、第一内含子区域内12bp的插入/缺失及其与疯牛病(BSE)抗病性的作用机制;全面总结了全球已经报道的牛科动物12和23bp插入/缺失的等位基因与单倍体频率,评价了其发病的可能性.该研究将为牛的分子育种提供指导.%The prion protein is the pathogenesis agent for transmissible spongiform encephalopathies (TSE) of human being and some mammal.The polymorphisms of the prion protein gene (PRNP) are significantly affect the susceptibility or resistance to TSE for human being and mammal.In this paper, we analyzed the structure and function of the gene and coding protein.The relationship of mutations in coding region with pathogenicity for sheep was introduced briefly.The molecular mechanism of the insertion-deletion (Indel) in the promoter (23 bp) and the first intron (12 bp) of PRNP for bovine spongiform encephalopathy ( BSE) was analyzed systematically.We also summarized and compared the allele and haplotype frequencies of 12 bp and 23 bp Indel from known bovine PRNP for evaluating the possibility of BSE.It could assist the cattle molecular breeding project.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2011(026)003【总页数】8页(P418-425)【关键词】朊蛋白基因(PRNP);插入/缺失多态;疯牛病抗性【作者】席冬梅;刘情;于虹漫;杨玉艾;毛华明;邓卫东【作者单位】云南农业大学动物科学技术学院,云南,昆明,650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南,昆明,650201;云南农业大学农学与生物技术学院,云南,昆明,650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南,昆明,650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南,昆明,650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南,昆明,650201【正文语种】中文【中图分类】S852.659.7Prion protein(PRNP或PrP)译为朊蛋白、朊病毒、朊蛋白病毒或蛋白侵染因子(本文统一采用朊蛋白)，由朊蛋白基因 (PRNP)所编码，该基因突变或其编码蛋白(PRNP)构象发生改变而引起的疾病统称为朊蛋白病，主要包括牛海绵状脑病(BSE，即“疯牛病”)、羊瘙痒病(scrapie)、人库鲁氏病和克雅氏病等。
中国草原红牛CAPN I基因的遗传多样性分析李赵志;于永生;刘晓辉;张立春;张国梁;严昌国;金海国;曹阳;周国利;王晓阳;朴庆林【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)003【摘要】[目的]利用PCR-SSCP技术研究中国草原红牛CAPN I基因的多态性.[方法]以90头草原红牛的全血为试材,用酚/氯仿/异戊醇法提取基因组DNA,采用PCR-SSCP技术分析了钙蛋白酶 I 基因(CAPN I)在草原红牛群体中的多态性.[结果]试验所设计的18对引物用于PCR扩增均获得良好的结果.经PCR-SSCP 分析,E7-1引物扩增的群体出现了AA、BB、AB和AC 4种基因型;E14-1引物扩增的群体出现了 AA和BB 2种基因型,E14-5、E14-6和 E20-2引物扩增的群体出现了 AA、BB和AB 3种基因型.对不同基因型的测序表明,在第14内含子4 685 bp处发生了C-T的碱基突变,在第17内含子6 545 bp处发生了C-T的碱基突变,在第21内含子上8 462 bp处发生了G-A、8 561 bp处A-G、8 696 bp处A-T的碱基突变.[结论]该研究为改善牛肉质性状的分子育种提供新的分子生物学基础数据.