高效液相色谱法测定血浆中儿茶酚胺

儿茶酚胺检查方法

儿茶酚胺（catecholamine）是指一类含有羟基化苯环的生物活性物质，包括肾上腺素（epinephrine）、去甲肾上腺素（norepinephrine）和多巴胺（dopamine）。儿茶酚胺在人体内的分泌和代谢异常与多种疾病有关，如高血压、心血管疾病、精神障碍等。因此，检查儿茶酚胺的水平可以作为疾病诊断和治疗的重要指标。目前常用的方法包括高效液相色谱法、放免法以及气相色谱法等。

高效液相色谱法是目前儿茶酚胺检查的主要方法之一。该方法基于儿茶酚胺具有发光性质，通过将样品与荧光标记的试剂一起注入液相色谱仪中，分离出儿茶酚胺，然后在荧光检测器中检测它们的发光信号，从而确定儿茶酚胺的水平。这种方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，被广泛用于生物学研究和临床诊断。

放免法是另一种常用于儿茶酚胺检查的方法。它基于儿茶酚胺与特异性抗体之间的免疫反应，通过将样品与标记有酶、荧光物质或放射性同位素的抗体一起进行反应，然后通过测定其酶活性、荧光强度或放射性来确定儿茶酚胺的水平。适用于临床实验室常规检测的优势之一是可同时检测多种儿茶酚胺，如肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等，具有高灵敏度和高特异性。

气相色谱法是一种分离和测定儿茶酚胺的有效方法。该方法基于儿茶酚胺的挥发性，通过样品的蒸发和在气相色谱柱中的分离，再经过检测器检测其峰的形成来定量测定儿茶酚胺的水平。由于气相色谱法具有高分辨率和定量精度高的特点，被广泛应用于临床和研究领域。

需要注意的是，儿茶酚胺的检查方法需要特殊的样品制备步骤。首先，需要选择合适的采样时间和方式，通常在早上或者剧烈运动后采集血液样品，以获得较高的儿茶酚胺水平。其次，应尽量避免外部因素的影响，如戒除儿茶酚胺类药物、停止运动、戒烟等。在采样后的处理过程中，要密封保存样品以防止儿茶酚胺的分解和损失。此外，在检测前，还需要根据具体的检查方法准备样品，如提取、净化等。

讲座

高效液相色谱在生物医药研究中的应用

第七讲生物胺的分离和测定（上）—儿茶酚胺、５－羟基色胺

及其代谢产物的分离和测定

唐琴梅

（中国科学院上海药物研究所，２０００３１

生物胺是机体代谢反应过程中所产生的胺类化

合物，其中研究得较多的有两类：神经递质儿茶酚胺

ＣＡ）和５－羟基色胺（５－ＨＴ，以及多胺。ＣＡ和５－ＨＴ的功能与人们的健康和疾病有密切的关系，它们不仅

直接参与行为活动（如运动功能、学习记忆等）以及参

与血压、心率、呼吸和睡眠等植物神经功能的调控，还与一些功能性疾病如精神分裂症、忧郁症以及器质性

病变（如巴金森氏综合症、心血管性疾病等）的出现有关，某些肿瘤如神经母细胞瘤及嗜铬细胞也会导致Ｃ的异常代谢。多胺则与细胞增殖有关，并发现肿

瘤病人尿液中的多胺含量增加，因此生物胺及其代谢产物的测定对疾病的诊断、治疗以及药物研究都有重

要意义。

表７－１儿茶酚胺、５－ＨＴ及其主要代谢产物的名称及缩写名

近年来由于ＨＰＬＣ技术的不断发展，用ＨＰＬＣ分

离测定体液和组织中生物胺的方法完善，检测灵敏度可达ｐｍｏｌ水平。

７－１　ＣＡ和５－ＨＴ及其代谢产物的分离

ＣＡ是具有氨基和酚经基的极性化合物，表１为ＣＡ和５－ＨＴ及其主要代谢产物的名称和结构，它们

的分离可采用阳离子交换色谱、反相色谱和反相离子对色谱。

１．阳离子交换色谱阳离子交换色谱是利用儿

茶酚胺的氨基进行离子交换，因此它主要用于儿茶酚胺的分离，也可用于分离带氨基的代谢产物１－５ＣＡ

的酸性代谢产物在阳离子交换柱上没有保留，因此它

不能同时分离酸性和中性代谢产物。２．反相色谱一般用于分离中性或非极性化合

物，ＣＡ５－ＨＴ及其酸性代谢产物都是极性化合物，因

此在反相色谱中保留时间较短，容易受生物样本中非

保留物的干扰。但ＣＡ在柱前荧光衍生时的荧光衍生

产物极性大为降低，可以用反相色谱分离６－８。酸性

代谢产物则可以通过调节流动相的ｐＨ改变其保留

值，在低ｐＨ时通过离子抑制作用延长其保留时

间９－１３。所以反相色谱一般适合于ＣＡ的柱前荧光衍生物及其代谢产物的测定。但也有通过梯度洗脱来

高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺

多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。

高效液相色谱法（high performance liquid

chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。

衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。这些试剂可用于尿样和一些经提纯的组织样品中的儿茶酚胺类物质的测定，但对血浆中CAs的测定灵敏度较低。

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液相色谱串联电化学检测器测定人体血浆和尿液儿茶酚胺浓度

作者：王玲 阳愿望

来源：《现代养生·下半月》2015年第12期

【摘要】目的：建立一种简便、快速、灵敏、准确的测定人体血浆、尿中儿茶酚胺的方法，为临床检测和研究提供技术支持。方法：采用活性氧化铝（AL2O3）对血浆和尿液标本中的儿荼酚胺进行酸解吸附、净化，利用离子对反相高效液相色谱串联电化学检测器法（RP-HPLC-ECD）对其测定，工作电压+0.80V，灵敏度50nA，以外标法定量。结果：去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺分离良好，出峰时间分别为8分钟、9分钟、11分钟，且不受体内其他内源性物质及代谢物干扰。样本在2.0-100ng/ml浓度范围内有良好线性关系，分离参数R≥1.5，其方法绝（相）对回收率分别为82.5-104.4%、83.4-100.7%、77.0-91.8%，最低检测浓度1.0ng/ml。结论：RP-HPLC-ECD检测人体血浆、尿中儿茶酚胺具有操作简便，分析快速，特异性高，重复性好的优点。

【关键词】儿茶酚胺；反相高效液相色谱；嗜铬细胞瘤

单胺类神经递质儿茶酚胺类（Catecholamines，CAs）化合物，主要包括去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）。它是人类中枢神经重要的信息传递物质，不仅直接参与植物神经功能的调控，还与许多功能型疾病有关。血浆和尿液中的CAs含量不但可作为嗜铬细胞瘤的诊断依据，而且可应用于其他与儿茶酚胺有关疾病的研究，对研究这类神经递质的生理功能及其代谢变化具有重要意义。传统的荧光法与放射免疫测定法（Radio-immunassay，RIA），气相色谱法（GC），或步骤繁琐，或价格昂贵不易实现。由于电化学检测器的高灵敏度，使该类化合物体内微量分析得以应用。本文建立的RP-HPLC-ECD测定人体血浆及尿中的儿茶酚胺，具有方法简单，快速，专一，在应用中重复性较好，适用于临床测定及研究人体内儿茶酚胺的代谢分析。