实验二 试管苗增殖与生根培养

课题：第二节植物细胞工程（第一课时）一、学习目标1、说出细胞全能性的含义及其在植物组织培养中的应用（B）2、尝试进行植物组织培养，体验植物组织培养技术（B）3、简述植物体细胞杂交技术（B）4、例举植物细胞工程的实际应用（B）二、学习重点难点1、植物组织培养的原理和过程2、植物体细胞杂交的原则三、使用说明及方法指导1.完成教学案填空内容，习题。

2.可以合作探究与同学讨论。

四、自主复习内容：1．什么是细胞工程？它和基因工程有什么区别？2．什么是植物细胞的全能性？植物细胞具有全能性的原因是什么？思考与讨论：1.什么是细胞的分化？细胞分化的过程中，会发生遗传物质的改变2．在正常条件下，细胞的全能性都会表现出来吗？3．分析图2—5，概述植物组织培养技术的基本过程。

4．什么是脱分化？什么是再分化？什么是愈伤组织？愈伤组织的特点？5．什么是植物体细胞杂交技术？它具有什么优点？6．在进行植物体细胞杂交之前，为什么要去除细胞壁？通常用什么方法去除细胞壁？去除细胞壁以后的植物细胞叫什么？【分析】（1）由于植物细胞壁阻碍了植物细胞的融合，所以在进行植物体细胞杂交之前，必须要先去除细胞壁。

（2）去除细胞壁一般是采用酶解法，即用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞以得到具有活力的原生质体。

这里是利用了酶的专一性原理7．怎样诱导两个不同原生质体的融合？原生质体融合完成的标志是什么？这与细胞中哪种细胞器有关8．分析图2—9，概述植物体细胞杂交的基本过程。

（1）说出①～⑤步骤表示的含义。

（2）将植物细胞A和植物细胞B的得到的原生质体诱导融合，在培养基上至少存在几种类型的细胞（只考虑两个细胞的融合）？五、教学流程（一）、知识回顾，导入新课一、植物组织培养（必修1内容）1、植物细胞的全能性（1）生物细胞的全能性生物体细胞一般都是受精卵经有丝分裂形成，因而都含有生物一整套遗传物质，都具有发育成完整个体的潜能。

但在生物体上有时不能表现出其全能性，只能通过分化形成不同的组织、器官，这是在特定的环境、激素等的影响下基因选择性表达的结果。

盐母液：80ml；钙盐母液160ml;有机物母液80ml。

1mg/L 6-BA取8ml，0.1mg/L NAA取16ml。

混匀。

c.待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（240g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即8L。

注意：a)、调节培养基的酸碱性至pH5.8b)、培养基的分装，配制好的培养基要趁热分装，培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧。

本次实验中4L分装到150个左右三角瓶，每人3瓶。

2. 培养基的灭菌培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。

消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。

同时将接种工具进行灭菌。

3．试管苗转接（1）准备：提前将经过灭菌的培养基、接种工具、吸水纸、器皿及待转接材料放入超净工作台内，打开紫外灯消毒20min。

（2）转接：对菊花、香石竹、马铃薯、月季等节间明显的多茎段嫩枝材料，采取切茎段的方式，茎段长1cm左右，带1-2个茎节，可将茎段垂直插入培养基中，或水平放入培养基表面，一刺激侧芽的萌动；对生姜，草莓等茎间不明显的芽从，采取分离芽从的方式扩繁。

c.待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（240g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即8L。

2. 培养基的灭菌培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。

消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。

同时将接种工具进行灭菌。

3．试管苗转接（1）准备：提前将经过灭菌的培养基、接种工具、吸水纸、器皿及待转接材料放入超净工作台内，打开紫外灯消毒20min。

生物技术大实验第一部分植物组织培养实验一、母液的配制和保存（3学时）一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。

二、原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。

使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩10倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩100倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩100倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩100倍）等。

三、实验仪器设备和试剂冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(100ml，500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2•EDTA•2H2O，KI, FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水四、实验方法1、MS大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约350ml，放入500ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

2、MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4•4H2O，ZnSO4•7H2O ，H2BO3，KI ，NaMoO4•2H2O，CuSO4•5H2O，CoCl2•6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

楚雄师范学院化学与生命科学系生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：031106014课程中文名称：植物组织培养技术课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology课程性质：专业选修课使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业开课学期：第7学期总学时：36+27总学分：3预修课程：植物学、植物生理学课程简介植物组织培养技术是将植物的离体材料器官、组织、细胞、原生质体等）无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。

本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。

通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。

教材建议《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。

参考书《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。

《植物组织培养（第三版）》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。

《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。

《高等植物组织离体培养的形态建成及调控》，黄学林编著，北京：科学技术出版社，1995 年，标准书号：7-03-004377-4。

《植物组织培养》，王水琦编著，北京：中国轻工业出版社，2007年，标准书号：978-7-5019-5818-4。

《植物组织与细胞培养》，陈耀锋编著，北京：中国农业出版社，2007年，标准书号: 978-7-109-11844-7。

添加IBA和6-BA对山桃试管苗增殖及生根的影响作者：张雪冰张帆吴鑫泉王鸿王立来源：《甘肃农业科技》2020年第06期摘要：研究了IBA和6-BA组合对山桃试管苗增殖及生根的影响。

