各生理指标的测定方法

1丙二醛〔MDA〕含量的测定丙二醛在酸性和高温的条件下，可以和硫代巴比妥酸〔TBA〕反响生成红棕色的三甲川，在532nm处有最大光吸收。

植物组织中可溶性糖与TBA的显色反响产物在450nm和532nm处也有吸收。

测定时要排除可溶性糖的干扰，因此分别测定532nm和450nm处的吸光值，直接求得植物样品提取液中MDA的浓度；MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。

计算公式如下:C(µmol.L-1)=6.45OD532-0.56OD450进一步算出每克样品鲜重中丙二醛的含量〔µmolg-1FW〕。

试剂：10%三氯乙酸〔TCA〕：10g三氯乙酸定容于100ml0.6%硫代巴比妥酸：0.6g用10%三氯乙酸TCA定容于100ml试验步骤:〔1〕取植物材料用液氮迅速研磨成粉，取0.2g左右材料，放入5ml离心管内。

〔2〕参加5ml 10%的三氯乙酸，提取30min后，10000r/min离心15min。

〔3〕取上清液2ml，参加2ml 0.6%TBA，混匀，在100℃水浴中煮15min，冷却，冷却后再测量。

〔4〕分别测定532nm和450nm处的吸光值。

以2ml〔加TBA,水〕水代替提取液作为对照管。

2蛋白质含量测定----考马斯亮蓝G-250法实验原理：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。

在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质一色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。

仪器和试剂：牛血清白蛋白500微克/毫升：10ｍｇ蒸馏水定溶至100ｍｌ考马斯亮蓝G-250：10ｍｇ溶于5ml 90％乙醇中，参加10ml85％的磷酸，用蒸馏水定溶于100ｍｌ操作步骤：1.标准曲线的制作：取4支试管，按下表配制不同浓度的牛血清白蛋白溶液各1毫升,参加5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm 下比色。

植物生理指标测定1.叶绿素含量测定叶绿素是植物进行光合作用的关键分子，它的含量可以反映植物的光合能力和叶片的健康状况。

叶绿素含量的测定可以通过光谱分析或色度法进行。

其中，光谱分析通过测量叶片吸收和反射的可见光波段来计算叶绿素含量；色度法则是通过提取叶片中的叶绿素，然后用乙醇或乙酸乙酯进行溶解，最后通过比色法来测定其含量。

2.蒸腾速率测定蒸腾是植物通过叶片气孔释放水分的过程，蒸腾速率可以反映植物水分的利用和调节能力。

蒸腾速率的测定方法有多种，常用的有质量法和热法。

质量法是通过称量植物在不同时间段内的重量变化来计算蒸腾速率；热法则是利用蒸腾过程中产生的热量来测定蒸腾速率。

3.气孔导度测定气孔是植物调节气体交换的关键结构，气孔导度可以反映植物对环境中各种因素的响应和适应能力。

气孔导度的测定可以通过气体交换技术进行，常用的方法有蒸腾流速法和扩散阻力法。

蒸腾流速法通过测定气孔腔中水蒸气和二氧化碳的浓度来计算气孔导度；扩散阻力法则是通过测定气孔腔中水蒸气的扩散阻力来计算气孔导度。

4.抗氧化酶活性测定氧化应激是植物面临的常见环境胁迫，而抗氧化酶是植物对抗氧化应激的主要防御系统。

抗氧化酶活性的测定可以通过比色法、荧光法和电化学法等进行。

比色法是基于酶催化反应产生的物质的颜色变化来测定酶活性；荧光法是通过检测酶催化反应产生的荧光信号来测定酶活性；电化学法则是通过测量酶催化反应中释放或吸收的电荷来测定酶活性。

这些测定方法可以用于研究植物对不同环境因子的响应和适应能力，也可以用于评估植物的生长和发育状态。

通过测定植物生理指标，研究人员可以更好地了解植物的生理机制和适应策略，为植物的种植和管理提供科学依据。

植物生理指标测定方法植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标，在植物生理研究中起到了非常重要的作用。

