医疗器械的无菌和初始污染菌检验

初始污染菌检验规程初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。

2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。

4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。

2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。

2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。

3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。

阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。

制备2个平板均不得有菌生长。

3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。

2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。

编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。

第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。

2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。

3生物负载测定方法A.1概要A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。

初始污染菌检验规程产品初始污染菌1、目的检测清洗包装后的产品初始污染菌是否符合要求2、适用范围适用于需灭菌产品清洗、包装后的检验3、检验依据EN1174-1996医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估GB14233。

2-1993医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准GB7918。

2-1987化妆品微生物标准检测方法:细菌总数测定4、仪器、设备细菌培养箱、洁净工作台、电子天平、PH计、压力蒸汽灭菌器、4。

C冰箱。

酒精灯、3000ml的三角烧瓶，无菌棉签，无菌镊子，试管架，9mm细菌养皿，放大镜。

5、检验方法5(1普通肉汤琼脂培养基的制备5(1(1所用试剂胨10g氯化钠5g琼脂15-20g肉浸液1000ml5(1(2制备取牛肉浸膏3 g加水1000 ml，配成肉浸液。

将胨、氯化钠、琼脂加入肉浸液中，加热溶解，调节PH为7。

2，置入压力蒸汽灭菌器内，灭菌后于超净工作台内装在9 mm的细菌培养皿中(15-20ml/每个平皿)，于4。

C保存备用。

5(2抽样从每个清洗批次的产品中随机抽样。

同一批次产品数<50件，抽取3件;同一批次产品数为50~100件，抽取5件;同一批次产品数>100件，抽取10件。

5(3取样于微生物实验室超净工作台内，将浸有无菌生理盐水的无菌棉签在检品的外表面依次擦拭，然后用无菌镊子将棉签上的棉球取下，放入含有1ml无菌生理盐水试管内振摇数次，静止5分钟，即获得擦拭棉球浸提液;以同样的方法擦拭检品内表面。

获取检品内表面擦拭棉球浸提液。

5(4接种将上述检品内、外表面擦拭棉球浸提液倒入普通肉汤琼脂平板，水平旋摇使之均匀布在培养皿表面，在超净止放置至培养皿表面浸液十后进入下一步操作。

5(5培养接种后的培养皿倒置于细菌培养箱中，以未接种肉汤琼脂培养基为阴性对照，以金黄色葡萄球菌(北京生物制品检定所)作阳对照，37。

C培养48暗时后观察结果。

初始污染菌检验规程1.目的：制订初始污染菌检验规程，对从事检测的操作人员进行培训指导按检测规程操作。

2.范围：本方法适用于一次性使用无菌医疗器械灭菌前染菌量的检测。

3.术语和定义：无4.职责：质量部负责实施。

5.内容：5.1仪器电子天平、电热恒温干燥箱、净化工作台、压力蒸汽灭菌器、电热恒温水浴锅、恒温培养箱、电炉。

5.2器具烧杯、量筒、三角瓶(带硅胶塞)、试管(带硅胶塞)、酒精灯、手术剪刀、培养皿、刻度吸管、薄膜过滤器5.3 培养基、试剂：胰酪大豆胨琼脂培养基、无菌生理盐水5.4 试验前的准备5.4.1胰酪大豆胨琼脂培养基的制备：按产品说明书进行配制、灭菌，供细菌培养记数用。

5.4.2 无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液）的制备：a．配制：称取9.0g氯化钠加入蒸馏水溶解使成1000ml。

b. 分装：分装于试管中，装量不得超过试管容量的2/3，盖上硅胶塞，包好。

c．灭菌：121℃20分钟高压灭菌。

5.5 取样方式a）灭菌前随机抽取样品；b）抽取不适于销售的产品，如废料或不合格品（即已经过各关键工序的生产过程阶段（包括清洗和包装过程）的产品）；c）初包装材料可用无菌手续取样随即取10套/件（卷料无菌手续取100cm2）。

注:以上方式可根据产品具体情况择其一操作；5.6 取样频率当月生产各产品至少抽取一批次；每批来料初包装材料最少抽取一次。

5.7 试验步骤5.7.1 消毒：将待检的产品外包装用酒精棉擦拭后，放于经擦拭的垂直式超净工作台面，紫外灯照射0.5小时以上。

5.7.2 供试液的制备：按无菌操作法制备供试液，制备后应在2小时内进行检测；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。

5.7.3用无菌注射器吸取10～100ml无菌生理盐水，注入样品管内往返振荡5次；外部用无菌注射器吸取10～100ml无菌生理盐水冲洗管壁；内外壁如此各重复二到三次。

分别将供试液注入无菌容器中，分别检测。

5.7.4 以上制备的供试液直接或稀释后采用薄膜过滤法、平板计数（平皿法）或其他适宜方法进行分析检查。

1、目的通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。

2、范围本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。

3、依据GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典2010版第二部GB 8368 一次性使用输液器GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准4、要求灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。

5 检验方法5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制：成份：蛋白胨 20 g牛肉膏药 3 g氯化钠 5 g琼脂 15 g卵磷脂肪 1 g吐温80 7 g蒸馏水 1000 g制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。

