本发明是关于多粘菌素B的方法从发酵液中回收纯物质回收的目的

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.01.29C N 103540633A (21)申请号 201310506594.9(22)申请日 2013.10.24C12P 21/04(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(71)申请人河北圣雪大成制药有限责任公司地址051430 河北省石家庄市栾城县圣雪路50号(72)发明人郭耀光 郑万静 闫彩洁(74)专利代理机构石家庄汇科专利商标事务所13115代理人刘闻铎(54)发明名称一种发酵法生产多粘菌素B 的方法(57)摘要一种发酵法生产多粘菌素B 的方法，包括将多粘菌素B 产生菌接种于培养基中进行培养的步骤，所述培养基中包括有机碳源，无机氮源，有机氮源，磷酸氢二钾以及硫酸铵，关键是：所述培养基使用的有机碳源的浓度控制在7%-11%。

本发明的有益效果是，由于多粘菌素B 发酵培养基中有机碳源淀粉替换为糊精，有利于菌体利用，使得多粘菌素B 发酵单位大幅度提高。

本发明方法发酵合成多粘菌素B 的最高发酵单位可达到7000U/mL 。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号CN 103540633 A1/1页1.一种发酵法生产多粘菌素B 的方法，包括将多粘菌素B 产生菌接种于培养基中进行培养的步骤，所述培养基中包括有机碳源，无机氮源，有机氮源，磷酸氢二钾以及硫酸铵，其特征在于：所述培养基使用的有机碳源的浓度控制在7%-11%。

2.根据权利要求1所述的一种发酵法生产多粘菌素B 的方法，其特征在于：所述的有机碳源浓度控制在8%-10%。

3.根据权利要求1所述的一种发酵法生产多粘菌素B 的方法，其特征在于：所述的有机碳源浓度控制在8.5%-9.5%。

4.根据权利要求1所述的一种发酵法生产多粘菌素B 的方法，其特征在于：所述的有机碳源浓度控制在9%。

注射用硫酸多粘菌素b 加工过程概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在对注射用硫酸多粘菌素b的加工过程进行概述和说明。