植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面：光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。

1.光合作用指标的测定方法：(1)净光合速率的测定方法：通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率；(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法：通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定，确定光饱和点和CO2抗饱和点；(3)光合色素含量的测定方法：通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量；(4)光合机构有效光能利用率的测定方法：通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。

2.呼吸作用指标的测定方法：(1)总呼吸速率的测定方法：通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率；(2)细胞内呼吸速率的测定方法：通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。

3.蒸腾作用指标的测定方法：(1)蒸腾速率的测定方法：通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率；(2)水分利用效率的测定方法：通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。

4.叶绿素指标的测定方法：(1)叶绿素含量的测定方法：通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量；(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法：通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。

5.产量指标的测定方法：(1)单株产量的测定方法：通过对植株生物量、籽粒数或实际产量的测定来计算出单株产量；(2)单穗产量的测定方法：通过对穗长、穗粒数和粒重的测定来计算出单穗产量；(3)单粒产量的测定方法：通过对单穗粒数和粒重的测定来计算出单粒产量。

6.抗逆性指标的测定方法：(1)抗氧化酶活性的测定方法：通过测定植物组织中抗氧化酶活性，如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶等的活性来反映植物的抗氧化能力；(2)渗透调节物质含量的测定方法：通过测定植物组织中渗透调节物质（如脯氨酸、脯氨酸激酶等）的含量来评估植物的胁迫适应能力；(3)膜脂过氧化程度的测定方法：通过测定植物组织中膜脂过氧化程度的指标，如丙二醛和过氧化氢含量来评估植物膜的稳定性。

生理指标测定实验方案汇总预测指标：1.抗氧化酶系统.MDA2. 可溶蛋白.超氧阴离子自由基3.叶绿素.类胡萝卜素4.可溶性糖5.游离氨基酸6.过氧化氢7. 谷胱甘肽.ASA1.抗氧化酶系统.MDA A 酶活测定试剂： PBS缓冲液0.05M （pH7.8）：取0.663g NaH2PO4·2H2O和16.384gNa2HPO4·12H2O，加PVP10g，并加EDTA或者EDTA盐，使其浓度为2mM，加蒸馏水定容至1L。

用前冰箱或冰上预冷。

样品制备鲜样0.1-0.5g加入1 ml磷酸缓冲液（0.05M，pH7.8），稍许石英砂，研磨成匀浆；移入10 ml离心管中，再用4ml磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中；10000×g4℃下离心20 min；上清夜贮于4℃冰箱中保存备测。

同时称取鲜样一份(0.1g左右)烘干称重。

S OD （λ=560nm）试剂配制：1LPBS 缓冲液中加入 Met1.93973g NBT[氮蓝四唑] 0.061323g EDTA-Na2 0.0037224g 核黄素0.00075272g 实验步骤：2.725mL反应液＋250uL蒸馏水＋25uL酶液【样品管】2.75mL反应液＋250uL蒸馏水（光照作为100%CK）【照光对照管】2.75mL反应液＋250uL蒸馏水（黑暗作为调零）【空白调零管】4000lx日光灯下反应20分钟，560nm比色。

反应温度25~35℃。

已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示按下式计算SOD活性：SOD总活性＝（Ack－AE）*V/（0.5*Ack*w*Vt）（式中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示，Ack为照光对照管的吸光度，AE为样品管的吸光度，V为样品液的总体积ml，Vt为测定时样品用量ml，w为样品鲜重g）※※※【空白调零管】可在光反应快结束前配制并用黑色纸或铝箔包裹以避光。