【总页数】2页(P1171-1172)【作者】李赵志;于永生;刘晓辉;张立春;张国梁;严昌国;金海国;曹阳;周国利;王晓阳;朴庆林【作者单位】延边大学农学院,吉林龙井,133002;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;延边大学农学院,吉林龙井,133002;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;东北农业大学动物科技学院,黑龙江哈尔滨,150030;聊城大学生命科学学院,山东聊城,252059;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100;吉林省农业科学院畜牧分院,吉林公主岭,136100【正文语种】中文【中图分类】S823.8~+9【相关文献】1.草原红牛CAPN3基因多态性及与胴体性状的关联分析 [J], 刘博洋;孟纪伦;邱峥艳;芦春艳;秦立红;张国梁;赵志辉2.中国草原红牛(吉林系)导入红安格斯牛基因后发育性能研究 [J], 吴健;张国梁;于洪春;李旭;秦立红;刘基伟;王蕾;朱永超;赵玉民3.草原红牛CAPN1基因第5外显子多态性与肉质性状的相关研究 [J], 曹阳;牛春华;张国梁;金海国4.中国草原红牛肌肉生长抑制素基因3'-UTR多态性及其与屠宰性状的关联性分析[J], 郭振刚;张立春;曹阳;于永生;罗晓彤;金海国5.CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异 [J], 刘博洋;秦立红;廉传江;田静;张金玉;姜昊;赵志辉;杨润军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《蒙古羊和乌珠穆沁羊BMP15基因多态性及其与产羔数的关联性分析》篇一蒙古羊与乌珠穆沁羊BMP15基因多态性及其与产羔数的关联性分析摘要：本文旨在研究蒙古羊和乌珠穆沁羊BMP15基因的多态性及其与产羔数之间的关联性。
通过PCR-RFLP技术对两个品种的BMP15基因进行基因分型，并分析其遗传多样性及与生产性能的相关性。
结果表明，BMP15基因多态性与产羔数之间存在显著关联，为优化畜牧育种提供理论依据。
一、引言蒙古羊和乌珠穆沁羊作为我国重要的畜禽资源，其生产性能的优劣直接关系到畜牧业的经济效益。
BMP15基因作为影响生殖性能的关键基因之一，其多态性对产羔数具有重要影响。
因此，研究蒙古羊和乌珠穆沁羊BMP15基因的多态性及其与产羔数的关联性，对于提高畜牧业的育种水平和生产效益具有重要意义。
二、材料与方法1. 实验材料选取健康的蒙古羊和乌珠穆沁羊作为实验对象，采集其血液样本进行基因组DNA的提取。
2. 实验方法采用PCR-RFLP技术对BMP15基因进行基因分型，分析其多态性。
同时，收集两个品种的产羔数数据，进行统计分析。
三、结果与分析1. BMP15基因多态性分析通过对蒙古羊和乌珠穆沁羊的BMP15基因进行PCR-RFLP 分析，我们发现该基因存在多种基因型。
其中，某些基因型在两个品种中的分布频率存在显著差异，表明其遗传多样性。
2. BMP15基因多态性与产羔数的关联性分析统计两个品种的产羔数数据，发现BMP15基因多态性与产羔数之间存在显著关联。
具体表现为，某些基因型的羊只产羔数明显高于其他基因型。
进一步分析表明，这种关联性在蒙古羊和乌珠穆沁羊中均存在，但具体表现略有差异。
四、讨论本研究结果表明，蒙古羊和乌珠穆沁羊BMP15基因的多态性与其产羔数之间存在显著关联。
这一发现为优化畜牧育种提供了理论依据，有助于提高畜牧业的育种水平和生产效益。
然而，本研究仅从基因层面进行了分析，未来还需结合表型数据、环境因素等，进行更全面的研究。
牦牛MSTN基因内含子Ⅱ遗传多样性研究梁春年;阎萍;刑成峰;王丁克;裴杰;郭宪;曾玉峰;包鹏甲;褚敏【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2009(024)005【摘要】利用PCR-SSCP技术研究了5个牦牛群体共计401头个体的MSTN基因第2内含子的多态性.结果表明:牦牛MSTN基因第2内含子存在多态性,测序发现该片段第192 bp处有一个A 到G的单碱基突变.所检测的5个牦牛群体中,除新疆巴州牦牛群体未检测到AA基因型,其他4个群体中均发现AA、AB和BB 3种基因型,大通牦牛、甘南牦牛、青海高原牦牛群体中均以BB型为优势基因型,而天祝白牦牛和新疆巴州牦牛则以AB为优势基因型.不同牦牛群体中均检测到A,B两个等位基因,并且B基因频率均高于A基因频率,B等位基因为各牦牛群体中的优势等位基因.各群体经过χ~2检验,在该基因座上,甘南牦牛、天祝白牦牛、青海高原牦牛3个群体处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05),大通牦牛、新疆巴州牦牛两个群体处于不平衡状态(P＜0.05).