硫酸多粘菌素b 是一种重要的抗生素药物，具有广谱的抗菌活性，在临床上被广泛应用于治疗感染性疾病。

为了保证其质量和安全性，正确而规范的加工过程是至关重要的。

1.2 文章结构文章主要分为四个部分：引言、注射用硫酸多粘菌素b加工过程概述、正文和结论。

引言部分介绍了文章的目的和结构，接下来将详细描述硫酸多粘菌素b 的加工过程以及相关工艺流程控制要点。

正文部分将涵盖原料准备与处理、反应与合成过程以及结晶与干燥工艺。

最后，在结论部分总结了加工过程的关键点，并对注射用硫酸多粘菌素b加工的未来发展进行展望。

1.3 目的本文旨在全面阐述注射用硫酸多粘菌素b的加工过程，并提供实践指南。

通过详细介绍硫酸多粘菌素b的生产流程和工艺要点，读者将能够更好地理解该药物的生产过程及其质量控制。

同时，本文还对注射用硫酸多粘菌素b加工领域的未来发展进行了展望，旨在为相关研究和实践提供参考和借鉴。

2. 注射用硫酸多粘菌素b 加工过程概述2.1 硫酸多粘菌素b简介硫酸多粘菌素b是一种重要的抗生素，广泛用于临床医学领域。

它由某些链霉菌产生，具有很强的杀菌作用和抑制细菌生长的能力。

因其可被人体吸收利用，被应用于注射剂的制备中。

2.2 加工过程步骤注射用硫酸多粘菌素b的加工过程通常包括以下几个步骤：第一步是原料筛选与准备。

首先，选择高品质的链霉菌株并进行培养；然后采集发酵液并经过初步处理，去除杂质等不纯物质。

第二步是提取与纯化。

通过特定的分离技术，从发酵液中提取出硫酸多粘菌素b，并对其进行纯化处理，去除其他无关成分。

第三步是结晶与干燥。

将纯化后的硫酸多粘菌素b溶解于适当的溶剂中，经过结晶、过滤和干燥等工艺步骤，得到注射用硫酸多粘菌素b的成品。

2.3 工艺流程控制要点在注射用硫酸多粘菌素b加工过程中，需要注意以下几个工艺流程控制要点：首先，在培养链霉菌时，要确保菌株的质量和培养条件的合适性。

硫酸多粘菌素B菌种选育与发酵工艺的研究作者：吴浣钱来源：《山东工业技术》2018年第18期摘要：随着人们对于自身体质状况的关注度加强，各医学机构科研人员加强了对各项菌种的研发，其中硫酸多粘菌素B菌种是一种治疗由于革兰阴性菌引发疾病的多肽抗生素，且具有明显的功效。

初始之初，硫酸多粘菌素B菌种产品大多依赖从国外引进，为改变该现状，近年来我国加强了对硫酸多粘菌素B菌种的研发，即从生产菌种的诱变育种到最后的发酵工艺，展开了系列的探研，并取得了良好的效果。

关键词：硫酸多粘菌素B菌种；选育；发酵工艺DOI：10.16640/ki.37-1222/t.2018.18.011目前由于革兰阴性菌引发的各种疾病成为了医学机构首次科研的实验对象。

改革开放初期，对于革兰阴性菌治疗的药物硫酸多粘菌素B菌种我国大多采用从国外引进的方法，在到一定程度上不仅对病人的治疗造成一定的影响，同时也阻碍了我国医学事业的发展。

因此，为改变这种现状，国家加大了对硫酸多粘菌素B菌种的研发，通过相关的实验，进行了菌种的选育，同时探研出适合B菌种种子发酵的相关内容，进而推进我国医疗事业的稳定发展。

1 硫酸多粘菌素B菌种的性质（1）硫酸多粘菌素B菌种的概述。

硫酸多粘菌素B菌种是一种碱性琐环状多肽抗生素，主要是由氨基酸和脂肪组成，是多粘菌素B的硫酸盐形式，在医学的治疗过程中，其主要是针对对革兰阴性菌引的发如大肠杆菌、百日咳杆菌等疾病，具有良好的功效，不仅可用于防治细菌性肠炎，同时对于泌尿性感染、皮肤粘膜感染等也具有其它抗生素所没有的功效。

（2）硫酸多粘菌素B菌种的物理化学性质。

硫酸多粘菌素B菌种是多粘菌素B的一种碱性多肽抗生素的硫酸盐，是一种白色的结晶状粉末，味苦涩，易溶于水却不易溶于酯、酮、氯仿等有机溶剂。

同时，硫酸多粘菌素B菌种的化学性质与外界的因素息息相关，当外界加热温度较高、处于酸碱环境中时，其活力较低，易被分解，容易与有机溶剂等发生反应。

硫酸多粘菌素B提取工艺的研究进展常晓菲;王宏;王静;刘官军【摘要】硫酸多粘菌素B是一种碱性多肽类抗生素.由于其对产NDM-1细菌(超级细菌)具有较高体外敏感性,因此,引起了人们的广泛关注.但其结构复杂、稳定性差,在工业上分离纯化的难度很大.本文主要对硫酸多粘菌素B的提炼方法进行了综述和讨论.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2011(008)010【总页数】1页(P13-13)【关键词】硫酸多粘菌素B;超级细菌;提炼【作者】常晓菲;王宏;王静;刘官军【作者单位】山东鲁抗医药股份有限公司,济宁,272021;山东鲁抗医药股份有限公司,济宁,272021;山东鲁抗医药股份有限公司,济宁,272021;山东鲁抗医药股份有限公司,济宁,272021【正文语种】中文【中图分类】R962多粘菌素是由多粘杆菌（Bacillus polymyxa）所产生，由多种氨基酸和脂肪酸组成的一族碱性多肽类抗生素的总称，由于所含氨基酸和脂肪酸的不同，又分为多粘菌素A、B、C、D、E、M[1]。

