糖尿病大鼠造模STZ

糖尿病大鼠造模过程1 材料与方法1. 1 实验动物SPF级SD雄性大鼠39只, 10周龄, 体重180~200 g。

1. 2 试剂与高脂饲料配方STZ购自Sigama公司, 胆固醇、胆酸钠由上海蓝季科技发展有限公司提供。

高脂饲料配方: 2%胆固醇, 0. 3%三号胆盐,20%蔗糖, 10%猪油, 67. 7%基础饲料。

1. 3 动物分组与饲养SPF级雄性3周龄SD大鼠39只, 体重180g~200g, 适应性饲养一周后, 随机分为正常对照组10只, 模型组34只。

模型组大鼠禁食12h后, 单次腹腔注射35mg /kg的STZ。

STZ用灭菌的0. 1mmo l/L, pH4. 4d的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2%溶液, 现配现用。

正常组只注射等量的缓冲液。

72h后取尾静脉血测空腹血糖高于7. 0mmo l/L 和餐后血糖均高于11. 1mmo l/L为糖尿病模型建立。

一次注射未成模, 立即仍按原剂量补注一次STZ, 未成者淘汰,成模但缓解者淘汰。

糖尿病大鼠成模后给予要付治疗，分别是药物A+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）10只；药物B+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物C+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物A+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物B+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物C+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；正常对照组（5只），多糖组和二甲双胍组给予每天灌胃，七叶皂甙钠组给予腹腔注射。

除正常对照组外其他SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养。

1. 4 标本采集4周后，除取材组外，其他大鼠进行尾静脉取血，约300微升，30min 后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

并且对糖尿病模型组3只，正常对照组1只进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），动物称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

大鼠糖尿病造模成功的标准大鼠糖尿病造模成功的标准糖尿病是一种常见的代谢性疾病，其特点是血糖水平异常升高。

为了更好地研究糖尿病的发病机制和寻找新的治疗方法，科学家们常常使用动物模型进行实验研究。

而大鼠作为一种常用的实验动物，其糖尿病模型的建立和评价就显得尤为重要。

大鼠糖尿病模型的建立主要有两种方法：化学诱导和基因突变。

化学诱导法是通过给予大鼠某些化学物质，如链脲佐菌素（STZ）或高脂饮食，来诱导其发生糖尿病。

而基因突变法则是通过基因工程技术改变大鼠体内某些基因的表达，使其模拟人类糖尿病的发生过程。

无论是哪种方法，大鼠糖尿病模型的建立都需要满足一定的标准才能被认为是成功的。

下面将介绍大鼠糖尿病模型成功的标准。

1. 血糖水平异常升高：大鼠糖尿病模型的核心特征就是血糖水平异常升高。

正常情况下，大鼠的空腹血糖水平应该在3.9-6.1 mmol/L之间，而糖尿病模型大鼠的空腹血糖水平应该明显高于正常范围。

2. 葡萄糖耐量异常：正常情况下，大鼠在葡萄糖负荷后，血糖水平会在一定时间内迅速上升，然后逐渐恢复到正常范围。

而糖尿病模型大鼠在葡萄糖负荷后，血糖水平上升明显较高，并且恢复较慢。

3. 胰岛功能异常：胰岛是调节血糖水平的重要脏器，而胰岛功能异常是导致糖尿病发生的主要原因之一。

在大鼠糖尿病模型中，胰岛功能异常表现为胰岛细胞数量减少、胰岛素分泌减少或胰岛素抵抗增加等。

4. 病理学变化：糖尿病是一种慢性代谢性疾病，其发展过程中会引起一系列的组织和器官损伤。

在大鼠糖尿病模型中，可以观察到胰岛组织结构异常、肝脏脂肪变性、肾小球硬化等病理学变化。

5. 症状表现：大鼠在发生糖尿病后会出现一系列的临床表现，如多饮、多尿、消瘦等。

这些临床表现也是评价大鼠糖尿病模型是否成功的重要指标之一。

综上所述，大鼠糖尿病模型成功的标准主要包括血糖水平异常升高、葡萄糖耐量异常、胰岛功能异常、病理学变化和临床表现。

只有同时满足这些标准，才能认定大鼠糖尿病模型的建立是成功的。

ＳＴＺ复制糖尿病肾病大鼠模型的研究近况关键词糖尿病肾动物模型大鼠糖尿病系继心血管病和肿瘤之后的第三大非传染病，其微血管并发症之一糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)已成为终末期肾衰竭主要原因之一，亦是导致糖尿病患者生存质量下降和过早死亡的主要原因。

