TSK-GELSW色谱柱使用中的注意事项常见问题及故障排除
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TSK是日本产品,但是目前该产品在很多国内的标准上占有一席之地,我希望在科技市场上有我们自己的国有品牌。
科学技术是第一生产力,科学技术产业如果国有化那么才是真正的强大。
本人不得不使用该产品,对其附带使用手册进行翻译,也很无奈,并跟同样无奈的人分享。
安全预防:警告:离火远点在使用可燃的溶剂时要采取适当的预防措施。
火、爆炸和有毒的试剂有潜在的危险。
注意:1.在通风良好的环境使用2.不要使溶剂溢出泄露会引起火灾、电子冲击、有毒、损害和腐蚀3.带眼镜保护装置并带保护性手套4.小心处理包装不适当的持有方式会导致破裂和飞溅5.只能按照设计的好的方式使用本产品仅用于分离和纯化6.确定组分是安全的,检查获得的组分和溶液是否安全7.适当使用,要适用于当地的法律注意:急救:略,放置和储存:避免储存本品于低于0度的地方。
如果存放的地方太糟糕,外壳会破裂。
在使用本产品时要使用适当的眼镜保护装置废料处理:使用大量水稀释,在适用的规定下可以进行焚烧处理。
TSK-GELSW Type的额外说明:Semi-micro column SuperSW3000(2.0mm和1mm,30cm长)的使用手册介绍:这个柱子是被设计用于高敏感分析,比传统的(4.6mm或7.8mm)更适合。
长期储存:在替换存储溶剂时,流速应少于推荐流速的一半除去污染的颗粒:柱子的效率很容易降低,是由于柱子进入了污染物。
强烈推荐使用0.2-0.5微孔滤膜。
推荐流速:填充柱TXK-GEL SW是用于水溶性的高表达的物质分析像蛋白质、酶和核酸。
我们有钢制的和玻璃的2种。
尤其是玻璃填充柱是生物适合的类型,它是由高精密的由塑胶封口的玻璃管组成。
长期反方向使用本柱会使柱效降低。
在安装和拆卸时,注意不要使任何气泡进入柱子。
在安装柱子前一定要冲洗管道并排气。
安装:如果在把帽从柱子的进口方向拿走时有溶液流出,那么就可以仔细地连接柱子,这样就不会有气泡进入柱子。
如果没有溶液流出,那么从反方向连接柱子的出口端并进行泵液,排出气泡。
水相分子尺寸排阻色谱柱TSKgel SW系列补充说明书东曹株式会社出厂溶剂操作注意事项色谱柱的出厂溶剂:0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液+0.1 mol/L Na2SO4+0.05 % NaN3(pH 6.7)填料操作注意事项阻燃填料(改性硅胶)TSKgel G2000SW XL,G3000SW XL,G4000SW XL,G2000SW,G3000SW,G4000SW,G2000SW Glass,G3000SW Glass,G4000SW Glass,SuperSW2000,SuperSW3000,SuperSWmAb HR,SuperSW mAb HTP,UltraSW Aggregate,UP-SW3000TSKgel guardcolumn SW XL,SW,SW Glass,SuperSW,SuperSW mAb,UltraSW,UP-SW,UP-SW DCTSKgel SW系列产品补充信息半微型色谱柱:TSKgel SuperSW3000(2.0 mmI.D.×30 cm/1.0 mmI.D.×30 cm),TSKgel SuperSW mAb HR,TSKgel SuperSW mAb HTP ,TSKgel UltraSW Aggregate,TSKgel UP-SW 3000,TSKgel guardcolumn UP-SW 和TSKgel guardcolumn UP-SW DC的使用说明书为防止财产损失、确保个人安全,请在使用本产品之前,仔细通读本补充说明书。
本补充信息中所用的章节编号与“TSKgel SW系列”的使用说明书一致。
有关TSKgel SuperSW3000,TSKgel SuperSW mAb HR,TSKgel SuperSW mAb HTP,TSKgel UltraSW Aggregate和TSKgel UP-SW3000 色谱柱的相关内容,请参阅本补充信息的“注意事项”,第1节,第3节,第4节(表1),第6节,第7节(表3),第11节(表4)和第13节(表6和表7),忽略“TSKgel SW系列”的使用说明书中的相应章节。
离子色谱柱TSKgel SuperIC系列使用说明书东曹株式会社安全注意事项[注意标签]■远离火源使用易燃溶剂时,请务必小心。
否则可能会导致火灾、爆炸或中毒。
■使用环境必须通风良好如果通风不良,易燃或有毒溶剂可能会导致火灾、爆炸或中毒。
■请勿喷洒溶剂溶剂发生喷洒或泄漏可能会导致火灾、触电、中毒、受伤以及腐蚀。
清除漏出的溶剂时,请佩戴合适的护具。
■请佩戴护目镜和防护手套有机溶剂和酸属于有害物质,切勿直接接触皮肤。
■请小心处理包装处理不当可能会导致产品破裂或溶剂飞溅。
■请勿将本产品用于其他目的本产品仅可用于分离和提纯,请勿用于其他用途。
■请确认化合物的安全性请确认分离和提纯后的化合物和溶剂安全可靠。
■正确废弃请根据当地法律法规正确废弃。
注■请妥善保管本说明书,以便日后参阅。
注意事项:出厂溶剂出厂溶剂:请参阅本说明书中《3. 色谱柱信息》中的内容。
注意事项:填料易燃性填料(乙烯基共聚物)目录1. 简介 (1)2. 使用前 (1)3. 色谱柱信息 (1)4. 色谱柱部件 (5)5. 操作 (6)6. 安装 (8)7. 保存和废弃 (10)8. 清洗色谱柱 (11)9. 理论塔板数和不对称因子的计算方法 (12)10. 质量标准和质量保证 (13)1. 简介本说明书详细记载了有关如何正确保存和使用该类色谱柱的重要信息,以便充分发挥产品的性能。
使用色谱柱之前,请务必仔细阅读本使用说明书。
2. 使用前使用前,请检查色谱柱的包装和外观,确认是否有损坏。
如果发现损坏,请联系当地东曹销售代表。
然后确认色谱柱配有以下文件:使用说明书1份检测报告(Inspection Data)1份3. 色谱柱信息如表1和2所示,TSKgel SuperIC系列产品共包含15种不同的分析柱和保护柱。