加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。

5.3 供试液制备5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。

作为1：10的供试液。

5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。

作为1：10的供试液。

5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。

医疗器械产品委托灭菌方式要求根据我市医疗器械生产企业和产品实际情况，无菌或消毒级产品通常采用环氧乙烷（EO）灭菌或钴60（Co60）辐照灭菌，且大多数产品采用委托灭菌的方式。

对于采用EO灭菌的，全部灭菌过程包含的活动主要有：1.灭菌验证、灭菌确认；2.初始污染菌检测；3.灭菌；4.无菌检测；5.产品解析；6.EO残留量检测；7.热原检测（如有）；8.产品的交付与接收。

对于采用Co60灭菌的，全部灭菌过程包含的活动主要有：1.灭菌验证、灭菌确认；2.初始污染菌检测；3.灭菌；4.无菌检测；5.热原检测（如有）；6.产品的交付与接收。

产品委托灭菌方式大体归纳为以下几种情况：1.委托方自己进行产品初始污染菌检测、无菌检测、EO残留量检测（如有）、热原检测（如有），仅将产品灭菌、产品解析（如有）工作进行委托。

这种情况下，委托方签订的是一份委托灭菌协议。

2.委托方将产品灭菌、产品解析（如有）、初始污染菌检测、无菌检测、EO残留量检测（如有）等工作全部委托一家企业完成。

这种情况下，委托方签订的也是一份委托灭菌协议，但其中会包括委托产品检测的内容。

3.委托方将产品灭菌、产品解析（如有）工作委托一家企业完成，将产品初始污染菌检测、无菌检测、EO残留量检测（如有）等工作委托另一家企业完成。

这种情况下，委托方签订的是一份委托灭菌协议和一份委托产品检测的协议。

在以上几种主要情况之外，还存在委托方将产品灭菌、无菌检测、EO残留量检测（如有）分别委托给不同的企业的情况；也存在对于同一个注册产品，既采用EO灭菌也采用Co60辐照灭菌，从而同时签订两份委托灭菌协议的情况。

为了更好地控制产品灭菌过程，提高产品委托灭菌的保证水平，规范企业委托灭菌的行为，针对以上的灭菌方式和过程，现特提出以下要求。

一、对委托双方基本要求的审查（一）双方均应是能够承担独立法律责任的法人主体；（二）委托方作为产品上市的法律责任主体，应充分了解产品灭菌所带来的风险，应充分掌握产品灭菌的适宜方法和控制过程，应充分掌握相关检测项目的检测方法和技术要求；（三）双方应签订委托灭菌或委托检测协议（合同）；（四）对于委托灭菌的1.委托方应在充分考虑产品本身、产品包装物等因素的情况下，选择适宜的灭菌方法；应制订对受托灭菌企业资质和能力进行评审的文件，并保有相关记录；2. 委托方应与受托方共同对委托灭菌产品的灭菌过程进行确认，并保有相关记录；需要时，应对灭菌过程进行再确认，并保有相关记录；3.受托方应具备所承担委托灭菌产品的能力，并保有相关灭菌记录；通常情况下受托方应将相关灭菌记录复印件交与委托方留存。

质量管理验证文件产品和原材料初始污染菌计数法验证方案编制：审核：批准：发布日期：年月日2222222222有限公司目录1基本情况2验证目的3验证方案编制依据4验证小组5验证方案6验证记录和报告附件：验证相关表单一览表1 / 171 基本情况初始污染菌数量表示医疗器械产品最终灭菌前的生物负载，用以检验医疗器械产品生产过程初始污染菌控制效果以及最终产品组成部分的相关外购件（如：初包装等）微生物总数，证明灭菌前产品微生物水平是否在确认的保证产品无菌的环氧乙烷灭菌工艺可控制接受范围内，保证医疗器械产品的热原和细菌内毒素生物指标满足产品技术要求，所以确定医疗器械产品初始污染菌洗脱培养计数检验方法的适宜性和准确性尤为重要。

基于YY/T 0287-2017《医疗器械质量管理体系用于法规的要求》“6.4.2污染控制”、“7.5.2产品的清洁”对医疗器械生产、储存、灭菌前过程产品清洁或污染控制要求，以及《医疗器械生产质量管理规范附录无菌医疗器械》第“2.5.3”和“2.7.4”条规定的医疗器械和原材料初始污染菌控制要求，必须对医疗器械产品原材料、待灭菌产品的初始污染菌进行检验和管控，为保证一次性使用输液器（带针）、一次性使用袋式输液器（带针）、一次性使用精密过滤输液器（带针）、一次性使用自动截流输液器（带针）、一次性使用无菌注射器（带针）、一次性使用无菌溶药注射器（带针）、一次性使用静脉输液针、一次性使用无菌注射针、一次性使用静脉采血针、一次性使用无菌阴道扩张器、一次性使用预引式气管导管异型套件、三腔胃管产品及产品原材料（包含产品初包装、橡胶活塞、注射针、输液针、针管、精密药液过滤器、乳胶帽、硅胶垫）的初始污染菌洗脱检验方法的正确适宜性和微生物培养计数准确性，确定用于补偿无法从医疗器械产品和原材料中完全采集培养计数微生物数值的修正系数，现制定产品和原材料初始污染菌计数法验证方案。