植物生理指标测定方法本文介绍了植物生理指标的测定方法，包括叶片持水率、植物暂时萎蔫率、叶片相对含水量、相对电导率和可溶性糖的测定。

首先介绍叶片持水率的测定方法。

选择植株上部枝条健康完整的定型叶，摘取后混均匀分成三份即时称量鲜重，然后置入40℃恒温烘箱中烘40 min，取出称重，再置入85℃烘箱中恒温烘至恒重。

失水率的大小可以反映叶片持水能力的高低，计算公式为失水率=[（鲜重－40℃烘40 min重）÷（鲜重－85℃烘至恒重）]×100%。

其次介绍植物暂时萎蔫率的测定方法。

观察植株叶片萎蔫下垂、翌日晨不能恢复正常者，即取盆中土壤测定。

将植株连土团倒出，用小刮铲从根的周围取土，剔除杂物后称重，带回室内置于105℃烘箱内烘至恒重。

每种植物每次测试一盆，按公式计算暂时萎蔫率：暂时萎蔫率=[（土壤湿重－土壤干重）÷土壤干重]×100%。

接下来介绍叶片相对含水量的测定方法。

取各植株相同部位叶片，测定叶片的鲜重M1，然后将叶片浸入蒸馏水中使其吸水达到饱和状态，再取出擦干叶片至表面无水分残留，称重得到叶片的饱和鲜重M2，最后将叶片放进烘箱，105℃杀青半小时，再于85℃环境下烘至恒重，得到叶片干重M3.按公式计算叶片相对含水量。

然后介绍相对电导率的测定方法。

取各植株相同部位叶片，用蒸馏水拭净叶片表面和背面，去除叶片中脉，剩下部分剪成大小为5mm×5mm的叶片。

取0.20g各3份放入锥形瓶中并加入30ml蒸馏水，放于真空干燥器中，用真空泵抽气10min，以抽出细胞间隙空气。

缓慢放入空气，水即渗入细胞间隙，叶片变成透明状，细胞内溶质易于渗出。

取出锥形瓶，在室温下保持30min后用电导仪测定电导率L1，然后将加塞锥形瓶转入沸水中，水浴20 mins，取出冷却至室温后测定电导率L2.按公式计算细胞膜相对透性（相对电导率）。

最后介绍可溶性糖的测定方法。

取各植株相同部位叶片，用90%乙醇浸泡2h，过滤后将滤液置于水浴中加热至乙醇挥发完毕，再用蒸馏水补足至定容，最后用显色剂显色后测定吸光度，按公式计算可溶性糖的含量。

