马铃薯葡萄糖培养基

马铃薯葡萄糖培养基常备法马铃薯葡萄糖培养基是优良的半合成培养基，因马铃薯营养丰富，性能稳定，适宜大多数真菌类微生物（如食用菌、酵母菌等）的培养，故被微生物工作者视为基础培养基，实际上它确实是四季必备的常用培养基。

但马铃薯的收获是有季节性的，错过季节，往往因购不到马铃薯而无法制备马铃薯培养基，以致影响科研和生产的正常进行。

下面介绍两种制作马铃薯葡萄糖培养基的常备方法。

1．液体马铃薯培养基常备法（1）制取马铃薯常备液在马铃薯上市季节，选购一批个大，皮滑，无病毒的马铃薯，按常规，将其清洗、削皮、切片，按料水20∶100的比例配方，以80℃的水温浸煮60min，使其营养物质充分溶解水中，过滤，装瓶加塞。

以1.5×105pa的压力灭菌30min，备用。

为使马铃薯常备液更理想，在配制时还需注意以下事项：1、削皮时一定要将马铃薯的芽眼挖尽。

因芽眼中往往存有很多芽孢杆菌，如不挖除不仅消毒麻烦，亦易招致细菌性污染。

2、配制的常备液如短期内使用，则可用棉花塞瓶口。

如欲放置较长时间，应用橡皮塞塞瓶口。

高压灭菌时一定逐渐排除冷空气，如快速排气，会使瓶塞弹出。

3、常备液装瓶时，可以装上几种不同的量，以备制用时按需取液。

4、常备液于常温环境中，一般可保存8个月左右。

保存于冰箱内，可一年不变质。

（2）制马铃薯葡萄糖培养基何时需用马铃薯葡萄糖培养基，可随时将马铃薯常备液取来，加热后溶入2%琼脂，再加2%葡萄糖，然后装入试管，按常规高压灭菌，制成即可。

2．固体马铃薯培养基常备法（1）制取马铃薯常备粉块同样需选购好马铃薯，然后将其洗净、削皮，挖去芽眼，用蒸具隔水蒸30min。

但切勿放在水中烧煮，致使营养损失。

然后，将马铃薯取出，研成泥浆状，压薄后摊于搪瓷盘中，晒干或置于37℃的恒温箱内烘干，备用。

（2）制马铃薯葡萄糖培养基将已制好备用的马铃薯粉块，按100ml水加马铃薯粉块约15g的比例，先置于沸水中浸煮30min，浸出其营养成份后，过滤。

pda培养基
PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的培养基，以马铃薯和葡萄糖为主要成分。

它适用于真菌和霉菌的培养和鉴定。

PDA培养基的配方如下：
- 马铃薯提取物：200 g/L
- 葡萄糖：20 g/L
- 洋葱提取液：1 g/L
- 干酪膜素：0.1 g/L
- 硫酸镁：0.5 g/L
- 琼脂：15 g/L
- 蒸馏水：1000 mL
1
制备PDA培养基的步骤如下：
1. 将马铃薯洗净去皮，切成小块。

2. 将马铃薯块放入大容器中，加入适量的蒸馏水，煮沸1
小时，然后离心取得汁液。

3. 将马铃薯汁液过滤。

过滤液为马铃薯提取物。

4. 在一烧瓶中加入马铃薯提取物和葡萄糖，搅拌溶解。

5. 在另一烧瓶中加入洋葱提取液和硫酸镁，搅拌溶解。

6. 将两个烧瓶中的溶液混合在一起，调整pH值为5.6-6.2。

7. 在溶液中加入干酪膜素和琼脂，搅拌溶解。

8. 将培养基加热至沸腾，然后倒入培养瓶中。

9. 灭菌培养瓶，通常以121°C高压蒸汽灭菌20-30分钟。

PDA培养基可以用于分离和培养真菌，如酵母菌、霉菌和
子囊菌等。

它提供了合适的营养物质和适宜的条件，促进
真菌的生长和繁殖。

2。

品种名称：马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)
英译名称：Potato Dextrose Agar
Potato dextrose agar medium with antibiotics
培养基用途：
供霉菌和酵母菌计数及分离培养(GB4789.15-2010和ISO标准)。

马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)使用原理：
马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂;氯霉素可抑制细菌的生长。

