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初始污染菌检验规程初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3生物负载测定方法A.1概要A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。
初始污染菌检验规程产品初始污染菌1、目的检测清洗包装后的产品初始污染菌是否符合要求2、适用范围适用于需灭菌产品清洗、包装后的检验3、检验依据EN1174-1996医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估GB14233。
2-1993医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准GB7918。
2-1987化妆品微生物标准检测方法:细菌总数测定4、仪器、设备细菌培养箱、洁净工作台、电子天平、PH计、压力蒸汽灭菌器、4。
C冰箱。
酒精灯、3000ml的三角烧瓶，无菌棉签，无菌镊子，试管架，9mm细菌养皿，放大镜。
5、检验方法5(1普通肉汤琼脂培养基的制备5(1(1所用试剂胨10g氯化钠5g琼脂15-20g肉浸液1000ml5(1(2制备取牛肉浸膏3 g加水1000 ml，配成肉浸液。
将胨、氯化钠、琼脂加入肉浸液中，加热溶解，调节PH为7。
2，置入压力蒸汽灭菌器内，灭菌后于超净工作台内装在9 mm的细菌培养皿中(15-20ml/每个平皿)，于4。
C保存备用。
5(2抽样从每个清洗批次的产品中随机抽样。
同一批次产品数<50件，抽取3件;同一批次产品数为50~100件，抽取5件;同一批次产品数>100件，抽取10件。
5(3取样于微生物实验室超净工作台内，将浸有无菌生理盐水的无菌棉签在检品的外表面依次擦拭，然后用无菌镊子将棉签上的棉球取下，放入含有1ml无菌生理盐水试管内振摇数次，静止5分钟，即获得擦拭棉球浸提液;以同样的方法擦拭检品内表面。
获取检品内表面擦拭棉球浸提液。
5(4接种将上述检品内、外表面擦拭棉球浸提液倒入普通肉汤琼脂平板，水平旋摇使之均匀布在培养皿表面，在超净止放置至培养皿表面浸液十后进入下一步操作。
5(5培养接种后的培养皿倒置于细菌培养箱中，以未接种肉汤琼脂培养基为阴性对照，以金黄色葡萄球菌(北京生物制品检定所)作阳对照，37。
C培养48暗时后观察结果。
初始污染菌检验规程1.目的：制订初始污染菌检验规程，对从事检测的操作人员进行培训指导按检测规程操作。
2.范围：本方法适用于一次性使用无菌医疗器械灭菌前染菌量的检测。
3.术语和定义：无4.职责：质量部负责实施。
5.内容：5.1仪器电子天平、电热恒温干燥箱、净化工作台、压力蒸汽灭菌器、电热恒温水浴锅、恒温培养箱、电炉。
5.2器具烧杯、量筒、三角瓶(带硅胶塞)、试管(带硅胶塞)、酒精灯、手术剪刀、培养皿、刻度吸管、薄膜过滤器5.3 培养基、试剂：胰酪大豆胨琼脂培养基、无菌生理盐水5.4 试验前的准备5.4.1胰酪大豆胨琼脂培养基的制备：按产品说明书进行配制、灭菌，供细菌培养记数用。
5.4.2 无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液）的制备：a．配制：称取9.0g氯化钠加入蒸馏水溶解使成1000ml。
b. 分装：分装于试管中，装量不得超过试管容量的2/3，盖上硅胶塞，包好。
c．灭菌：121℃20分钟高压灭菌。
5.5 取样方式a）灭菌前随机抽取样品；b）抽取不适于销售的产品，如废料或不合格品（即已经过各关键工序的生产过程阶段（包括清洗和包装过程）的产品）；c）初包装材料可用无菌手续取样随即取10套/件（卷料无菌手续取100cm2）。
注:以上方式可根据产品具体情况择其一操作；5.6 取样频率当月生产各产品至少抽取一批次；每批来料初包装材料最少抽取一次。
5.7 试验步骤5.7.1 消毒：将待检的产品外包装用酒精棉擦拭后，放于经擦拭的垂直式超净工作台面，紫外灯照射0.5小时以上。
5.7.2 供试液的制备：按无菌操作法制备供试液，制备后应在2小时内进行检测；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
5.7.3用无菌注射器吸取10～100ml无菌生理盐水，注入样品管内往返振荡5次；外部用无菌注射器吸取10～100ml无菌生理盐水冲洗管壁；内外壁如此各重复二到三次。
分别将供试液注入无菌容器中，分别检测。
5.7.4 以上制备的供试液直接或稀释后采用薄膜过滤法、平板计数（平皿法）或其他适宜方法进行分析检查。
1、目的通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。
2、范围本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。
3、依据GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典2010版第二部GB 8368 一次性使用输液器GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准4、要求灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。
5 检验方法5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制：成份：蛋白胨 20 g牛肉膏药 3 g氯化钠 5 g琼脂 15 g卵磷脂肪 1 g吐温80 7 g蒸馏水 1000 g制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
5.3 供试液制备5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1：10的供试液。
5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1：10的供试液。
5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。
起草人/日期 审核人/日期批准人/日期 分发部门 品质部1、目的检测产品灭菌前实际带菌（活的微生物群）的数目。
2、适用范围适用于本公司产品初始污染菌的检测。
3、职责由品管部负责执行实施。
4、检测程序4.1检验频次：车间生产的产品三个月做一次初始污染菌检验，至少抽取3个批次进行检测，对不同车间和材质的产品进行轮流循环抽样。
标准作业规程标准要求4.2取样方法4.3试验方法4.3.1配制洗脱液4.3.1.1称量4.3.1.2溶解4.3.1.3洗脱液分装用电子太平准确称取9gNaCl 。
用灭菌镊子于同一个批次三个大包装（三个以上员工的产品）中至少随机抽取90g 或抽取12个最小销售包装样品，1/3样品用于检测,1/3样品用于留样，另1/3样品(可就地封存)必要时用于复检。
装入无菌的塑料袋中，立即密封好（塑料袋上应标示产品的生产日期、定单编号、规格、生产车间、员工姓名、产品代号）并立即送检，送检中不得打开塑料袋，三分之一用于测试，三分之一用于留样，三分之一必要复试。
样品最小包装不应有破损,检验前不得开启。
将已称好9gNaCl 溶于1000ml 蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解。
4.3.1.4洗脱液灭菌4.3.2样品处理4.3.2.1样品制备4.3.2.2 样品混匀4.3.2.3吸取样液4.3.2.4平板倾注法称取9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中,然后用锥形瓶分装，每瓶100ml（可以根据实验的需要分装不同体积的液体）。
在 100 级净化工作台条件下用无菌方法打开用于检测的至少3个包装，从每个包装中随机取样，准确称取l0g土1g样品.用灭菌剪刀和镊子把样品剪碎.样品剪碎后用灭菌镊子加入到100ml的洗脱溶液中，将装有样品的锥形瓶靠压在旋涡混合器上的施转垫上振荡（2800次/min）2min。
如被检样品是吸水量较高的材料而导致不能吸出足够样液时，洗脱液量可按每次50ml,递增，直至能吸出足够测试在无菌操作台中，待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液,用灭菌移液管从锥形瓶中吸取1ml样品的洗脱液转移到无菌平皿。