分析了5个牦牛群体的遗传结构,发现大通牦牛的基因杂合度、有效等位基因数、多态信息含量等均最低,分别为:0.171,1.207,0.157;而天祝白牦牛的基因杂合度,有效等位基因数、多态信息含量等均最高,分别为:0.490,1.961,0.370;新疆巴州牦牛的基因杂合度、有效等位基因数、多态信息含量等均略低于天祝白牦牛.【总页数】4页(P16-19)【作者】梁春年;阎萍;刑成峰;王丁克;裴杰;郭宪;曾玉峰;包鹏甲;褚敏【作者单位】中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050;中国农业科学院,兰州畜牧与兽药研究所,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】S823.031【相关文献】1.贵州小香羊MSTN基因内含子2和外显子3的多态性 [J], 朱红刚;刘若余;田兴贵;杨正梅;王家鹏;杨云;吴飞;罗终菊;唐静;主性2.MSTN基因内含子2多态性与山羊体重性状相关研究 [J], 刘铮铸;李祥龙;巩元芳;靳晓敏;冯敏山3.野牦牛、家牦牛及其杂交种的生物学特性和遗传多样性研究 [J], 胡江;张容昶;陆仲璘4.绵羊MSTN基因内含子2和外显子3部分序列的SNP检测和单倍型分析 [J], 刘铮铸;李祥龙;巩元芳;靳晓敏;冯敏山;武成5.牦牛MSTN基因内含子2多态性及与生长性状的相关性 [J], 梁春年;阎萍;刑成峰;裴杰;郭宪;包鹏甲;丁学智;褚敏;朱新书因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
奶牛催乳素基因多态性及其与产奶性状的关联解析本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！催乳素( prolactin，PRL) 是一种主要由垂体前叶分泌的单链多肽类激素。
与促肾上腺皮质激素、生长激素同为应激反应中腺垂体分泌的三大激素。
牛PRL 基因位于23 号染色体上，由5 个外显子和4 个内含子组成。
PRL 通过与靶细胞表面的催乳素受体( prolactin receptor，PRLR ) 结合，从而启动JAK2 /STAT5 信号传导通路，进而激活STAT5 因子，使其作用于乳蛋白基因启动子区的靶序列，启动或增强以乳蛋白基因启动子为作用元件的靶基因的表达。
Lewin 等于1992 年在PRL 基因外显子3 上发现了突变，随着检测方法的成熟与发展，国内外学者关于PRL 基因的研究日渐丰富。
曹新等于2002 年首次克隆得到牛PRL 基因的全长序列，袁峰等在水牛群体中研究PRL 基因外显子2 的多态性，李吉涛等对PRL 基因非编码序列与奶牛产奶性状相关研究，贾祥捷等在牛PRL 基因5’侧翼序列中发现2个多态位点，郑新宝等在新疆地区中国荷斯坦中验证了PRL 基因外显子3 多态性对泌乳性状有影响。
国外学者中Khaizaran 等、Alfonso 等分别在不同地域和品种的泌乳牛群体中证实PRL 基因多态性对泌乳性状的影响。
学者们对于荷斯坦等泌乳牛PRL 的研究多集中于其外显子3 和外显子4 上，而对于非编码序列的研究则较为少见，本研究以中国北方寒区澳系荷斯坦奶牛群体PRL 基因5’侧翼区调控序列为研究对象，通过PCR - RFLP 结合测序技术寻找该序列上的突变位点，结合基因型检测结果，分析不同基因型个体在泌乳性状间的差异，从而判断该群体中PRL 基因5’侧翼调控序列多态性与奶牛泌乳性状之间是否存在关联性，为该群体今后的选育工作提供参考，也为进一步开展奶牛PRL 基因非编码序列上潜在遗传标记的研究提供基础数据。
五个不同地区牦牛部分生产性能候选基因多态性的研究本研究利用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术,对新疆巴州牦牛、天祝白牦牛、甘南牦牛、青海环湖牦牛四个不同类群及培育品种大通牦牛PRL、PRLR、GH、GHR、IGF-Ⅰ五个候选基因遗传多态性进行了测定,分析了等位基因频率、基因型频率、多态信息含量、杂合度和有效等位基因数等指标,并运用最小二乘法分析了所发现的基因多态位点与牦牛体尺、体重等生长发育性状的关系,初步探讨了PRL、PRLR、GH、GHR、IGF-Ⅰ基因作为影响生长发育性状候选基因的可能性,取得了如下研究结果:1.利用PCR-SSCP技术对类胰岛素生长因子-Ⅰ基因(IGF-Ⅰ)多态性研究表明:(1)首次在牦牛IGF-Ⅰ基因的第1内含子发现PCR-SSCP多态,IGF-Ⅰ基因第1内含子的PCR-SSCP多态性检测结果表明,该多态位点由一对等位基因A、B控制,序列比对发现在67bp处单碱基C的缺失,造成了该多态位点的出现。
等位基因A(B)在大通牦牛、天祝白牦牛、甘南牦牛、青海环湖牦牛、新疆巴州牦牛群体中的基因频率分别为:0.9028(0.0972)、0.9234(0.0766)、0.8485(0.1515)、0.7929(0.2071)、0.9200(0.0800),等位基因A为五个群体中的优势等位基因。
(2)IGF-Ⅰ基因第5外显子的PCR-SSCP分析结果表明,品种间基因型分布存在显著差异。
