实验讲解

实验一：食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的1. 掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的原理2. 掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计算方法3. 了解分光光度计的构造二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为538 nm，可测定吸光度并与标准比较定量。

三、仪器与试剂1. 仪器（1）分光光度计（2）小型胶肉机（3）恒温水浴锅2．试剂（1）亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。

（2）乙酸锌溶液(220g/L)：称取220.0 g乙酸锌，先加30mL冰醋酸溶解，用水稀释至1000 mL。

（3）饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。

（4）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4ｇ对氨基苯磺酸，溶于100mL20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

（5）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

（6）亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

（7）亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

四、实验步骤1. 提取称取2.50g经绞碎混匀的样品，于50mL烧杯中，加硼砂饱和溶液12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300 mL 将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

2. 提取液净化在振荡上述提取液时加入5 mL 亚铁氰化钾溶液, 摇匀, 再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

加水至刻度, 摇匀, 放置30min, 除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤, 弃去初滤液30mL，滤液备用。

一、瓶内吹气球思考：瓶内吹起的气球，为什么松开气球口，气球不会变小？材料：大口玻璃瓶，吸管两根：红色和绿色、气球一个、气筒操作：1、用改锥事先在瓶盖上打两个孔，在孔上插上两根吸管：红色和绿色2、在红色的吸管上扎上一个气球3、将瓶盖盖在瓶口上4、用气筒打红吸管处将气球打大5、将红色吸管放开气球立刻变小6、用气筒再打红吸管处将气球打大7、迅速捏紧红吸管和绿吸管两个管口8、放开红色吸管口，气球没有变小讲解：当红色吸管松开时，由于气球的橡皮膜收缩，气球也开始收缩。

可是气球体积缩小后，瓶内其他部分的空气体积就扩大了，而绿管是封闭的，结果瓶内空气压力要降低——甚至低于气球内的压力，这时气球不会再继续缩小了。

二、能抓住气球的杯子思考：你会用一个小杯子轻轻倒扣在气球球面上，然后把气球吸起来吗？材料：气球1～2个、塑料杯1～2个、暖水瓶1个、热水少许流程：1、对气球吹气并且绑好2、将热水（约70℃）倒入杯中约多半杯3、热水在杯中停留20秒后，把水倒出来4、立即将杯口紧密地倒扣在气球上5 、轻轻把杯子连同气球一块提起说明：1、杯子直接倒扣在气球上，是无法把气球吸起来的。

2、用热水处理过的杯子，因为杯子内的空气渐渐冷却，压力变小，因此可以把气球吸起来。

延伸：小朋友，请你想一想还有什么办法可以把气球吸起来？三、会吸水的杯子思考：用玻璃杯罩住燃烧中的蜡烛，烛火熄灭后，杯子内有什么变化呢？材料：玻璃杯（比蜡烛高）1个、蜡烛1支、平底盘子1个、打火机1个、水若干操作：1. 点燃蜡烛，在盘子中央滴几滴蜡油，以便固定蜡烛。

2. 在盘子中注入约1厘米高的水。

3. 用玻璃杯倒扣在蜡烛上4. 观察蜡烛燃烧情形以及盘子里水位的变化讲解：1. 玻璃杯里的空气（氧气）被消耗光后，烛火就熄灭了。

2. 烛火熄灭后，杯子里的水位会渐渐上升。

创造：你能用排空的容器自动收集其它溶液吗？四、会吃鸡蛋的瓶子思考：为什么，鸡蛋能从比自己小的瓶子口进去？材料：熟鸡蛋1个、细口瓶1个、纸片若干、火柴1盒操作：1、熟蛋剥去蛋壳。

作业： 1.描述采集标本的症状特点 2.绘图：分离纯化病原菌的形态特征 3.分析孢子分离法和组织分离法的优缺点。
实验四
病原真菌的培养性状 及生长量的测定
植物病害方面，培养真菌的目的主要是观察它 的性状和研究环境条件对它的影响，或者是大量繁 殖后用于接种或其他试验。
真菌生长量的测定主要有（ 1）目力估测；（ 2） 直线生长 ： 测定菌落的半径或直径或者计算菌落 面积； （3）湿重测定：振荡培养后测定菌丝的重量； （4）干重测定：菌丝烘干后测重。
锅菌灭压高动自全
锅菌灭压高动自全
分离工作应 在无菌条件 下进行，无 菌室和超净 工作台是分 离不可缺少 的设施。
2. 组织分离法： 这种方法适用于大部分病菌的分离，以番茄
叶霉病、灰霉病为试材进行： （1）取番茄叶霉病病叶，先用无菌水冲洗干
净。 （2）在病、健交界处剪取 2～3毫米长的病
组织，在70%的酒精中浸 2～3秒种。
亚甲蓝染色法 制备涂片标本 →染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色1min
2.革兰氏染色法（ Gram Stain ）
原理: 第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细
胞壁阻留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的
反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇 脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫 -碘复合物被 阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结 构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫 -碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄 复染后呈红色。

通过转动杯子让里面的球旋转起来。球被离心力压到了瓶壁上，并产生要突破旋转轨道外逃的倾向。如果你转动瓶子时稍微倾斜一些，那么狭窄的玻璃瓶口就能够制止球被甩到外面去。
三.《被缩短的勺子》
准备：勺子、碗、水
平行看一只装满水的水桶水面，将一把勺子垂直插入水中。水中的勺子，一下子就变短了，这是怎么一回事？
这个错觉的产生，主要是因为被插入水中的勺子所反射的光线，不是以直线的方式进入眼帘的。光线在水面上被折射成为一个角度，所以才看到勺子的尖端比实际大大靠上。水域的水由于光的折射，看起来总是比实际深度浅很多。印第安人对这一点就知道得很清楚。他们用箭或矛在水中捕鱼时，总是向更深的地方瞄准。
思考：为什么卡纸变形后，它的承载量会不同
材料：纸卡1张(30×20cm)、相同高的纸盒两个、硬币若干枚
操作：
1、一张卡纸悬空平放在相同高度的纸盒上，纸上只能放两枚硬币。
2、把纸卡折成波浪形状，架在相同高的纸盒上，波浪形状的卡纸上能放多枚硬币。
讲解：波浪的卡纸比平整的卡纸承载的硬币个数多。
创造：怎样变化卡纸，使卡纸上放的硬币更多？
4.玩一玩。让孩子用塑料袋兜空气，然后把口系上，感觉空气的存在。获得经验，初步了解空气的作用。
提示：结合生活中的实例，随时告诉孩子空气的存在与作用。
二.《旋转的玻璃弹球》
准备：玻璃弹球、果酱瓶
把一个玻璃弹球放在桌面上，用一个果酱瓶口朝下把球扣上。你不必把瓶子反过来，就可以随意把瓶中的球移走，这怎么可能呢？
五.《神奇的牙签》
思考：
放在水里的牙签，会随着放在水里的方糖游动，还是随着放在水里的肥皂游动？
材料：
牙签、一盆清水、肥皂、方糖
操作：
1.把牙签小心地放在水面上。
2.把方糖放入水盆中离牙签较远的地方。牙签会向方糖方向移动。