2 验证目的将确定数量微生物接种到经灭菌处理的原材料、医疗器械产品外表面和（或）内腔，形成人工生物负载，依据原材料和医疗器械产品的结构特点，在袋蠕动、震摇、冲洗、搅拌、碎裂等微生物采集方法中，选择能充分收集原材料和医疗器械产品外表面和（或）内腔微生物，且对原材料和医疗器械产品不产生降解、溶出等分解化学反应的适宜的采集方法，对接种于原材料、医疗器械产品外表面和（或）内腔的微生物进行采集，通过采集液薄膜过滤，对滤膜进行培养，点计原材料、医疗器械产品外表面和（或）内腔收集的微生物数量，同时分别对原材料、医疗器械产品的微生物采集、微生物培养、微生物计数法完整检验方法的适宜性和准确性进行验证，汇总验证过程记录数据计算并确定原材料、医疗器械产品外表面和（或）内腔初始污染菌回收修正系数，为制定原材料、医疗器械产品初始污染菌采集培养计数方法提供正确依据。

初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。

2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。

4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。

2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。

2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。

3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。

阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。

制备2个平板均不得有菌生长。

3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。

2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。

编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。

第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。

2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。

3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。

初始污染菌检验操作规程方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。

每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。

4.6.3结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。

若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。

初始污染菌检验操作规程目的：本规程的目的是为了测定样品细菌总数，以判断样品细菌污染的程度，并评估生产单位的卫生状况，为下一步的灭菌提供参考依据。

适用范围：本规程适用于所有需要消毒灭菌前的产品和洁净车间。

作业条件：1.无菌检测需要在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。

2.超净台及工作台面必须进行洁净度验证。

作业方法与步骤：1.制作营养琼脂培养基，并按要求培养16-18小时后，检查无菌生长方可使用。

2.进行无菌室洁净度验证。

3.进行产品采集与样品处理，制备供试液。

4.进行供试液的10倍递减稀释。

5.进行接种检验。

6.进行培养。

结果与判定：1.计数方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。

每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。

2.结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。

若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。

菌落计数是食品微生物学检验中常用的方法之一。

在进行菌落计数时，需要注意以下基本规则。

首先，不宜采用菌落层片状生长的平板。

其次，计数符合要求的平板上的菌落，按照公式计算结果。

具体而言，菌数除以每件次（或g）的重量，等于件次或重量（g）。

选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。

如果只有一个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数进行报告。

初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。

2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。

4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。

2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。

2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。

3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。

阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。

制备2个平板均不得有菌生长。

3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。

2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。

编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。

第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。

2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。

3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。

初始污染菌实验方法验证在生命科学领域，微生物污染在实验中是一个非常普遍的问题。

不仅会影响实验结果的准确性和可靠性，还会影响重要的生产过程。

因此，为了保证实验的成功，必须开发出一种可靠的方法来验证实验室中的物品是否存在微生物污染。

本文将介绍一种简单的方法来验证初始污染菌。

必备材料•无菌纯水•Tryptic Soy Broth（TSB）•青霉素和链霉素组合液•离心管•移液器•微量移液器步骤步骤一：制备TSB培养基取适量的TSB培养基，按照说明书的指示加入适量的无菌纯水，在无菌条件下进行混合并调整pH值至7.2-7.4。

步骤二：检查无菌水和青霉素和链霉素组合液的无菌性取适量的无菌纯水和青霉素和链霉素组合液，并在15ml的离心管中进行热处理。

在121℃下进行30分钟烘烤。

热处理之后，检查管子是否依然无菌。

步骤三：制备初始污染菌样品选取一种已知的细菌菌株，并放入无菌纯水的250ml Erlenmeyer三角瓶中，密封好瓶口，并在温育箱中以37℃的恒温培养24小时，制备出初始污染菌样品。

步骤四：制备验证菌液取一定量的TSB培养基，加入青霉素和链霉素组合液（最终浓度为10ug/ml），并进行热处理，待培养基冷却后，取一定量的初始污染菌样品用微量移液器加入到青霉素和链霉素培养基中，制备出验证菌液。

步骤五：分配验证菌液将验证菌液分别加入到无菌纯水的离心管中，接种量为1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml、0.0001ml等不同容量，序列号编好，每种容量配制三个重复。

这些离心管可在30℃下进行24小时的培养，检查有无微生物的生长。

步骤六：观察结果观察离心管培养基中有无微生物的生长。

如果所有序列号中均无微生物的生长，即可认为实验室物品无微生物污染，反之则有微生物污染。

初始污染菌实验方法验证可以有效地检查实验室物品中的微生物污染情况。

它易于操作，实验过程简单明了，并且针对不同容量的接种进行了细致的设计，以检查有无微生物生长。