马铃薯葡萄糖琼脂配方(每升)：
马铃薯 300g(从中提取浸出粉)
葡萄糖 20g
琼脂15g
氯霉素0.1g
最终pH 6.0±0.2
马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)使用方法：
1、称取马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)40.1g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌20min，备用。

2、霉菌和酵母菌计数。

3、用于霉菌分离鉴定。

马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)质量控制：
本品倾注平皿，下列菌株接种后25—28℃培养72h生长情况如下表。

菌名菌号生长状况菌落特征
黑曲霉ATCC16404 良好菌丝白色孢子黑色
白色念珠菌ATCC10231 良好菌落表面呈奶油色
大肠埃希氏菌ATCC25922 被抑制——
金黄色葡萄球菌ATCC6538 被抑制——
贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。

贮存期三年。

规格： 250g。

．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。

配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。

如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。

标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。

培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。

（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。

成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。

（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。

天然培养基一般不必调整pH。

（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。

简述pda培养基的配方及制作方法PDA（Potato Dextrose Agar）培养基是一种常用的微生物培养基，适用于真菌和细菌的培养和研究。

下面将简要介绍PDA培养基的配方及制作方法。

一、配方：PDA培养基的基本配方包括土豆提取物、葡萄糖和琼脂。

具体配方如下：- 土豆提取物：200克- 葡萄糖：20克- 琼脂：15克- 蒸馏水：1000毫升二、制作方法：1. 准备土豆提取物：将200克土豆削皮，切成小块，放入锅中加水煮沸，煮至土豆变软烂。

2. 过滤土豆提取物：将煮熟的土豆块取出，将土豆提取物过滤获得澄清的液体。

3. 加入葡萄糖和琼脂：将土豆提取物倒入烧杯中，加入20克葡萄糖，搅拌均匀。

然后加入15克琼脂，再次搅拌均匀。

4. 煮沸溶解：将烧杯放入加热板上，加热煮沸溶解琼脂和葡萄糖，搅拌均匀。

5. 装瓶和灭菌：将溶解后的培养基倒入培养瓶中，每瓶约20毫升。

然后用高压灭菌器将瓶内培养基加压灭菌，保持121摄氏度，压力为15磅，时间为15-20分钟。

6. 结果：冷却后，PDA培养基凝固并变成琼脂状，可用于微生物培养。

PDA培养基的配方中土豆提取物富含碳水化合物、蛋白质和维生素，提供了真菌和细菌所需的营养物质。

葡萄糖作为碳源供能，琼脂则使培养基凝固，便于微生物的生长和观察。

制作PDA培养基的过程中需要注意以下几点：- 严格按照配方和比例加入各种原料，确保培养基的质量。

- 加热溶解琼脂和葡萄糖时要充分搅拌，以免结块或糊底。

- 灭菌时要控制好温度、压力和时间，确保杀灭所有的细菌和真菌。

- 倒入培养瓶时要注意卫生，避免污染和外界微生物的侵入。

PDA培养基是一种常用的通用培养基，适用于各种细菌和真菌的培养和研究。

制作PDA培养基的方法简单易行，成本低廉，因此被广泛应用于微生物学实验室和工业生产中。

通过培养基上微生物的生长情况，可以判断其形态、生理特性和代谢活性等，为微生物的研究提供了重要的基础。

马铃薯葡萄糖培养基实验流程1. 材料准备
- 马铃薯
- 蒸馏水
- 葡萄糖
- 培养皿或试管
- 酒精灯或加热装置
- 滤纸或纱布
2. 制备马铃薯汁
- 将马铃薯洗净,去皮,切成小块
- 用少量蒸馏水浸泡马铃薯块,捣碎成糊状
- 用纱布或滤纸过滤,获得无色清液(马铃薯汁)
3. 配制培养基
- 称取一定量的葡萄糖,溶于马铃薯汁中
- 通常浓度为0.5%-2%的葡萄糖溶液
- 用蒸馏水定容至所需体积
4. 灭菌和分装
- 将配制好的培养基装入培养皿或试管
- 用酒精灯或高压锅进行高温灭菌,时间约20-30分钟 - 待冷却后,即可使用或储存备用
5. 使用和观察
- 用无菌操作将待培养物种植于培养基中
- 置于恒温培养箱,适当温度为25-30℃
- 定期观察生长情况,记录结果
6. 实验收尾
- 实验结束后,将用过的培养基和器皿进行无害化处理 - 清洗并消毒实验器材,准备下一次实验
注意事项:
- 操作时注意无菌,避免污染
- 配制溶液时精确称量
- 高温灭菌时注意安全
- 保持实验区域清洁有序。