且其患病率呈逐年上升趋势，国外有人据研究发现糖尿病肾脏损害不是仅局限于肾小球硬化亦存在肾小管间质的损伤，基于此建议更名为糖尿病肾脏损害（diabetic kidney disease ,DKD）。

但其发病机制尚未完全阐明，防治也不十分完善，因此正确建立较理想的动物模型以深入研究是非常重要的。

目前主要采用链脲佐菌素（streptozotoein，STZ)诱导糖尿病动物模型，其建模技术主要采用单纯药物和药物结合手术两种方法，但各家对STZ的用量、配制、用药途径以及手术建模方法学等不尽相同，对选用动物与建模标准及模型成熟时间和病理变化也无一致结果，现复习相关文献后就STZ复制糖尿病大鼠动物模型的研究情况综述如下：1 STZ的作用原理STZ为一种广谱抗生素，具有抗菌、抗肿瘤作用和致糖尿病的副作用。

STZ 对实验动物的胰岛B细胞具有高度选择性毒性作用，是目前使用最广泛的糖尿病动物模型化学诱导剂，其可使多种动物如大鼠、小鼠、狗、猴、小羊、中国地鼠、豚鼠和兔等产生糖尿病。

STZ的分子结构有一个高度活性的葡萄糖侧链，使胰岛B细胞对其进行错误性识别，并进入细胞内，进一步导致多聚ADP-核糖体激活，从而引起胞内NAD +和ATP消耗，最终导致大量反应性氧化簇产生。

其余部分则是STZ的毒性基团，对胰岛B细胞产生毒性作用，破坏B细胞，这种毒性可能通过给予某种物质或改变某些条件使之减弱或消失，如葡萄糖或其类似物，这便是实验前给动物充分禁食的依据。

2 动物的选择由于鼠成本低，易获得，而小鼠造模需SIZ量大且易死亡，故目前多采用大鼠造模。

主要包括Wistar大鼠和SD大鼠。

糖尿病大鼠模型的建立101实验动物SD大鼠，体重200-250克，8周龄。

02实验试剂1）STZ(链脲佐菌素)无色固体2-8℃干燥避光保存，115℃可分解为气体水溶液不稳定，溶于双蒸水或盐溶液。

但在低温下pH4-4.5是较为稳定。

2）柠檬酸钠，柠檬酸用于调制缓冲溶液。

03实验器材1ml注射器，大鼠固定器。

04试剂配制1）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=4.5.0.1mol/L）配制0.1mol/L柠檬酸钠溶液，在用柠檬酸和氢氧化钠调节pH至4.5。

2）称量140mgSTZ溶解于10ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，配制成14mg/mlSTZ溶液。