表1 分析柱信息(1)1 PEEK:聚醚醚酮(Poly Ether Ether Ketone)2检测用溶剂·TSKgel SuperIC-Anion,TSKgel guardcolumn SuperIC-A6.0 mmol/L四硼酸钠+15 mmol/L硼酸+0.2 mmol/L碳酸氢钠·TSKgel SuperIC-AP,TSKgel guardcolumn SuperIC-AP1.7 mmol/L碳酸氢钠+1.8 mmol/L碳酸钠·TSKgel SuperIC-AZ,TSKgel guardcolumn SuperIC-AZ6.3 mmol/L碳酸氢钠+1.7 mmol/L碳酸钠·TSKgel SuperIC-CR,TSKgel guardcolumn SuperIC-CR2.2 mmol/L甲基磺酸+1.0 mmol/L 18-冠醚-6·TSKgel SuperIC-Cation HS3.0 mmol/L甲基磺酸+0.4 mmol/L 18-冠醚-6+0.2 mmol/L L-组氨酸·TSKgel guardcolumn SuperIC-C HS1.2 mmol/L甲基磺酸+0.4 mmol/L 18-冠醚-6+0.2 mmol/L L-组氨酸如果东曹离子色谱仪IC-2001或IC-2010使用的是抑制模式,请使用以下抑制胶。
色谱柱在使用过程中易显现的问题和解决方法色谱柱日常维护每天用充足的时间来维护色谱柱,您将节省更多有利于处置色谱柱故障的时间,调试您的色谱柱的寿命也会变得更长,色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关,zui重要的是与日常维护紧密相关。
色谱柱的使用寿命重要依据柱效和柱压两个指标来衡量,假如一支色谱柱的柱效太低或者太高,通常被认为该色谱柱的使用寿命已尽结束。
因此,延长色谱柱的使用寿命关键是,清除引起柱效下降和柱压上升的因素,通过以下几点帮战您完成色谱柱的日常维护工作。
一、流动相的pH应在使用范围内以硅胶为基质的反相色谱柱的pH范围为2~9,流动相超出其pH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。
二、去除样品和流动相汇总的固体颗粒样品和流动相中含有固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,不但会引起柱压的上升,而且也会引起柱效下降。
因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45um滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因此可以阻拦固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压上升在分析故障中占很大比例,因此除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
四、正确使用缓冲盐缓冲盐使用欠妥会使其在流动相(含有机溶剂)中析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时拦阻了基质上的键合的碳链自由伸展,使用色谱柱的保管本领下降,柱效降低。
建议使用前要过滤,使用后要冲洗。
实在方法如下:1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需要过滤流动相1.0ml/min流速冲洗60min.2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相构成相同的过滤流动相像1.0ml/min流速冲洗60min;分析完成后,再用该过滤流动以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。
凝胶色谱仪使用时常见故障的断定及解决方法诊状可能的原因及解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温,必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3"7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品。
色谱柱的使用和保护注意事项色谱柱的正确使用和保护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至破坏。
在色谱操作过程中,需要注意以下问题,以保护色谱柱。
1、防止压力和温度的急巨变化及任何机械震动。
温度的忽然变化或许使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填补状况;柱压的忽然高升或降低也会激动柱内填料,所以在调节流速时应当迟缓进行,在阀进样时阀的转动不可以过缓( 如前所述 )。
2、应渐渐改变溶剂的构成,特别是反相色谱中,不该直接从有机溶剂改变成所有是水,反之亦然。
3、一般说来色谱柱不可以反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才能够反冲除掉留在柱头的杂质。
不然反冲会迅速降低柱效。
4、选择使用适合的流动相( 特别是pH),以防止固定相被破坏。
有时能够在进样器前方连结一预柱,剖析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入剖析柱以前早先被硅胶 " 饱和 " ,防止剖析柱中的硅胶基质被溶解。
5、常常用强溶剂冲刷色谱柱,消除保存在柱内的杂质。
在进行冲洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20 倍左右。
6、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防备溶剂挥发干燥。