多肽类抗生素能破坏胞浆膜的屏蔽功能，使其通透性增加，导致细胞内成分大量外漏而死亡。

对生长繁殖期和静止期的细菌都有效且不易产生耐药性。

硫酸多粘菌素B对大多数的革兰氏阴性杆菌有较强的抗菌作用，对绿脓杆菌的作用尤其显著。

但较强烈的肾毒性和神经毒性曾一度使该药的使用受到了极大限制，Falagas等进行了系统综述，指出最近多粘菌素类肾毒性发生率（0～37%）和严重程度均低于20世纪70年代。

1 硫酸多粘菌素B结构与特性多粘菌素在中性和弱酸性溶液中稳定（pH2.0～7.0），100℃时放置数小时几乎不破坏。

但当pH＞7时，很快失效，失效时仅发生立体结构的改变和分子内重排。

与醋酸酐或其他酰化剂作用时也失效。

2 硫酸多粘菌素B的提炼工艺研究进展自硫酸多粘菌素B开发以来,国内外对其分离纯化进行了大量的研究，归纳起来主要有溶媒萃取法、吸附法、离子交换法和泡沫分离法。

地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：SCDLP 液体培养基（含多粘菌素B 的SCDLP 増菌液基础）英文名称：Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格027010干粉250g/瓶SR0760冻干试剂10支/盒【产品用途】用于疏水性化妆品样品处理及化妆品和一次性使用卫生用品增菌培养。

如添加多粘菌素B 配套试剂，可用于化妆品中洋葱伯克霍尔德氏菌的选择性增菌培养。

【检验原理】酪蛋白胨和大豆蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖为可发酵的糖类；卵磷脂和吐温80能中和防腐剂，并能起到在乳浊液中分散物质的功能，卵磷脂能中和季铵盐，吐温80可中和酚、六氯酚、福尔马林，两者结合可中和乙醇。

称取本品38g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，121℃高压灭菌20min，备用。

如需制成含多粘菌素B 的SCDLP 増菌液，需在每100mL 灭菌且冷却至室温的SCDLP 培养基中加入１支多粘菌素B（SR0760SCDLP 增菌液配套试剂，需另购），混匀即可。

【质量控制】【储存条件与保质期】贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖；保质期三年。

【注意事项】1、称量时注意粉尘，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系统不适。

2、干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮结块。

贮存于避光、干燥处。

未开封产品保质期三年。

开封后根据存放条件的不同保质时间存在一定的差异。

3、质检报告可以登录环凯网站，打开“质检报告”页面，输入产品批号下载。

【废物处理】检测之后带菌物品置于121℃下高压灭菌30分钟后处理。

【执行标准】Q/HKSJ03广东环凯微生物科技有限公司企业标准普通微生物培养基【说明版本】2022年11月03日【参考文献】1．化妆品卫生规范微生物检验方法2015版2．GB15979-2002中华人民共和国国家标准一次性使用卫生用品卫生标准3．SN/T2206.3-2009中华人民共和国出入境检验检疫行业标准化妆品微生物检验方法第3部分：肺炎克雷伯氏菌4．SN/T2206.4-2009中华人民共和国出入境检验检疫行业标准化妆品微生物检验方法第4部分：链球菌5．ISO21149-2006cosmetics-----Microbiology-----Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria 6．ISO21150-2006Cosmetics----Microbiology-----Detection of Escherichia coli7.SN/T4684-2016进出口化妆品中洋葱伯克霍尔德菌的检验方法广东环凯微生物科技有限公司网址：地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876。

2024-2025学年湖北省武汉市十一校初三下学期学业质量监测（二模）生物试题注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。

2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。

回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。

3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。

1、动物的行为多种多样，以下属于学习行为的是A．蜘蛛结网B．蜜蜂采蜜C．小鸟喂鱼D．大山雀喝牛奶2、为探究光合作用，某同学设计了如图所示的实验装置（注：两玻璃瓶瓶口密封）。

利用该装置可探究（）A．光合作用是否产生氧气B．光合作用是否需要光C．光合作用是否需要水D．光合作用是否需要二氧化碳3、如图是人体在呼吸时肺内气体容量变化示意图。