食用菌常用培养基同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样，但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。

马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍，菌丝都能正常生长。

现将常用的培养基配方和配制方法举例介绍。

1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g琼脂 20g 水 1000mLpH值自然2.马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养基)马铃薯(去皮) 200g 蔗糖 20g琼脂 20g 水 1000mLpH值自然以上两种培养基广泛应用于各种菇、耳、猴头类食用菌的培养。

其具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管中。

3.马铃薯半合成培养基(一)马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g磷酸二氢钾 3g 硫酸镁 1.5g维生素B1 100mg 琼脂 20g水 1000mL pH值 5.8～6.2此配方制作方法与PDA培养基相同。

不过加入部分化学药品，应在过滤后加入。

适用于香菇菌种保藏用，也适于培养平菇、双孢蘑菇、滑菇、金针菇、灵芝和猴头等母种用。

4.马铃薯半合成培养基(二)马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖(蔗糖) 20g玉米粉 30g 黄豆粉 10g酵母膏 2g 磷酸二氢钾 1.5g硫酸镁 0.5g 琼脂 20g水 1000ml pH值自然此配方适合各种菇类。

制作时应注意：黄豆粉与马铃薯同时下锅，煮15分钟后再加入玉米粉，以免起糊影响过滤。

5.合成培养基(一)蛋白胨 2g 葡萄糖 20g磷酸氢二钾 1g 硝酸铵 1g磷酸二氢钾 0.46g 硫酸镁 0.5g琼脂 20g 水 1000mL6.合成培养基(二)葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 0.5g氯化钠 0.2g 碳酸钙 2g琼脂 20g 水 1000mL酵母汁(1：10) 100mL 硫酸镁 0.2g将上述原料分别放入锅内，加水放入琼脂加热，并经搅拌熔化后即可分装试管。

酵母菌、霉菌常用培养基得配制一、目得要求了解合成培养基、半合成培养基与天然培养基得配制原理。

学习与掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基与察氏培养基得配制方法。

二、基本原理麦芽汁培养基与马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌与霉菌、马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌、豆芽汁葡萄糖培养基也就是培养酵母菌及霉菌得一种优良培养基、察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。

麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基与豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。

培养基配方中出现得自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现得pH、三、实验材料(一)药品葡萄搪、蔗糖、NaN03、K２HP04、KCl、MgSO4·7Ｈ２Ｏ,FeS０４、琼脂。

(二)仪器天平、高压蒸汽灭菌锅。

(三)玻璃器皿移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。

(四)其她物品药匙、ｐH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。

四、实验内容(一)麦芽汁培养基得配制1.培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林。

2.配制方法(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡６-1２h,置于１５℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒得两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。

(2)取一份麦芽粉加四份水,在6５℃水浴锅中保温3—4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法就是取０.5mｌ得糖化液,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。

(3) 糖化液用4—6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20 m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。

(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10－１５波林,调pH至6.4。

如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花得新鲜麦芽汁,加水稀释到10－15波林后使用。

pda培养基配方比例PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称。

宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

下面就详细介绍了pda培养基的配方及配制方法及步骤。

1.PDA培养基的配方：马铃薯200克葡萄糖20克琼脂20克蛋白胨5克磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克水1000ml PH自然。

2.PDA培养基的制作工艺流程：设计培养基配方→材料煮汁→补水→琼脂溶解→再次补水→药品溶解→调PH值→分装→灭菌→摆斜面3.PDA培养基的制作步骤a 材料煮汁：1000ml水置于锅中，待烧开后加入200克去皮、切片的马铃薯煮20到30分钟，至薯片软而不烂，用八层纱布过滤，取滤液。

b 琼脂溶解和补水：将马铃薯滤液重新加入到锅中，补水至1000ml，继续加热沸腾而后加入琼脂，继续文火煮沸至琼脂完全溶解，再次补水至1000ml。

c 药品溶解：在琼脂溶解后加入葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，蛋白胨5克。

14 分装：a.试管培养基的分装分装所用的容器事先一定要清洗干燥，新购的试管内一般都残留烧碱，应先用稀硫酸在烧杯中煮沸，然后用清水洗干净，口朝下晾干后备用。

不能现洗现用，以免因管壁附有水膜导致培养基在试管口滑动。

分装试管时尽量避免培养液黏附试管口，以免培养基粘附棉塞，增加污染几率。

试管装量：制斜面培养基一般为试管高度的1/4—1/3。

b.平板培养基的分装将配制好的培养基倒入三角瓶，（三角瓶也一定要清洗干净），体积不要超过三角瓶的1/3（否则加热时液体沸腾易把棉塞冲开）5 加棉塞：棉塞要用普通棉花制作，不能用脱脂棉。