05动物分组及造模1）大鼠自由摄食，饮水，动物房保持室温20-25℃，并维持一定的光照。

三天后，将大鼠随机分为实验组和对照组。

2）所有大鼠实验开始前12小时开始禁食但不禁水，禁食时间可根据情况顺延至18小时，但不要超过24小时。

3）将配置好的STZ溶液用锡箔纸包裹做避光处理并保存在冰水中，并在配制成功后30分钟内完整注射造模。

4）称量大鼠体重，采用腹腔注射给药进行造模，剂量为70mg/kg。

对照组注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。

06模型指标检测血糖测定：实验过程中腹腔注射STZ 48小时和72小时分段测定大鼠血糖并记录，采用剪尾采血法，使用血糖试纸进行检测。

※两次检测血糖浓度均高于16.8mmol/ml，即可认为造模成功。

07后期饲养糖尿病大鼠会有很明显的“三多一少”症状，所以尽量分笼饲养，勤换垫料，并保证足够的饲料和饮水供给。

糖尿病大鼠慢性溃疡伤口模型201实验动物SD糖尿病大鼠（八周以上大鼠，并糖尿病造模时间超过1周并少于2周）普通SD大鼠（八周以上，时间相近）。

02实验试剂1）水合氯醛（或戊巴比妥钠）用于麻醉实验大鼠。

2）医用酒精，表层消毒。

3）龙胆紫（或苦味酸，碘酊）创口标记染液。

4）试纸，标记创口，提前裁成直径为2cm的小圆片，并浸入标记染液中。

STZ诱发的糖尿病动物模型构建技术原理
STZ全称链脲佐菌素，这种药物的亚硝基脲结构能够选择性地损伤胰岛β细胞，损伤后的胰岛重构，继而纤维化。

显然，STZ的剂量是关键因素，注射剂量大则完全损伤胰岛，胰岛素绝对缺乏，形成1型糖尿病。

(STZ分子结构)
大鼠需要禁食不禁水12h，尽可能使用雄性，因为雌性对STZ的反应并不均一，这可能与雌激素水平有关。

STZ一般是现用现配2%浓度，采用单次腹腔注射即可，注射量50mg/kg(一定要注意回抽，严格禁止注入胃肠道)。

注射STZ溶液2天或者3天后，连续3天采用尿糖检测试纸检测尿糖水平，血糖水平采用葡萄糖氧化酶法检测即可，若尿糖≥3+，血糖持续升高，说明注射是没问题。

一周后大鼠可出现三多一少症状，再次检测，若尿糖≥3+，血糖≥16.67mmol/L，说明造模成功。

注意事项：
（1）尽量不用小鼠，因为小鼠对STZ敏感度不高，容易造成组内差异较大。

（2）上面提到的血糖、尿糖指标以及测定时间是比较很多资料后得出的，公认性也较强，是可用的。

（3）单次大剂量注射才是可取的，小剂量只会造成胰岛炎。

（4）血糖越高，动物死亡率越高，因此要严格控制STZ的注射剂量，预实验摸索条件是必须的；可以适当的补充胰岛素，防止低血糖导致的大量动物死亡。

（5）STZ造模比较适合长期观察，因为这种药物导致的胰岛损伤不易修复，大鼠不易代偿。

（6）静脉注射的死亡率比腹腔注射高。

大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约8.3%的成年人患有糖尿病。

到2035年，该病患者人数预计会上升至5.92亿。

在2013年，全球约有3.82亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为1.14亿。

糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。

2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。

6%，60岁以上老年人患病率高达19.6%。

因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。

因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。

得出结果为：使用体重在190g ~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。

关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ，糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。

病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。

长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。

糖尿病分为1型糖尿病（Type 1 diabetes）和2型糖尿病（Type 2 diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。

STZ诱导的大鼠糖尿病模型糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征，易发生心、脑、肾等并发症。

糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代谢下降，脂肪酸代谢增加，心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性，并在此基袖上出现氧化应激，导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加，同时出现心肌的损伤，心肌的结构和功能均发生改变，最后导致糖尿病患者的死亡。

1.实验动物SPF级SD小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为180g~200g。

2.实验分组：实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3. 模型周期4W4.主要试剂及配制方法柠檬酸、柠檬酸三钠、链脲佐霉素(Streptozocin, STZ)1. 柠檬酸钠缓冲液配制：将2.10 g柠檬酸加入双蒸水100 ml配成柠檬酸母液，称为A液；将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100 ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。

2. STZ溶液的配制：将STZ溶于0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10 mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22μm滤菌器过滤除菌。

注意避光配制，现用现配。

5.建模方法1.术前12h禁食2. 模型组小鼠按照55 mg/kg 剂量的STZ 进行腹腔注射，对照组给予给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。

3. STZ注射7 d后，测空腹血糖，选择血糖为13.5-25mmol/L纳入正式实验。

4. STZ注射后，每周测血糖，称体重，观察体重血糖变化。

5. 第4周检测各组大鼠的体重和空腹血糖值后，摘眼球采血，室温静置2h 后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。