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几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH 肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
中国关于最低抑菌浓度的标准
根据中国卫生部发布的《医疗机构感染监测规范》（GB 15982-2012），对于抗菌药物的最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）的标准如下：
1. 青霉素类药物：对溶血性链球菌，血液培养病原体的MIC 不超过0.5μg/mL；对其他细菌的MIC不超过4μg/mL。
2. 氨基糖苷类药物：对肠杆菌科细菌的MIC不超过4μg/mL；对革兰阳性球菌的MIC不超过8μg/mL。
3. 头孢菌素类药物：对大肠埃希氏菌的MIC不超过4μg/mL；对葡萄球菌的MIC不超过8μg/mL。
4. 喹诺酮类药物：对肠杆菌科细菌和葡萄球菌的MIC不超过2μg/mL。
需要注意的是，这些标准是为了评估细菌对特定抗菌药物的敏感性而制定的，而不是单一的最低抑菌浓度标准。
此外，不同细菌对抗菌药物的敏感性可能存在差异，具体的标准还需参考相关文献和临床实践的指导。
抗菌药物最小抑菌浓度的测定欧阳家百（2021.03.07）一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。
二、实验目的：通过采用常量稀释法, 检测几种抗菌药物对----菌株的最小抑菌浓度( MIC) , 对临床诊断用药有指导作用。
三、仪器和试剂：MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸馏水吸头0.1mol磷酸缓冲液接种环（PH6.0）无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22 无菌针筒抗菌药物金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（E test）液体稀释法操作步骤：1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100ml 浓度为1280μg/ml 的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg 。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20℃环境，并注意抗菌药物的保存期限。
表1 稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
抗生素最低抑菌浓度（MIC）和半数抑菌浓度（MIC）测定方法几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法：1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
word附件3.4最低抑菌浓度（MIC）测定1.菌悬液的制备刮取18～20小时的培养物，在管壁上充分研磨后混悬于1ml缓冲液中，借助比浊仪，调菌悬液浓度至104/ml，于1小时用多点接种仪接种（放置室温应大于25℃）。
2.MIC测定(1)抗菌药物储存液制备⏹抗菌药物称量及配制：根据各抗菌药物的纯度称取，以目前所用抗菌药物为例。
抗菌素纯度称量（mg）加溶剂(ml)储存液浓度(μg/ml)四环素100% 3.2 1 3200大观霉素63.4% 40.38 1 25600头孢曲松81.5% 2.45 1 2000环丙沙星84.4 3.8 1 3200⏹分装与保存：每管200μl，-70℃可保存一年。
(2)抗菌药物工作液制备青霉素：四环素:大观霉素：头孢曲松:环丙沙星：(3)抗菌药物梯度培养皿的制备⏹培养皿编号：按各抗菌药物浓度编号。
⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中，与15ml 50℃预温的培养基充分混匀，平放在超净台，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于4℃冰箱。
(4)菌悬液接种与培养⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。
⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。
⏹置35℃～36℃、5%～10% CO2一定湿度的环境中培养。
⏹记录放置时间。
⏹培养18～24小时观察结果。
(5)结果判读⏹观察细菌生长情况：-记录结果读取时间。
-在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片染色和氧化酶试验）。
-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿，进行判读：接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。
⏹MIC判读与记录：-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为 g/ml 。
-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在《WHO参考菌株及MIC 实验结果记录表》用（+）表示生长，（-）表示无生长。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法近年来，随着抗生素的广泛使用以及细菌耐药性的增加，抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）的测定变得日益重要。
MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度，是评估抗菌药物对细菌耐药性的一种重要方法。
下面介绍几种测定抗菌药物MIC的方法。
1. 琼脂扩散法琼脂扩散法是一种经典的MIC测定方法。
该方法基于抗生素与菌株相互作用抑制菌株生长的原理。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入琼脂平板中，并在琼脂表面均匀涂布细菌悬液。
待菌株在琼脂表面生长形成克隆后，观察克隆周围清晰的无菌区域大小，根据无菌区域所对应的抗生素浓度计算MIC值。
该方法简单易行，但由于该方法目测判断，因此存在主观性差异和读片误差的问题。
2. 荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）（Alamar blue）法荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）法是一种高通量及准确性较高的MIC测定方法。
该方法基于菌株呼吸代谢消耗的荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）的发光信号变化来评估抗生素的MIC值。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入微孔板中，并添加细菌悬液及荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑），经过一定时间后读取板上的荧光信号，测算MIC 值。
该方法准确性高，可用于筛选大量样本的抗菌药物敏感性，但需要特殊设备和耗费较多经费。
3. 壳聚糖纳米粒子微滴法壳聚糖纳米粒子微滴法是一种新兴的MIC测定方法。
该方法基于壳聚糖纳米粒子本身具有抑菌作用及微滴原理，实验中将不同浓度的抗生素与含菌液的溶液制成微滴，并添加壳聚糖纳米粒子，待微滴凝胶后进行观察，根据微滴内的细菌生长情况评估折射率值，进而计算MIC值。
这种方法具有较高的准确性和可靠性，但需要特殊仪器和技术支持。
4. 测序MIC法随着测序技术的发展，现已出现测序MIC法。
该方法基于高通量测序技术，对菌株进行全基因组测序，确定细菌株中抗生素耐药基因的编码序列，并进行序列比对和分析，确定抗生素的MIC值。
常量肉汤稀释法：1、抗菌药物储存液的制备：浓度不应低于1000ug/ml或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
配制好的药物储存液应贮存于-60度以下环境，保存期不超过6个月。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂2、药敏实验用抗菌药物浓度范围：根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3、培养基：NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
4、接种物的制备：有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。
注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。
5、MIC板制备：无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10μl，第12孔不加药作为生长对照，冰冻干燥后密封，-20℃以下保存备用。
6、接种物制备：将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液，经MH肉汤1∶1000稀释后，向每孔中加100μl，密封后置35℃普通空气孵箱中，孵育16~20h判断结果。
抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵冇24 小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于泄量测立体外抗菌活性。
二、实验目的：通过采用常量稀释法，检测几种抗菌药物对--菌株的最小抑菌浓度（MIC）, 对临床诊断用药有指导作用。
MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸饰水吸头接种环0.1 mol磷酸缓冲液(PH6.0)无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22无菌针筒抗菌药物金黄色匍萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（Etcst）液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置0000000000000MH液体试管中抗菌药物梯度稀释观察结果1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000ug/ml(如1280ug/ml)或10倍于最高测左浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280ug/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750ixg/mgo用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg.根据公式讣算所需稀释剂用量为：(182.6 mgX75O u g/ml)/1280 ug/ml= 107.0ml,然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20°C环境，并注意抗菌药物的保存期限。
表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范带|根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范国应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton (MH)肉汤，pH7.2~7.4。