棉塞的大小，松紧要适度，过松达不到滤菌的目的，过紧妨碍空气流通，松紧度以于抓棉塞整个试管提起为宜。

标准的棉塞应是塞头略大，不易变形，一般塞入试管口2—3厘米。

占塞总长的2/3—1/3裸露在试管口外，比管口略大。

三角瓶棉塞同样松紧适中，一般塞入三角瓶3~4cm.6 装锅灭菌：将塞好棉塞的试管或三角瓶装进置物桶内，桶未装满用空试管填满以免试管倾倒，2即可放入手提式高压灭菌锅中，盖好报纸，防止灭菌时棉塞被冷凝水淋湿，扭紧锅盖，排净锅内冷空气，待温度升至122—124℃之间开始计时30min，灭菌结束。

马铃薯 20g 蔗糖 2g 自来水 100mL 琼脂 2g pH 自然（约6.0）灭菌 1.05kg/cm2，20min马铃薯处理方法:马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min（注意火力的控制，可适当补水），用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶。

综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000 毫升磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克葡萄糖20克维生素10毫克琼脂18克先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。

在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。

分装，灭菌，备用。

该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。

马铃薯糖琼脂培养基把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。

在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

按所用原料不同，可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。

马铃薯培养基就是天然培养基，综合马铃薯培养基就是人工合成的。

不同的生物需要不同培养基，注意配方的选取，称取要准确，误差不能太大对于特殊物品，不能灭菌的要用过滤方法除菌配好后高温高压灭菌，可以在室温下放置很久，如果打开使用过一次，请放置冰箱如果长时间不用，一定要重新配置，不能拿以前的用来培养，避免污染。

培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。

但一般培养基的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。

（一）配料按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。

（二）溶化将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。

麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。

马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。

豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。

察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。

麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。

培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。

(一)麦芽汁培养基的配制1．培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林。

2．配制方法(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。

(2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。

(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。

(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4。

如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。

(5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。

(6)分装、加塞、包扎。

(7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。

（二)马铃薯葡萄糖培养基的配制1、培养基成分马铃薯20g葡萄糖 2 g琼脂 1.5-2g水100ml自然pH2．配制方法(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。

80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。

100 Pa灭菌20 min。

即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。

（2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。

NYDA培养基：牛肉膏8 g；酵母浸膏：5g；葡萄糖：10g ；琼脂：20 g ；水：1000ml。

自然pH, 115℃灭菌20min。

NYDB培养基：在NYDA培养基配方中除去琼脂。

自然pH, 115℃灭菌20min。

PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基)：马铃薯200g; 葡萄糖：20g; 琼脂：20 g，水：1000ml。

115℃灭菌20min。

PDB培养基：在PDA培养基配方中除去琼脂。

自然pH, 115℃灭菌20min。

拮抗菌：粘红酵母（Rhodotorula glutinis）（本试验室保存的菌种）拮抗菌菌悬液的制备：在250ml的三角瓶中装入50ml的NYDB培养基，置于高压灭菌锅中，在121℃下灭菌20min，冷却后用接种环接入两环粘红酵母，在28℃下，200r/min培养20小时。

取出三角瓶，将酵母菌培养液置于离心杯中，在3000r/min下离心15min收集菌体，并用无菌的生理盐水（0.85%）洗涤酵母菌体两次，最后用无菌的生理盐水洗下酵母菌，制成酵母菌悬液，用血球计数板计数，计算出酵母菌悬液的浓度。