基本生理指标测量1.体温测量：体温是人体内环境稳定性的重要指示器。

测量体温的方法主要有三种：口腔测温、腋窝测温和直肠测温。

其中口腔测温是最常用的方法。

使用电子体温计或者红外线体温计，将测温器放置在舌下，等待一段时间后，读取温度显示器上的数值，即可得到体温。

2.血压测量：血压是衡量心血管功能和全身循环状态的重要指标。

测量血压时，常用的方法是用血压计和听诊器。

测量时，将血压计的袖带绕在被测者的上臂上，充气使袖带膨胀，然后逐渐放气，听诊器贴在被测者的动脉点上，当听到心音的时候，记录下此时的血压。

3.心率测量：心率是指心脏收缩和舒张的频率，是心血管健康的重要指标。

测量心率的方法主要有手动计算心跳数和使用心率监测仪。

手动计算的方法是在静息状态下，感受到心脏的搏动，用计时器记录30秒内的心跳数，并乘以2得到每分钟的心跳数。

使用心率监测仪时，将传感器带在胸前或手腕上，设备会自动记录心跳数。

4.呼吸频率测量：呼吸频率是指单位时间内的呼吸次数，反映了呼吸系统的状态。

可以通过观察胸部或腹部的起伏来计算呼吸频率，也可以使用呼吸监测仪来自动测量。

在静息状态下，计算单位时间内呼吸的次数，并记录下数值。

5.体重测量：体重是反映人体健康状况的重要指标之一、使用体重秤来测量体重，将被测者放置在秤上，读取显示器上的数值即可。

在测量体重时，应注意测量的时间和基准（比如空腹、同一时间、同一秤等）。

6.身高测量：身高是称量身体的垂直尺寸，对于评估人体生长和发育状态非常重要。

可以使用身高尺或墙上的垂直标尺来测量。

站直并贴近测量仪器，使肩胛骨、头部、臀部和脚跟紧贴测量仪器，读取身高尺上与顶部垂直线对齐的数值。

除了上述基本的生理指标测量，还有其他一些指标也是非常重要的，比如心电图、血氧饱和度、脑电图等。

这些指标一般需要专业设备和专业人员来进行测量和解读。

通过定期测量这些指标，可以及时发现异常情况，采取相应的干预措施，从而保障人体健康。

一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。

80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。

三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。

测定各生理指标的试验方法测定各生理指标的试验方法1.4.1 电导率的测量(浸泡法)[5]取大小相当的植物叶片（尽量保证叶片的完整性，少含茎节），用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干表面水分，将叶片剪成适宜长度的长条（避开主脉），快速称取鲜样，每份0.1g,分别置于10ml去离子水的刻度试管中，盖上玻璃塞置于室温下浸泡处理12h,用电导仪测定浸提液电导（R1），然后沸水浴加热30min,冷却至室温后摇匀，再次测定浸提液电导（R2）。

根据公式：相对电导率=R1/R2×100% 算出电导率。

1.4.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定（氮蓝四唑法）[5]取各株植物相同部位的叶片（去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，加1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使最终体积为5ml。

取1.5~2ml于4000r/min下离心10min，上清液即为SOD粗提取液。

取32支试管（30支测定管，2支对照管），分别加入1.5ml0.05mol/l磷酸缓冲液、0.3ml130nmolMet溶液、0.3ml750μmol/l NBT溶液、0.3mol100μmol/l EDTA液、0.3ml20μmol/l核黄素、0.05ml酶液（其中2支对照管以缓冲液代替酶液）、0.25ml蒸馏水，混匀，将一支对照管置于暗处，其他各管于4000lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时缩短，低时延长）。

反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其他各管的吸光度。

计算公式：SOD总活性（U/g)=[(ACK-AE)×V]/(0.5×ACK×W×Vt)注：SOD总活性以每克样品鲜质量的酶单位表示（U/g）；ACK为照光对照管的吸光度；AE为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜质量（g）。

1.4.3 过氧化物酶(POD)活性的测定（愈创木酚法) [5]酶液提取：取5.0g植物叶片，洗净，剪碎，放入研钵中。

1 色素含量的测定（叶绿素、类胡萝卜素）采用95%乙醇浸泡法（李合生，2000），称取剪碎的新鲜样品0.1g放入试管中，取95%乙醇15ml，在黑暗条件下浸泡24h，期间摇晃2-3次，至叶片表面变白，取上清液，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度。

计算公式：叶绿素a（mg/L）=13.95*OD665－6.88*OD649叶绿素b（mg/L）=24.96*OD649－7.32*OD665总叶绿素=（6.63* OD665+18.08* OD649）*15/100类胡萝卜素（mg/L）=（1000OD470－2.05C a－114.8C b）/245色素含量（mg/g）=（色素浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重2 细胞膜透性的测定取新鲜样品1g放入试管中，取25ml蒸馏水，浸泡1h，测得此时电导率值a，再至于沸水浴中处理15min，冷却至室温，测得电导率值b，细胞膜透性=a/b。

注意：煮后一定要冷却到室温才测，可以用冰，煮过后值大致相同。

3 组织含水量的测定4 类黄酮及总酚含量的测定取1g样品（一般用粉末），加入1%的盐酸甲醇溶液（量取27ml分析纯盐酸用分析纯甲醇定容到1000ml）25ml，浸提2h，过滤到50ml容量瓶中，用盐酸甲醇溶液定容到刻度，在325nm和280nm进行比色，分别测定类黄酮和总酚的含量。

