在体大鼠神经

①位于双侧髂前上棘连线大约为L4/5横突后,手术周围5cm范围剃毛,常规消毒皮肤,铺孔巾。

②以大鼠两骸前上脊连线的中点作中线,中线旁往左5mm,在L5-S1水平做一长约2cm的纵行切口,钝性分离皮下组织和椎旁肌肉。

③钝性分离至暴露L6下关节突,充分显露L6横突。

④用刮骨刀将L6横突周围的肌肉和结缔组织清除干净,暴露骨性结构。

⑤用小咬骨钳小心的咬除L6横突,仔细的分离L6横突下的筋膜,暴露下方的L4和L5神经,L4和L5神经以一定的夹角并排行走,通常靠里靠下粗大的神经为L5,操作时避免触碰到L4神经。

（可以先找坐骨神经，3分支时，中间的是坐骨神经，4分支时。

上2是坐骨神经）⑥用玻璃分针将L5神经充分的游离出来,用镊子将6-0铬肠线穿过L5神经并紧紧的打上两个结,在线结远端5mm处将L5神经剪断。

⑦用无菌生理盐水冲洗伤口,充分止血,擦干血渍,确认无活动性出血后,在伤口洒上链霉素粉防止术后伤口感染,逐层缝合伤口。

⑧手术后将大鼠置于温暖干净的鼠笼中苏醒,并给予自由进食和饮水。

⑨假手术组在进行套线后,不结扎剪断神经,其它步骤与手术组完全一样。

每天检查一次后续L5脊神经结扎的第十天,对大鼠行为学测试后,用戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔麻醉。

打开胸腔,暴露其心脏,向左心室插入灌流针管,用止血钳将针管固定。

用憐酸盐缓冲液(O.Olmol/LPBS, pH7.4)冲洗大鼠体内血液。

再用4%多聚甲酸的磷酸盐缓冲液灌流、固定。

待大鼠组织固定后,取脊髓腰膨大节段,放在4%多聚甲醛中4°C冰箱内固定4小时。

后将脊髓转移到30%蔗糖溶液中,4°C冰箱脱水至组织下沉。

用冰冻切片机切片,脊髓厚度为35tim。

切好后将组织贴于载玻片上,放进一2(rc冰箱保存。

用PBS冲洗切片三次,每次7 —10分钟。

然后孵育一抗二抗4.2.1提取脊髓背角上蛋白大鼠断头,取脊髓腰膨大处脊髓背角侧半,保留SNL侧。

然后在装有液氮的碾钵中将组织碾磨成粉末状,移入EP管内,加入蛋白提取试剂,混合均勻放在冰上反应30min。

Y27632对体外培养的大鼠神经干细胞增殖和分化的
影响的开题报告
一、研究背景
神经干细胞是一类具有自我更新和多能分化潜能的细胞。

在生物医
学领域，神经干细胞的应用前景非常广泛，例如可用于治疗神经系统退
行性疾病和中枢神经系统损伤等领域。

因此，提高神经干细胞的增殖和
分化效率是研究的重点之一。

而Y27632是一种针对Rho激酶的抑制剂，具有诱导形态学改变、增强细胞粘附和改变细胞骨架等作用，因此被广
泛应用于细胞培养中。

本研究旨在探究Y27632对于大鼠神经干细胞体外培养的影响。

二、研究内容
1.探究Y27632对大鼠神经干细胞增殖的影响。

选取一定浓度的Y27632加入到大鼠神经干细胞培养基中，采用
MTT法检测细胞增殖情况，观察加入Y27632后神经干细胞增殖程度的变化。

2.探究Y27632对大鼠神经干细胞分化的影响。

将大鼠神经干细胞培养在不同剂量的Y27632培养基中，观察神经干细胞的分化情况，并运用Immunofluorescence染色和实时荧光定量PCR 等技术方法对各细胞类型进行鉴定。

三、研究意义
探究Y27632对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响，能为神经干细胞的体外培养提供新的方法和途径，进一步推进干细胞研究领域的发展。

同时，该研究还能为神经系统疾病和损伤的治疗提供有力的基础研究支持。

实验研究大鼠周围神经损伤后外周血内皮祖细胞动员及相关因子含量变化赵斌，赵志虎，骆巍，马剑雄，马信龙△摘要：目的　探讨大鼠周围神经损伤（PNI）后外周血内皮祖细胞（EPCs）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平变化及EPCs与其他指标的相关性。

方法　42只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、PNI 1 d组、PNI 3 d组、PNI 5 d组、PNI 7 d组及PNI 14 d组，每组7只，除对照组外其余组均采用钳夹法建立坐骨神经损伤模型。