在大通牦牛中检测到了从、BB和AB三种基因型,而在其它群体中只发现AA型,呈单态型,达到了纯合状态。
经克隆测序表明:该位点的多态是由于在202bp处一个T→C的突变,导致等位基因A突变成等位基因B。
(3)对IGF-Ⅰ基因上2个多态位点不同基因型与大通牦牛6月龄生长发育性状指标进行显著性检验,结果表明,IGF-Ⅰ基因第1内含子AA基因型的体重、体斜长显著高于AB、BB基因型(P＜0.05)。
(4)IGF-Ⅰ基因的二个多态位点基因型与大通牦牛早期发育的分析表明,18月龄IGF-Ⅰ第5外显子位点AA基因型的个体体高最小二乘均值(91.43cm),与BB 型(80.00cm)差异显著(P＜0.05)。
分类号 Q93 U D C 577 学校代码 10129 学号2009210047内蒙古主要牛品种PRNP基因调控区的多态性分析Polymorphism analysis of the regulatory region of PRNP gene in the main cattle breeds in Inner Mongolia申请人：朱香园学科门类：理学学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：蛋白质化学指导教师：刘惠荣教授论文提交日期：二○一二年六月摘要牛海绵状脑病（BSE），俗称疯牛病，是一种典型的获得性朊病毒病。
近年研究证明，牛朊蛋白基因（PRNP）启动子区的23-bp插入/缺失、12-bp插入/缺失多态性位点与牛海绵状脑病易感性密切相关，23-bp缺失、12-bp缺失基因型的牛要比23-bp插入、12-bp插入基因型的牛明显具有较高的疯牛病易感性。
内蒙古是我国最大的畜牧业生产基地，因此，本项目旨在从遗传水平上研究分析PRNP基因23-bp 插入/缺失、12-bp插入/缺失多态性位点在内蒙古主要牛品种中的分布频率，该研究的完成将为我区今后的疯牛病预防和抗疯牛病品种的选育提供重要理论依据。
本课题主要通过PCR扩增、电泳分析、DNA测序等方法，对内蒙古地区的海福特牛、西门塔尔牛、黑安格斯牛和蒙古牛四个主要牛品种的两个插入/缺失多态性位点进行了研究。
结果显示，蒙古牛两个多态性位点的缺失基因型和等位基因型的频率比其它三种牛的都低，而插入基因型和等位基因型的频率却都比其他三种牛高。
蒙古牛的的主要单倍型为23-bp 插入/ 12-bp 插入，而23-bp 缺失/12-bp 缺失却是海福特牛、西门塔尔牛、黑安格斯牛中的主要单倍型。
说明，由于蒙古牛两个多态性位点的缺失基因型和等位基因型频率都比其他三个牛品种低，因此，蒙古牛可能比其他三个牛品种具有更高的疯牛病抗性，该品种将可能对本地区未来的抗疯牛病品种选育非常重要。
关键词：牛海绵状脑病；PRNP基因；插入/缺失多态性Polymorphism analysis of the regulatory region of PRNP gene in the main cattle breeds in Inner Mongolia & Establishment of protoplast transformation system and sexual reproduction detectionsystem of PhytophthoraAbstractBovime spongiform encephalopathy (BSE)，commonly known as mad cow diseases, is an acquired prion disease. Recent studies show that two insertion/deletion (indel) polymorphisms of Bovine prion protein gene (PRNP) promoter region, a 23-bp indel and a 12-bp indel, are associated with the susceptibility to bovine spongiform encephalopathy (BSE) in cattle. The cattle with the 23-bp and 12-bp deletion genotypes and alleles have significantly higher susceptibility to BSE than the ones with the 23-bp and 12-bp insertion genotypes and alleles. Inner Mongoia is one of the largest livestock production bases in China, therefore, the project aims to study the frequency distribution of 23-bp and 12-bp indel polymorphisms of prion protein gene in