绝对严禁将缓冲溶液留在柱内静置或更长时间。
7、色谱柱使用过程中,假如压力高升,一种可能是烧结滤片被拥塞,这时应改换滤片或将其拿出进行冲洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;假如柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
在后两种状况发生时,当心拧开柱接头,用干净小钢将柱头填料拿出1-2mm 高度 ( 注意把被污染填料取净) 再把柱内填料整平。
然后用适合溶剂润湿的固定相 ( 与柱内同样 ) 填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。
这样办理后柱效能获得改良,可是很难恢复到新柱的水平。
柱子无效往常是柱端部分,在剖析柱前装一根与剖析柱同样固定相的短柱 (5-30mm) ,能够起到保护、延伸柱寿命的作用。
色谱柱维护、保养与常见故障排除MicrosoftWord文档1色谱柱的维护保养、再生与常见故障排除现在质量部液相色谱仪上所使用的是c18色谱柱,色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的,新的色谱柱在使用之前应该在液相色谱仪上进行性能测试,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的色谱级甲醇平衡色谱柱;并且应注意用纯水"过渡"。
平衡过程中,应将流速先设定0.3 ml/min 0.5 ml/min 0.8 ml/min缓慢地提高.最后用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线。
色谱柱的维护1.配制流动相pH决不能超过该色谱柱规定的pH使用范围。
2.避免流动相组成剧烈变化。
3.流动相使用前必须经脱气和过滤处理。
4.应在实验完毕后将柱子冲洗干净,并保存在10;90甲醇水溶液中色谱柱的保存(1)色谱柱每天实验后的保养:实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗20分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用纯甲醇冲洗20分钟。
注意:不能用纯水常时间冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止使填料水解键合相失效而产生填料塌陷。
2)长期保存色谱柱:色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。
可以储存在纯甲醇中,并将购买新色谱柱时附带的堵头堵上防止干枯。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现双峰的现象,一般来说是柱效下降。
依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱,然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
4、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高,如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加,属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高(应是系统出现故障)。
部分常见原因及解决办法:(1)色谱柱头的过滤筛板或单向阀堵塞和污染;解决方法:如是色谱柱头的过滤筛板或单向阀被污染,卸下色谱柱头或单向阀,将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟,后再用纯水超声10分钟,(注:单向阀在超声时千万不要倒置超声)重新装入色谱柱。
TSK-GELG4000PWXL色谱柱操作说明TSK-GEL? G4000PWXL色谱柱使用手册请使用色谱柱前仔细阅读本《使用手册》。
本使用手册包括TSK-GEL? G4000PWXL色谱柱的操作条件和说明、安装说明以及柱子保护方面的信息。
产品型号08022 7.8mm ID×30cm08035 TSKtop-off gel PWXL,1g wet gelA 操作条件参数说明1. 出货溶剂水2. 最大流速1.0 mL /min当采用高黏度的缓冲溶液,为了不超过最大压力,需要降低最大流速。
当改变溶剂,采用的流速为最大流速的25%。
3. 标准流速 0.3-0.6mL/min4. 最大压力 20kg/cm2=300psi5. pH范围 2.0-12.06. 盐浓度≤ 0.5Molar7. 有机浓度≤ 20%。
低流速下采用梯度洗脱有机溶剂的浓度可以达到50%。
8. 温度 10-80℃ 当低于10℃时降低流速.9. 清洗溶剂1) 高盐浓度缓冲液( 0.5-1.0M),或2) pH 2-3 或pH 9-12缓冲液,或3) 含有乙腈或甲醇的缓冲液,或4)含有尿素或SDS的缓冲液注意:根据样品性质选择清洗溶剂.例如采用1)除去碱性聚合物,2)除去疏水蛋白质等。
10. 储存长时间不使用色谱柱时,请保存在含有0.05%的NaN3缓冲溶液或20%的乙醇溶液中。
如果是过夜保存,色谱柱可在系统中过夜,但需采用流动相在低流速下整夜冲洗柱子。
阻止空气进入柱子。
11 柱子保护建议使用保护柱延长分析柱的寿命。
保护柱的寿命很大程度上取决于样品的清洁度。
一般,保护柱在进行了30-40个样品进样后,峰会变宽或者有峰裂的情况下,需要更换保护柱。
12 TSKtop-off gel 有时,由于事故、样品、流动相或操作的改变,色谱柱或保护柱入口会产生一个凹位。
可采用TSKtop-off gel PWXL 来填补这些空隙。
B 说明TSK-GEL G4000PWXL色谱柱是在数据单的条件下进行的柱效测定。