吉林大学《医学微生物学》期末考试备考资料(二)
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吉大《医学微生物学》（二）
细菌鉴定中常见的生理生化反应实验
一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1、糖（醇）类发酵试验
不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，黄色—紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2、甲基红试验（试验）
甲基红试验，红色～黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3、Voges-Proskauer试验（伏-普试验，. 试验）
伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为.反应阳性。
4、靛基质试验
某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5、硫化氢试验
某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
6、明胶液化实验
明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。
有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4度仍能保持液化状态。
7、柠檬酸盐利用试验
有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。
此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂(黄)～(蓝)，由绿色变为深蓝色。
8、淀粉水解实验
细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
三、实验仪器、材料和用具
实验仪器：32度恒温培养箱、4度冰箱；
微生物材料：大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌、待鉴定的未知菌的平板单菌落；
试剂：甲基红试剂、.试剂、吲哚试剂，KOH溶液；
实验用具：
试管：每个试验3根试验管，1根对照管，8个试验，共32管；
杜氏小管、接种环、接种针、酒精灯、火柴、试管架、记号笔。
四、实验步骤。
1、配制培养基（上次实验完成）
2、鉴别实验
1）、糖(醇)类发酵试验
编号：在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。
接种：取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
同样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
将已接种好的培养基置32℃温箱中培养24h。
2）、甲基红试验.试验)
将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，32℃培养 24h，加甲基红指。