the main cattle breeds in Inner Mongoia on the genetic level. Completion of this work will provide an important theoretical basis for the prevention of BSE and selective breeding against BSE in this area.In this study, the two insertion/deletion polymorphisms of PRNP gene in the main four cattle breeds from Inner Mongolian, Hereford, Simmental, Black Angus and Mongolian cattle, were studied by PCR amplification, electrophoretic analysis, and DNA sequencing. The results showed that the frequencies of deletion genotypes and alleles of 23- and 12-bp indels were lower, wherease the frequencies of insertion genotypes and alleles of the two indels were higher in Mongolia cattle than in the other three cattle breeds. In Mongolian cattle, the 23-bp insertion / 12-bp insertion was the major haplotype, whereas in Hereford, Simmental, and Black Angus cattle, the 23-bp deletion / 12-bp deletion was the major haplotype. These results demonstrated that Mongolian cattle could be more resistant to BSE, compared with the other three cattle breeds, because of its relatively low frequencies of deletion genotypes and alleles of 23- and 12-bp indel polymorphisms. Thus, this race could be important for selective breeding to improve resistance against BSE in this area.Key words: Bovime spongiform encephalopathy y; prion protein gene; insertion /deletion polymorphism; susceptibilityDirected by: Prof. LIU HuirongApplicant for Master degree: ZHU Xiangyuan （Biochemistry and Molecular Biology）(College of Life Sciences, Inner Mongolia Agriculture University, Huhhot 010018, China)目录1 前言 (1)1.1 疯牛病概述 (1)1.2 朊蛋白及朊病毒 (2)1.3 PRNP基因 (4)1.4 PRNP基因多态性与疯牛病易感性 (4)1.5 国内外研究进展 (5)1.6 内蒙古牛业 (6)1.7 研究的目的和意义 (7)2 材料与方法 (7)2.1 试验材料 (7)2.1.1 血样 (7)2.1.2 主要仪器 (7)2.1.3 主要试剂盒与试剂 (8)2.1.4 培养基配方 (8)2.1.5 主要溶液 (8)2.1.5.1 DNA提取试剂 (8)2.1.5.2 电泳缓冲液 (9)2.1.5.3 其他试剂 (9)2.1.6 引物 (10)2.1.7 软件 (10)2.2 实验方法 (10)2.2.1 血样采集 (10)2.2.2 血样基因组DNA提取 (10)2.2.3 DNA浓度和纯度的测定 (11)2.2.4 DNA的琼脂糖凝胶电泳检测 (11)2.2.5 PCR扩增 (13)2.2.5.1 PCR反应体系 (13)2.2.5.2 PCR扩增条件 (13)2.2.6 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (13)2.2.7 银染 (14)2.2.8 PCR产物的回收纯化 (15)2.2.9 连接pMD19-T载体 (15)2.2.10 制备DH5α感受态细胞 (15)2.2.11 载体的转化 (16)2.2.12 菌落的PCR鉴定 (16)2.2.13 DNA测序 (17)2.2.14 数据分析 (17)3 结果与分析 (17)3.1 血样基因组DNA的提取 (17)3.2 包含23bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增 (19)3.3 包含12bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增 (20)3.4 PCR扩增片段的序列鉴定 (21)3.5 基因型频率 (24)3.6 等位基因型频率 (25)3.7 单倍型频率 (26)3.8 二倍型频率 (27)4 结论与讨论 (28)4.1 结论 (28)4.2 讨论 (28)4.2.1 疯牛病易感性的分析 (28)4.2.2 PCR扩增片段的电泳条带多态性分析 (31)致谢 (32)参考文献 (33)作者简介 (37)插图和附表清单1. 图1 正常态和致病态PrP分子模拟图 (3)2. 图2 蒙古牛基因组DNA检测 (17)3. 图3 海福特牛基因组DNA检测 (18)4. 图4 黑安格斯牛基因组DNA检测 (18)5. 图5 西门塔尔牛基因组DNA检测 (18)6. 图6 蒙古牛包含23bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 (19)7. 图7 海福特牛包含23bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 (19)8. 图8 黑安格斯牛包含23bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 (19)9．图9 西门塔尔牛包含23bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 (20)10. 图10 蒙古牛包含12bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 (20)11. 图11 海福特牛包含12bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 (20)12. 图12 黑安格斯牛包含12bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 .. 2113. 图13 西门塔尔牛包含12 bp插入/缺失多态性位点片段的PCR扩增产物电泳图 . 2114. 图14 23 bp插入/缺失纯合型菌落PCR电泳图 (22)15. 图15 12 bp插入/缺失纯合型菌落PCR电泳图 (22)16. 图16 23 bp插入/缺失位点基因序列与源序列比对 (23)17. 图17 12bp插入/缺失位点基因序列与源序列比对 (23)1. 表1 PrP c和PrP Sc不同的分子生物学特性 (3)2. 表2 对引物序列 (10)3. 表3 琼脂糖凝胶浓度与DNA片段的分离范围 (12)4. 表4 PCR扩增体系组分 (13)5. 表5 10%聚丙烯酰胺凝胶的配方 (14)6. 表6 四种牛PRNP基因的23bp插入/缺失基因型频率 (24)7. 表7 四种牛PRNP基因的12bp插入/缺失基因型频率 (25)8. 表8 四种牛的的PRNP基因的23bp,12bp插入/缺失等位基因型频率 (26)9. 表9 四种牛的的PRNP基因的23bp,12bp插入/缺失等位基因型频率 (26)10. 表10 四种牛的PRNP基因的23bp,12bp插入/缺失单倍型频率 (27)11. 表11 四种牛的PRNP基因的23bp,12bp插入/缺失二倍型频率 (28)12. 表12 本研究中的四种牛的PRNP基因的23bp和12bp缺失等位基因型频率与之前报道的牛的比较 (29)缩略语表AMP（Ampicillin）青霉素bp(Base pair) 碱基对dNTP(deoxy-ribonucleoside triphosphate) 三磷酸脱氧核糖核苷PCR(Polymerase chain reaction) 聚合酶链式反应BSE（Bovine Spongiform Encephalopathy）疯牛病TSEs（Transmissible spongiform encephalopathies）传播性海绵状脑病PrP c（Prion protein）朊蛋白PRNP（Prion Protein Gene）朊蛋白基因SNPs 单核苷酸多态性位点＋/－插入/缺失MG 蒙古牛HF 海福特牛HA 黑安格斯牛XM 西门塔尔牛min 分钟h 小时内蒙古农业大学硕士学位论文1 1 前言1.1 疯牛病概述疯牛病（Bovine Spongiform Encephalopathy,BSE）是一种传播性海绵状脑病（Transmissible spongiform encephalopathies,TSEs），又称朊蛋白病或朊病毒病。