结果表明，在改良QL 培养基中添加IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.6 mg/L最适宜山桃试管苗的增殖生长，增殖倍数可达到3.56倍。

IBA浓度为1.0 mg/L时，生根率达95.83 %。

关键词：山桃;组织培养;增殖;生根中图分类号：S662.1 文献标志码：A 文章编号：1001-1463（2020）06-0019-03doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2020.06.006Screening Test of Pepper Cultivars Cultivated on Substrate in Gobi Solar GreenhouseMA Yanxia， WANG Xiaowei， ZHANG Yuxin， KUAI Jialin， KANG Enxiang， ZHANG Junfeng（Institute of Vegetable， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou Gansu 730070， China）Abstract：In order to introduce the cultivar of pepper suitable for the substrate cultivation in the solar greenhouse of Hexi gobi， the experiment on the cultivation of the cultivar of pepper on the substrate of greenhouse was carried out in the gobi desert， Baba village， Heli town， Gaotai county. The results showed that the comprehensive performance of Longjiao 11 was better than other cultivars， with good growth potential. The fruit long was 26.6 cm， shoulder width 32.3 mm， flesh thickness 2.5 mm， weight of single pepper 54.6 g， and the yield per plant was 1.4 kg， equivalentyield reached 71 401.5 kg/hm2. The comprehensive analysis shows that Longjiao 11 is suitable for promoting cultivation in the substrate culture in solar greenhouse of Hexi gobi.Key words：Gobi greenhouse;Substrate culture;Pepper;Cultivar screening桃是我國主要栽培的果树之一，面积和产量均居世界首位。

植物组织培养试卷一、名词解释：（每小题3分，共15分）1．初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。

2．脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。

一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。

3．液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。

4．细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。

5．再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。

二、填空（每空1分，共40分）1．植物组织培养过程中，最常用的培养基是，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用和调节pH，大多数植物的pH要求调节在范围内。

2．可以通过、、、、等措施预防褐变的发生。

3．植物组织培养时，外植体可以是、、、。

4．应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为→ → → → 。

5．组织培养植株的再生途径有两条：一是发生，另一是发生。

6．在配制培养基时，可以在培养基中添加，利用其吸附能力，可以降低褐变的发生，但它对物质的吸附。

7．培养基的灭菌要求压力为、温度为、维持时间为。

8．组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为 > > > 。

9. 茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段，即、、、、。

10．茎尖分生组织培养的目的主要是，其茎尖一般取毫米。

为了使脱毒效果更好，可以将茎尖分生组织培养与结合起来。

脱毒处理的试管苗，在用于生产之前，必须进行。

11．污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、。

三、判断正误，并改错。

（每小题2分，共20分）1．一般将微量元素母液均配制成10倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。

植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。

其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。

LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。

2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。

①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。

②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。

③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。

3 、中等无机盐含量的培养基①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。

适于花药培养。

②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比H 培养基高10 倍。

也适合于花药培养。

③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。

适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。

4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。

有以下几种:①改良怀特培养基(White 1963 )②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966)③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。

④贝尔什劳特液(Berthelot 1934)⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。

智慧树知到《植物组织培养》章节测试答案绪论1、由一个成熟细胞转变为分生组织状态或胚性细胞状态的过程称为（）。

A:分化B:脱分化C:再分化D:转化答案:脱分化2、由离体器官直接产生小植株的发生途径属于（）。

A:直接器官发生型B:间接器官发生型C:胚胎发生型D:无菌短枝扦插答案:直接器官发生型3、大部分兰花的发生途径是（）。

A:直接器官发生型B:间接器官发生型C:胚胎发生型D:原球茎发生型答案:原球茎发生型4、木本植物常采用（）发生途径。

A:直接器官发生型B:间接器官发生型C:胚胎发生型D:无菌短枝扦插答案:无菌短枝扦插5、植物组织培养的特点有（）。

A:取材少，培养物经济B:培养条件XXX为掌握C:生长周期短，繁殖率高D:管理方便，有益于主动化掌握谜底:取材少，培养物经济,培养条件可儿为掌握,发展周期短，繁殖率高,管理方便，有益于主动化掌握6、下列具有细胞全能性的细胞是（）。

A:成熟的老细胞B:幼嫩的组织细胞C:愈伤组织细胞D:番茄的受精合子答案:成熟的老细胞,幼嫩的组织细胞,愈伤组织细胞,番茄的受精合子7、下列哪些属于愈伤组织的特点（）。

A:无组织结构B:高度液泡化C:细胞大而不规则D:没有次生细胞壁和胞间连丝谜底:无组织结构,高度液泡化,细胞大而不规则,没有次生细胞壁和胞间连丝8、按所用培养基类型可以划分为（）。

A:固体培养B:液体培养C:种子培养D:细胞培养答案:固体培养,液体培养9、按培养过程可以分别为（）。

A:固体培养B:液体培养C:初代培养D:继代培养答案:初代培养,继代培养10、胚胎培养的目的是克服败育和三倍体育种。

A:对B:错谜底:对11、将培养物转移到配方相同的新鲜培养基上进行培养称为初代培养。

A:对B:错答案:错12、所有的离体材料都可以称作为外植体。

A:对B:错答案:错第一章1、接种室里配备主要仪器设备有（）。

A:蒸馏水器B:XXX事情台C:药品柜D:培养基灌装机答案:超净工作台2、调整培养基pH所用到的仪器是（）。