rt-qPCR实验操作课件
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逆转录pcrrt-pcr)和及时为反转录rcr ( reverse transcription pcrpcr ( real time pcr)共同的缩写。
逆转录pcr ,或许称反转录pcr(reversetranscription-pcr, rt-pcr) ,是聚合酶链式反响 (pcr) 中,一条 rna 链被逆转录成为互补 dna ,再以此为模板经过的一种宽泛应用的变形。
在pcr 进行dna 扩增。
rt-pcr由一条rna 单链转录为互补dna(cdna) 称作“逆转录” ,由依靠rna 的dna 聚合酶(逆转录酶)来达成。
随后,dna 的另一条链经过脱氧核苷酸引物和依靠rna 的dna 聚合酶达成,随每个循环倍增,即往常的pcr 。
原来的rt-pcr的指数扩增是一种很敏捷的技术,于遗传病的诊疗,并且能够用于定量监测某种rna 模板被rna 酶 h 降解,留下互补dna 。
能够检测很低拷贝数的rna 。
rt-pcr宽泛应用rna的含量。
(检测基因表达的方法,拜见northern blot 法。
)rt-pcr 作“ 定量有时也会指代及时pcr ” (quantitative pcr)pcr(real-time pcr)。
为了与逆转录或许rtq-pcr(real-time quantitative pcr)pcr 相差别,往常被写。
及时pcr及时为基础进行pcr(real-time pcr)dna 的定量剖析。
,属于定量pcrreal time pcr( q-pcr)的一种,以一准时间内dna 的增幅量的定量使用萤光色素,当前有二种方法。
一种是在ds dna 中插入特异的萤光色素;另一种使用一种能与增幅dna 序列中特定寡核酸序列相联合的一种萤光探针(probe )。
real time pcr 与reverse transcription pcr 相联合,能用微量的rna 来找出特准时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。