下列叙述正确的是A．a→b时: 胸廓容积扩大B．b→c时: 吸气,膈肌收缩C．c→d时: 呼气,膈顶下降D．c→d时:外界气压>肺内气压4、下列关于植株生长的叙述，正确的是（）A．植株生长就是指细胞体积的增大B．植物的枝条及绿叶都是由芽发育成的C．植物只需要含氮、含磷和含钾的无机盐D．根的生长主要依靠根尖分生区的活动5、一个密闭的保温装置中装有正在萌发的种子，每隔一段时间测定其内的温度和氧气含量，并将结果绘制成曲线，如果横轴表示时间，纵轴表示温度和氧气含量，下列曲线图中能够正确反映温度（A）和氧气含量（B）随时间变化的是（）A．B．C．D．6、下列描述有利于保护生态环境的措施是A．发展生态农业，建立各种自然保护区B．为增加农业产量，毁林开田C．为了蔬菜增产，喷洒农药以杀死菜青虫D．把工业废水排入发生赤潮的海域，使有毒藻类死亡7、下列有关中枢神经系统的叙述，错误的是（）A．大脑皮层是调节人体生理活动的最高级中枢B．小脑能够协调运动和维持躯体平衡C．脑干不属于脑的组成部分D．脊髄是脑与躯体、内脏之间的联系通路8、下列疾病中与人体激素分泌异常无关的是（）①热伤风②贫血症③糖尿病④呆小症⑤夜盲症⑥巨人症A．①②⑤B．④⑤⑥C．③④⑥D．①⑤⑥9、沉迷于上网或电子游戏不仅影响学业，而且会导致眼球的某个结构曲度过大且不能恢复而形成近视。

硫酸多粘菌素b 游离纯化的原理硫酸多粘菌素B（Vancomycin Sulfate）是一种强效的抗生素，广泛用于严重感染的治疗。

由于其结构复杂且产量极低，为了进一步研究其性质和应用，需要对硫酸多粘菌素B进行游离纯化。

硫酸多粘菌素B的游离纯化可以通过如下步骤进行：1.发酵产生硫酸多粘菌素B：硫酸多粘菌素B是由枯草杆菌属细菌生产的，首先需要进行大规模的发酵培养。

在培养基中添加适当的碳源、氮源和矿物质，以促进菌株的生长和产生硫酸多粘菌素B。

2.细胞离解和除杂物：将发酵液离心，将菌体和培养基分离。

然后可以通过超滤等方法去除较大的杂质，如细胞碎片和大分子蛋白质等。

3.中性化：将发酵液调整到适当的pH值，一般为5-6之间，以提供最佳的离化和游离纯化条件。

4.温度调节：将发酵液加热至适当温度，一般为50-70摄氏度之间，促使硫酸多粘菌素B从菌体中游离出来。

5.清洗和结晶：将发酵液冷却，并用冷醇溶液洗涤来清洗硫酸多粘菌素B。

接着，使用适当的溶剂使硫酸多粘菌素B溶解，并通过加热和冷却过程来促使其结晶。

6.溶液搅拌和过滤：将溶解的硫酸多粘菌素B溶液进行搅拌，以提高结晶效率。

然后通过过滤将固体硫酸多粘菌素B分离出来。

7.干燥和纯化：将硫酸多粘菌素B固体进行干燥，可以采用真空干燥或喷雾干燥等方法。

然后通过逆流色谱等技术进行纯化，去除杂质。

需要注意的是，硫酸多粘菌素B的游离纯化是一个复杂的过程，需要仔细控制各个步骤的条件和参数，以获得高纯度和高收率的硫酸多粘菌素B。

此外，还需要对纯化后的硫酸多粘菌素B进行质量检测，包括纯度、活性等指标的测定。

总之，硫酸多粘菌素B的游离纯化是通过发酵、离解、除杂物、中性化、温度调节、清洗和结晶、溶液搅拌和过滤、干燥和纯化等步骤进行的。

通过这些步骤可以获得高纯度和高收率的硫酸多粘菌素B，为进一步的研究和应用提供了基础。