对每组在预定时间点采用活体心脏穿刺法采血；采用Ficoll密度梯度离心法提取单个核细胞，CD34和CD133双阳性细胞标记EPCs，应用流式细胞仪检测各组EPCs数量。

采用酶联免疫吸附试验检测各组外周血bFGF、VEGF及MMP-9含量，分析EPCs数量与bFGF、VEGF、MMP-9水平的相关性。

结果　与对照组相比，PNI 3 d组、PNI 5 d组、PNI 7 d组外周血EPCs数量升高，PNI 3 d组、PNI 5 d组、PNI 7 d组及PNI 14 d组外周血bFGF含量升高，其余各组外周血VEGF含量升高，PNI 5 d组、PNI 7 d组及PNI 14 d组外周血MMP-9含量升高（P＜0.05）。

PNI 5 d组和PNI 7 d组外周血EPCs数量与血清bFGF水平呈正相关（r分别为0.784和0.788，P＜0.05），与血清VEGF水平呈正相关（r分别为0.889和0.852，P＜0.05）；PNI 5 d组、PNI 7 d组和PNI 14 d组外周血EPCs数量与血清MMP-9水平呈正相关（r分别为0.788、0.852和0.873，P＜0.05）。

结论　EPCs与bFGF、VEGF和MMP-9共同参与了PNI后血供修复的病理生理过程。

关键词：周围神经损伤；坐骨神经；内皮祖细胞；基质金属蛋白酶9；血管内皮生长因子；碱性成纤维细胞生长因子中图分类号：R651.3 文献标志码：A DOI：10.11958/20231111Changes in peripheral blood endothelial progenitor cell mobilization and related factors afterperipheral nerve injury in ratsZHAO Bin, ZHAO Zhihu, LUO Wei, MA Jianxiong, MA Xinlong△Digital Orthopedic Technology Clinical Application Center, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China△Corresponding Author　E-mail:**********************Abstract: Objective　To study changes and correlation of peripheral bold endothelial progenitor cells (EPCs) and serum bFGF, VEGF and MMP-9 in rats with peripheral nerve injury (PNI). Methods　Forty-two SD rats were divided into the control group, the PNI 1 d group, the PNI 3 d group, the PNI 5 d group, the PNI 7 d group and the PNI 14 d group according to random number table method, with 7 rats in each group. The sciatic nerve injury model was established in all groups except the control group. In each group, blood samples were collected by living heart puncture at a predetermined time point. Mononuclear cells were extracted by Ficoll density gradient centrifugation. CD34 and CD133 double positive cells were labeled with EPCs, and the number of EPCs in each group was detected by flow cytometry. The contents of bFGF, VEGF and MMP-9 in peripheral blood of each group were detected by enzyme-linked immunosorbent assay, and the correlation between the number of EPCs and bFGF, VEGF and MMP-9 was analyzed. Results　Compared with the control group, EPCs in peripheral blood were increased in the PNI 3 d group, the PNI 5 d group and PNI 7 d group. bFGF contents in peripheral blood were increased in the PNI 3 d group, the PNI 5 d group, the PNI 7 d group and the PNI 14 d group, and VEGF contents in peripheral blood were increased in the other groups. The content of MMP-9 in peripheral blood was increased in the PNI 5 d group, the PNI 7 d group and the PNI 14 d group (P＜0.05). The number of EPCs in peripheral blood in the PNI 5 d group and the PNI 7 d group was positively correlated with serum bFGF level (r=0.784 and 0.788, P＜0.05) and serum VEGF level (r=0.889 and 0.852, P＜0.05). The number of EPCs in peripheral blood of the PNI 5 d group, the PNI 7 d group and the PNI 14 d group was positively correlated with serum MMP-9 level (r=0.788, 0.852 and 0.873, P＜0.05), and it was positively correlated with serum VEGF level (r=0.889 and 0.852, P＜0.05). The number of EPCs in 基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（81501061）；天津市卫生健康行业高层次人才选拔培养工程-青年医学新锐（TJSQNYXXR-D2-136）；天津市卫生健康科研项目（TJWJ2023QN049） 作者单位：天津市天津医院数字骨科技术临床应用中心（邮编300211） 作者简介：赵斌（1988），男，副主任医师，主要从事骨科及周围神经损伤修复方面研究。