4.1.4.8多酚氧化酶(PPO)的测定方法粗酶液的制备:称取西兰花花蕾部分1.0g，加入磷酸缓冲液印pH6.8,0.05m。

比,含l%聚乙烯毗咯烷酮)20mL,冰浴匀浆,离心Zomin(r0000Xg,4oC),上清液即为粗酶液。

酶活性测定:磷酸缓冲液印H6.8,0.05m川几)1.5mL,加入0.1mo比儿茶酚底物2.0mL,35℃保温巧min;再加入0.5mL酶液后迅速混匀,每隔105记录吸光度值灿2。

的变化,共记录3min,试验重复3次。

酶活性以U德.min表示,以翰。

植物⽣理学中各项⽣理指标的测定⽅法⼀.实验内容实验1 MDA(丙⼆醛)含量测定所需试剂：10%三氯⼄酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋⽩含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%⼄醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏⾎酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分⼦量167.12） (⼄=胺四⼄酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维⽣素C)含量测定偏磷酸 95%⼄醇磷酸 4% 2,2-⼆联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(⾕胱⽢肽, 媚⼒肽GSH GSH是由⾕氨酸、半胱氨酸和⽢氨酸结合⽽成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（⼆硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基⽔杨酸甲苯茚三酮冰⼄酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。

80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。

三氯⼄酸试验11：超氧阴离⼦含量测定⼆．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚⼄烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后⽤缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶⽚加⼊预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离⼼20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存⼀两天内备⽤，中短期⽤-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶⽚加⼊3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离⼼10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备⽤）（偏磷酸可显著沉淀蛋⽩质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚⼄烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml⽔），1000ml需称取10g，此处⽤PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏⽔)，此处⽤PBSPBS（缓冲液）配制⽅法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏⽔定容⾄1L，取② 31.21g定容⾄1L，放置4℃冰箱备⽤PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释⾄400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容⾄100 ml蒸馏⽔（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得⽤研钵提前研碎，后⽤磁⼒搅拌器溶解⼀到两天后再定容）（现所⽤为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容⾄500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯⼄酸（TCA）（纯）称10g定容⾄100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g⽤10%TCA定容⾄100ml（配制时，可⼀次完成，先配TCA，不要定容，再加⼊硫代巴⽐妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁⼒搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶⽚，加4ml磷酸缓冲液研磨，加⼊ 4ml 0.25%的硫代巴⽐妥酸（溶于10%的三氯⼄酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离⼼15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (µmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（µmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（⽤多波长测定，在测定之前⼀定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输⼊）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空⽩调零MDA含量测定的改进1.可以⽤做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，⽤量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。

1、氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）2、POD（过氧化物酶）活性的测定——愈创木酚法3、CAT(过氧化氢酶)测定4、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定5、谷胧甘肽还原酶(GR)的活力测定:6、O2-产生速率的测定7、过氧化氢(H2O2)含量的测定——碘化钾分光光度法8、丙二醛（MDA）含量的测定9、还原型抗坏血酸（ASA）和脱氢抗坏血酸（DHA）的测定10、谷胱甘肽还原酶测定11、MDAR(单脱氢抗坏血酸还原酶)活性的测定12、可溶性总糖的测定13、考马斯亮蓝G-250染色法测定可溶性蛋白含量14、叶绿素含量的测定15、石蜡制片的制作16、激素Indole-3-Acetic Acid（IAA）、Abscisic Acid（ABA）、GA3和ZA的测定17、cDNA扩增片段长度多态性技术（cDNA-AFLP）18、3′/5′RACE 扩增基因全长19、根系活力的测定（TTC法）一氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）【实验原理】SOD是含金属辅基的酶。

高等植物含有两种类型的SOD：Mn－SOD和Cu.Zn－SOD，它们都催化下列反应：由于超氧自由基（O2.－）为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法。

并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。

核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2.－，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），继而还原生成二甲月替，它是一种蓝色物质，在560nm波长下有最大吸收。

当加入SOD时，可以使超氧自由基与H+结合生成H2O2和O2，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲月替生成速度减慢。

通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照一定时间后测定560nm 波长下各液光密度值，抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比。