并用无菌的生理盐水调整至所需浓度，待用。

病原菌的培养与保存：用接种环挑一环致病霉菌的菌种，接入PDA试管斜面的培养基上，置于培养箱中，在23℃培养7天左右，取出，置于4℃的冰箱里保存待用。

病原菌菌悬液的制备：用接种环在培养好的霉菌试管斜面上刮取适量孢子，转移到无菌生理盐水中，用血球计数板计数，并用无菌生理盐水调整浓度至所需浓度，待用。

水果的预处理：挑选出来的水果先用自来水清洗，然后再浸入0.1%的次氯酸钠溶液中消毒1分钟，取出，再用自来水冲洗，冲掉残余的次氯酸钠，再用在酒精灯上灭过菌的打孔器打洞，其中梨果在赤道部位打一个直径5毫米深5毫米的洞；桃果的表面打一个直径5毫米深3毫米的洞；柑桔的表面打一个直径7毫米深3毫米的洞；草莓的表面打一个直径5毫米深3毫米的洞；苹果的赤道部位打一个直径5毫米深5毫米的洞。

PDA培养基制作PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基) 马铃薯（去皮）200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15～20g、蒸馏水1000 ml ，自然pH。

在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。

(1) 称量称量去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15～20 g。

提示：琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的15 g就够了，质量差的应适当增加。

另外，在夏天气温较高时，适当增加用量。

(2) 将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000 ml，煮沸30 min。

用纱布滤去马铃薯残渣。

(3) 将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。

提示：在琼脂熔化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

(4) 加入葡萄糖葡萄糖溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000 ml。

提示：通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，如1 000 ml、2000 ml 等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。

(5) 分装根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。

分装试管，其量为管高的1／5，灭菌后制成斜面。

分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。

(6) 加塞在管口或瓶口塞上棉塞。

棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。

正确的棉塞是形状、划、、松紧与管口或瓶口完全适合，过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的，且棉塞过小往往容易掉进试管内。

正确的棉塞头较大，约有1／3在外，2／3在试管内。

分装过程中注意不要使培养基沾染在管(瓶)口上以免浸湿棉塞，引起污染。

(7) 包扎加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。

(8) 灭菌将上述培养基以0.1MPa，121℃，高压蒸气灭菌20 min。

培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。

太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。

在糖化过程中，应每小时搅拌一次。

取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

2 基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。

3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。

pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。

3.2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。

pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。

北京华越洋生物提供QQ:1733351176马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA ）使用方法Potato Dextrose Agar用途：用于霉菌、酵母菌计数用。

分离培养霉菌。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方：（g/L ）马铃薯浸粉 3g葡萄糖 20g琼脂粉 15g氯霉素 0.1g马铃薯葡萄糖琼脂培养基用法：马铃薯葡萄糖琼脂培养基技术标准：•本品参照GB4789.15-2010标准配方配制；•用标准菌株检验符合质控标准。

使用方法：1、 称取本品40.1g ，加入蒸馏水或去离子水1 L ，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌20min ，备用。

2、 霉菌和酵母菌计数时，参照高盐察氏琼脂培养基使用方法。

3、 用于霉菌分离鉴定，。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA ）Potato Dextrose Agar用途：用于霉菌、酵母菌计数用。

分离培养霉菌。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基质量控制：本品倾注平皿，下列菌株接种后25—28℃培养72h 生长情况如下表。

菌 名 菌 号 生长状况 菌落特征 黑曲霉 ATCC16404 良好 菌丝白色孢子黑色白色念珠菌 ATCC10231 良好 菌落表面呈奶油色大肠埃希氏菌 ATCC25922 被抑制 —— 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 被抑制 —— 贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。

贮存期三年。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA ）使用方法：1、 称取本品40.1g ，加入蒸馏水或去离子水1 L ，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌20min ，备用。

北京华越洋生物提供QQ:17333511762、霉菌和酵母菌计数时，参照高盐察氏琼脂培养基使用方法。

3、用于霉菌分离鉴定，。

酵母菌、霉菌常用培养基的配制一、目的要求了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。

学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。

二、基本原理麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。

马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。

豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。

察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用.麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基.培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH.三、实验材料(一）药品葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O，FeS04、琼脂。

(二)仪器天平、高压蒸汽灭菌锅。

（三)玻璃器皿移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等.(四)其他物品药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。

四、实验内容(一）麦芽汁培养基的配制1．培养基成分新鲜麦芽汁一般为10—15波林.2．配制方法(1）用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6—12h，置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。

(2）取一份麦芽粉加四份水,在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全（检查方法是取0。

5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现,即表示糖化完全）。

(3）糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清（用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤）.(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10—15波林,调pH 至6．4.如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10—15波林后使用。