大鼠在体尾神经传导速度的检测方法的论文大鼠在体尾神经传导速度的检测方法的论文【摘要】目的：探讨大鼠在体尾神经传导速度的测定方法。

方法：麻醉后固定大鼠，清洁脱脂尾部，使用神经肌电图诱发电位仪，测定大鼠尾神经的传导速度。

结果：正常大鼠尾神经传导速度约为60.8m/s。

结论：本方法测定大鼠在体尾神经传导速度简便、快捷和可靠。

【关键词】大鼠；尾神经；传导速度；检测方法神经传导速度测定因为具有客观、敏感、精确性高和重复性好等优点，所以在现代临床及法医鉴定中广泛应用。

在动物实验中，应用运动或感觉神经传导速度和远端潜伏时间等指标可以综合评价各类慢性疾病、药物、毒物等导致的外周神经损害状况[1]。

目前，在以大鼠为对象的神经损伤研究中，大多采用创伤性的坐骨神经电生理检查[2]，此方法受到的影响因素多，结果变异大，而且不能动态观察。

为此，本实验探索直接测定大鼠尾神经传导速度的方法，为连续动态观察神经损伤建立一种基础实验方法。

1 材料和方法 1.1实验动物与材料4月龄雄性wistar大鼠，一级，体质量(300±25)g，四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：scxk(川)2004-15。

戊巴比妥钠（sigma），nd－400多导联神经肌电诱发电位仪（上海，海神）。

1.2方法实验选取6只大鼠，用1%戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉[3]，然后将大鼠俯卧位固定，保持电磁屏蔽室内温度25℃。

温水清洁大鼠尾部皮肤后，95%乙醇脱酯处理。

用涂有导电糊的弹簧金属环电极作为刺激电极套在大鼠尾部近端，记录用铂针电极插入鼠尾部远端肌肉中，靠近侧面尾静脉处，参考电极放置鼠尾远端，距记录电极约2cm处，接地电极放置刺激电极和记录电极间（图1，2所示）。

参数选择：刺激脉冲波宽0.1ms，刺激频率2hz，灵敏度0.2mv/cm，时程3ms/cm，滤波带通[30，2000hz]。

刺激从小开始，逐渐增加刺激强度，记录到最大稳定复合动作电位图形时接收波形，测定刺激电极距记录电极的距离并输入仪器，尾神经传导速度的结果将自动计算并显示。

大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察大鼠脊髓背根神经节（DRG）是感觉神经元的主要来源，内部存在着神经前体细胞。

这些细胞不仅具有分化为神经元的能力，还有一定的自我更新和再生能力。

因此，细胞生物学家们对大鼠DRG内神经前体细胞的观察十分关注，并期待能够通过对其进行深入研究，不仅了解神经类肿瘤和神经退行性疾病的发生机制，而且希望能够利用这些细胞为神经系统疾病的治疗提供新思路。

首先，大鼠DRG内神经前体细胞的来源和成分十分复杂。

这些神经前体细胞既有神经干细胞，也有神经前体细胞，细胞形态各异，可以分为大小、形状以及染色性质不同的细胞类型。

在活体的观测中，DRG内神经前体细胞常常呈现出“鱼鳞状排列”的现象，形成了独特的细胞结构。

这种观察所得数据，为研究神经退行性疾病的治疗提供了重要的参考信息。

其次，研究人员在细胞培养过程中，发现大鼠DRG内神经前体细胞的分化过程可以被不同的细胞因子和基因调控。

这些因素和基因以不同的方式影响着神经前体细胞的命运，例如维生素A酸、衍生物1类、神经生长因子等物质都能够诱导DRG内神经前体细胞向神经元的方向分化发展。

同时，研究人员还发现，神经系统发育过程中的一些信号途径，例如Wnt、Shh和Nodal等，也能够对神经前体细胞的分化起到调控作用。

无论在体内还是体外的情况下，这些调控因素对DRG内神经前体细胞的影响表现出了显著的效果。

因此，研究DRG内神经前体细胞分化的因素，可为神经系统疾病特别是神经类肿瘤的治疗提供新的策略。

最后，大鼠DRG内神经前体细胞在神经系统衰退性疾病的治疗中具有很大的潜力。

当前很多神经退行性疾病，所造成的背景环境的恶化对于这种病因有着重要的作用，在这样的病因环境下，DRG内神经前体细胞的再生能力很差，难以治疗。

但是，在特定的微环境下，这些细胞具有一定的自我修复能力，亦可通过移植方式调整周围的环境来保证其正常分化。

当前的一些实验表明，如果通过移植方式将DRG内神经前体细胞与一些适当的细胞因子和置换为正常化环境，这些细胞就能重新发挥出分化为神经元的能力，有效地治疗与神经系统细胞死亡有关的疾病。