反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低。

【仪器、材料与试剂】（一）仪器1. 分光光度计2. 台式离心机（二）材料1. 磷酸氢二钠2. 磷酸二氢钠3. 甲硫氨酸4. EDTA-Na25. 核黄素6. 氮蓝四唑(NBT)7. 陶瓷小研钵8. 4-5ml 离心管9. 10ml 玻璃试管（三）试剂1. 0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

常见生理指标的测定方法一、SOD1、称0.2g叶片（去叶脉）——研钵(加1mLPBS7.8）——定容至2mL离心管——离心（15000r，15min）——得上清液2、取1.5mLPBS7.8，Met、NBT、核黄素溶液EDTA-Na2各0.3mL，上清液0.1mL（对照管用0.1mLPBS7.8替代,2支）ddH2O0.5mL（温控25℃-35℃，光强4000Lx）——560nm处比色——计算二、POD、CAT称0.2g叶片（去叶脉）——研钵(加1mLPBS7.8）——定容至2mL离心管——离心（15000r，15min）——得上清液1、POD：加1mLH2O2，愈创木酚0.95mL，PBS7.0 1mL,上清液0.05mL——于470nm处比色——分析计算2、CA T：加1mL，H2O1.95mL,上清液0.05mL——于240处比色——计算三、MDA×1+1、外加离心管×11、0.5g——研钵（加2mL10%TCA）——研磨（8mL10%TCA）——定容至10mL离心管——离心（5000r，-min）——得上清液2、取2mL上清液（加2mLTBA,对照以水代替）——沸水浴15min——于450、532、600nm 处比色——计算四、叶绿素0.2g——25mL试管（加20mL提取液，丙醇：乙醇=2:1）——放置24h——于645、663nm处比色——计算五、蛋白质含量测定×2+1,外加离心管×11、标准曲线的制作取6支具塞试管按下表加入试剂，配制0--1000µg/mL牛血清蛋白液各1mL编号0 1 2 3 4 5蛋白标液mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0ddH2O 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0蛋白含量µg0 200 400 600 800 1000。

生理指标测定方法生理指标是指人体在不同状态下的各种生理参数，例如体温、血压、心率等。

测定这些生理指标对于健康管理以及疾病诊断和治疗至关重要。

本文将介绍几种常见的生理指标测定方法以及其原理和应用。

一、体温测定方法体温是人体表征温度状态的重要指标，正常体温范围在36.5℃至37.5℃之间。

体温的测定方法有多种，常见的方法包括口腔测温、腋下测温、耳温计测温和额温计测温。

口腔测温是最常用的方法之一，使用普通温度计将温度计柄放入舌下，保持2-3分钟后读取温度。

腋下测温则是将温度计放置在腋下，保持5分钟后读取温度。

耳温计测温是使用电子耳温计通过耳朵来进行测温，这种方法快速、准确。

额温计测温则是通过额头部位进行测温，非接触式，速度快且卫生。

二、血压测定方法血压是血液在心脏收缩和舒张时对血管壁的压力。

血压的测定一般使用血压计进行，常见的血压计分为卧式血压计和电子血压计。

在进行血压测定时，被测者需要坐下或平躺，将袖带套在上臂上，然后用听诊器听取心脏的心音，并逐渐放气来测量收缩压和舒张压。

电子血压计则是通过袖带上的传感器自动测量，并在数值显示屏上显示结果，操作更加简便。

三、心率测定方法心率是指心脏每分钟跳动的次数，是评估心脏健康状况的重要指标。

常见的心率测定方法包括手触法和心率监测仪。

手触法是指将食指、中指与无名指放在颈动脉或腕动脉上，感受心脏跳动的脉搏，然后计数30秒内的跳动次数并乘以2即可得到心率。

心率监测仪则是通过佩戴在手腕上或胸部的传感器来自动监测心率，并以数值的形式显示在屏幕上。

四、呼吸频率测定方法呼吸频率是指每分钟呼吸的次数，通常以静息状态下的呼吸频率来评估健康状态。

测定呼吸频率可以通过观察胸部起伏、计数30秒内的呼吸次数并乘以2，或者使用呼吸频率计进行测量。

呼吸频率计是一种便携式仪器，通常佩戴在胸部或腹部，通过感应呼吸运动并记录频率，并以数值形式显示在显示屏上。

综上所述，生理指标的测定方法多种多样，选择合适的测定方法取决于具体的指标以及测量准确性和便携性的需求。

常用作物生理指标测定方法作物生理指标是衡量作物生长发育和生理功能的重要参数，对于研究作物生理特性、生长速度、抗逆性能以及优化农业管理具有重要价值。

下面是一些常用的作物生理指标测定方法：1.叶绿素含量测定：叶绿素是作物光合作用的重要生化指标，常用的方法包括醋酸镁法、乙醇法和非破坏性叶绿素测定仪等。

2.叶片相对含水量测定：叶片相对含水量是反映植物水分状况的指标，常用的方法包括重量法、酒精浸泡法等。

3.叶片相对电导率测定：叶片相对电导率是反映作物膜系统完整性的指标，常用的方法包括浸泡法和浸渍法。

4. 叶片蛋白质含量测定：叶片蛋白质含量是反映植物生长和抗逆性的指标，常用的方法包括Lowry法、Bradford法和Biuret法等。

5.叶片活性氧含量测定：活性氧对植物生长和逆境抗性具有重要影响，常用的方法包括过氧化氢测定法、超氧化物歧化酶测定法和丙二醛含量测定法等。

6.叶片抗氧化酶活性测定：抗氧化酶是植物抵御氧化应激的重要酶系，常用的方法包括超氧化物歧化酶活性测定法、过氧化氢酶活性测定法和过氧化物酶活性测定法等。

7.土壤水分含量测定：土壤水分含量是影响作物生长和产量的重要因素，常用的方法包括烘干法、容量法和驻挠仪测定法等。

8.根系活力测定：根系活力是作物吸收水分和养分的重要指标，常用的方法包括三苯四氮唑蓝法和碘化钠法等。

9.气孔导度测定：气孔导度是作物水分调节和碳代谢的重要参数，常用的方法包括气体交换仪测定法和树脂浸泡法等。

10.叶盘蒸腾速率测定：叶盘蒸腾速率是反映作物水分蒸腾能力的指标，常用的方法包括测定叶盘失重法和石蜡浸渍法等。

以上是一些常用的作物生理指标测定方法，这些方法提供了了解作物生长发育和生理功能的重要信息，为作物生理机制的深入研究和农业管理的优化提供了依据。

同时，为提高作物抗逆性能和增加农业产量提供了重要的支持。

各生理指标的测定方法一、脯氨酸含量的测定1.茚三酮法1.1原理在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。

1.2步骤试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g冰乙酸------------15ml6mol/L磷酸--------10ml70°C水浴助溶；（2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍；（3）3%磺基水杨酸：磺基水杨酸------3g加蒸馏水至------100ml实验步骤：（1）称取0.1g样品放入研钵，加5ml 3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴15min；（2）冰上冷却，4000rpm离心10min；（3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水浴30min，冰上冷却；（4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30s，静置30min；（5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。

1.3计算方法脯氨酸含量（μg/gFW）＝ X * 提取液总量（ml）/样品鲜重（g）*测定时提取液用量（ml）*10^6公式中：X-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg）提取液总量---------------------------5ml测定时提取液用量---------------------2ml问题及质疑：1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。

一氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力一、原理超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下列反应： 2O2-+ 2H →H2O2+O2。

本反应产物H2O2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。

本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。

在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。

而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制了甲腙的形成。

于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。

据此可以计算出酶活性大小。

（一个酶活单位定义为将NBT的还原抑制到对照的一半（50%）时所需的酶量。

）二、材料、仪器设备及试剂（一）材料水稻或小麦叶片。

（二）仪器设备高速冷冻离心机，紫外分光光度计，日光灯（反应试管处照度为4000lx），试管数支。

（三）试剂（1）0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液 (PBS)。

配制方法：①母液A（0.2mol/L Na2HPO4）:称取71.64g Na2HPO4·12H2O,用蒸馏水定容至1000ml 。

(配置溶液时需要用磁力搅拌器搅拌才能溶解。

)②母液B(0.2mol/L NaH2PO4)：称取31.21g NaH2PO4·2H2O,用蒸馏水定容至1000ml 。

③配0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液：取91.5mlA母液+8.5mlB母液+蒸馏水定容到400ml （2）提取介质0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液，内含1%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）: 称取1g PVP用0.05mol/L（pH7.8）磷酸缓冲液 (PBS)定容到100ml（3）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。

各生理指标的测定方法一、脯氨酸含量的测定1.苗三酮法1.1原理在正常坏境条件卞，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸枳累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性苗三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。

1. 2步骤试剂：（1） 25%苗三酮：帝三酮----------- 0. 625g冰乙酸------------ 15ml6mol/L 磷酸 ------- 10ml70° C水浴助溶；（2）6mol/L磷酸：85%磷酸棉释至原体积的2. 3倍；（3） -------------------------------------------- 3%磺基水杨酸：磺基水杨酸3g加蒸饰水至----- 100ml实验步骤：（1）称取0. 1名样品放入研钵，加5ml3%磺基水杨酸研磨成匀浆,100° C沸水浴15min；（2）冰上冷却，4000rpm离心lOmin：（3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%苗三酮2ml混合均匀，100° C沸水浴30min,冰上冷却；（4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30s,静置30min；（5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。

1.3计算方法脯氨酸含量（Ug/gFW） = X *提取液总量（ml） /样品鲜重（G *测定时提取液用量（ml） *10飞公式中：X——从标准曲线中查得的脯氨酸含量（Pg）提取液总量 --------------------------- 5ml测定时提取液用量---------------------- 2ml问题及质疑：1.酸性体系下，脯氨酸与苗三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。

选取生长6周的印度芥菜及生长8周的遏蓝菜和烟草水培幼苗，转移至含有200、400或800 μM CdCl2的1/2 Hoagland营养液中生长4天，分别选取相同叶位的植物叶片进行以下生理指标测定。

每个实验设3次重复。

（1）光合系统指标测定用光合仪（LCpro+，ADC，UK）测定光合速率（Pn）、蒸腾速率（E）和气孔导度（Gs）。

测定时间为11：00～13：00。

（2）过氧化氢含量测定取0.5g植物叶片加0.1%（w/v）冰预冷的TCA研磨匀浆，4℃ 15000g离心25 min。

3 ml 反应混合液含有0.5 ml样品提取上清液、0.5 ml 100 mM磷酸缓冲液（PH6.8）和2 ml 1M KI。

将反应混合液置于黑暗处放置1h后，于390 nm处测定反应液吸光度。

根据过氧化氢标准曲线查得样品中H2O2浓度C（μM），按下式计算过氧化氢含量：H2O2含量（μMol/g）＝(C×V t)/(W×V1)式中：C－标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μM）；V t：样品提取液总体积（ml）；V1：测定时用样品提取液体积（ml）；W：样品鲜重（g）。

（3）相对电导率测定取样品0.5g，放入试管中，加10ml去离子水，置25℃下10h。

用玻璃棒搅拌均匀，然后用电导仪测电导值C1。

再将试管放入沸水中10min，待其冷却至25℃时，测得处理和对照得电导值为C2，按下式计算电解质渗出率和伤害度：电解质渗出率（%）＝（浸泡液电导值/煮沸液电导值）×100％（4）MDA含量测定取0.5g植物叶片加5%（w/v）冰预冷的TCA研磨匀浆，4℃1500g离心10min，取上清液2ml于10ml的试管中，再加入0.67% TBA2ml，混合后在95℃水浴上煮沸30min，冰浴冷却，再1500g离心10min，分别在450nm、532nm、600nm测定吸光度值，按：C(μmol/L)=6.45×(A532-A600)-0.56×A450计算MDA的浓度，进而计算含量。