根据细菌培养和药敏试验选用抗菌药物
目的 探讨抗菌药物的使用情况及细菌耐药率的变化趋势。方法 收集该院住院患者2010年6月—2013年6月3年间尿液、血液、痰和分泌物等标本，用于进行致病菌分离培养和药敏试验；同时，根据WHO推荐的限定日剂量（Defined
Daily Dose，DDD）计算用药频度（DDDs），并统计3年间该院每年抗菌药物的消耗总量，分析该院抗生素应用情况。结果 抗生素的DDDs与细菌耐药率具有一定相关性，两个变量之间的相关系数r为0.8745～0.9807，相关系数的显著程度（P＜0.05）。结论 临床上应合理使用抗生素，尽量避免细菌耐药性的产生。
标签： 细菌培养；药敏试验；抗菌药物
抗生素是医院内应用最广泛的药物之一，有调查显示我国住院患者的抗生素使用率高达70%[1]。而这种广泛使用抗生素的现象使得致病菌耐药率不断上升，而单靠各种新型抗生素的不断研发并不能解决根本问题[2]。目前，随着抗生素在临床上的广泛使用，耐药菌株不断产生，造成这种现象的不合理使用抗生素现象已成为医务工作者棘手的问题。为探讨使用抗生素的分布，使用趋势及在其在临床用药中的不合理性，该研究分析了2010年1月—2012年12月间该院抗生素用药频度（DDDs，DDDs=药品的消耗总剂量/DDD值），并统计了该段时间内抗生素的使用情况，同时对细菌耐药率与抗生素使用量进行统计分析，探讨细菌耐药率与抗生素使用量之间的关系，为临床上合理使用抗生素提供参考。现报道如下。
1 临床对象
1.1 DDDs分析方法
用药频度（DDDs）=药品的消耗总剂量/DDD值，其中药品的消耗总剂量来源于该院2010年1月—2012年12月药库中统计的各种抗生素的消耗数据，限定日剂量（Defined Daily Dose， DDD）根据WHO制定方式，《中国药典》和《新编药物学》为参考确定[3]。
1.2 致病菌培养和药敏试验
收集该院住院患者3年间尿液、血液、痰和分泌物等标本，将标本接种于巧克力平板、血琼脂平板和伊红美蓝平板，置35℃培养箱中培养24 h，分离到纯菌落后用API鉴定条（法国生物梅里埃公司）鉴定到种，MIC药敏分析。质控菌为大肠埃希菌ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923，绿脓假单胞菌ATCC27853。
广东畜牧兽医科技２００８年（第 鲞２箜 塑 －４２－ 试验研究 氟苯尼考与多种抗菌药物联合应用对 大肠杆菌的体外抑菌试验 江丽 ，雷淑珍 （１．广州市海珠区动物防疫监督所，广东广州 ５１０３１０；２．广东省农科集团前沿动物保健有限公司，广东广州５１０６４０） 摘要：为了解氟苯尼考分别与恩诺沙星、ＴＭＰ和多西环素联合用药的体外抑菌效果，本试验采用倍 比稀释法，测定了氟苯尼考、恩诺沙星、ＴＭＰ和多西环素对大肠杆菌０ 的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）；采用 棋盘法进行恩诺沙星、ＴＭＰ、多西环素分别与氟苯尼考联合应用对大肠杆菌的药敏试验。结果表明：四种 抗菌药物都有较强的抑菌能力，氟苯尼考ＭＩＣ为４ ｇ／ｍＬ，恩诺沙星ＭＩＣ为０．ｉ ｇ／ｍＬ，ＴＭＰ的ＭＩＣ为 １６ ｇ／ｍＬ，多西环素的ＭＩＣ为４ ｇ／ｍＬ。氟苯尼考与恩诺沙星联合表现为无关作用，与ＴＭＰ联合表现为 协同作用，与多西环素联合表现为累加作用。 关键词：氟苯尼考；大肠杆菌；联合药敏试验 中图分类号：￥８５９．７９＂６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５—８５６７（２００８）０３—００４２—０３ 氟苯尼考（ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ，氟甲砜霉素）是新一 代氯霉素类兽医专用广谱抗生素，其化学名称为Ｄ （＋）苏卜对甲砜基苯基一２一二氯乙酰氨基一３一氟 丙醇，是甲砜霉素（Ｔｈｉａｍｐｈｅｎｉｃｏ１）单氟衍生物。 该药自２０世纪９０年代陆续在日本、欧美及中国等 上市以来，主要用于防治牛、猪及水产类动物的细 菌性感染。对敏感菌的抗菌活性与氯霉素和甲砜霉 素相似，但对耐氯霉素及甲砜霉素的细菌仍然敏 感。由于氯霉素有严重的致再生障碍性贫血的不良 反应，在美国已禁止用于食品动物。研究表明，氯霉 素的化学结构中芳香环上对位硝基是引起再生障 碍性贫血的主要基团，氟苯尼考在化学结构上以 ＣＨ。Ｓ０ 取代了Ｎ０ ，用药后不产生再生障碍性贫血 的不良反应 ］。因此，在动物的疾病防治上，尤其是 食品动物，氟苯尼考具有广阔的应用前景。本实验 采用棋盘法进行体外联合药敏试验，旨在探讨氟苯 尼考分别与恩诺沙星、ＴＭＰ、多西环素联合用药对大 肠杆菌的体外抑菌效果，为临床上防治大肠杆菌病 提供资料，避免长期单一用药或盲目联合用药引起 耐药菌株的产生，从而有效防治大肠杆菌病。 １材料与方法 １．１材料氟苯尼考（９９．３％）、恩诺沙星（９９．０％）、 乳酸ＴＭＰ（８８．３％）、多西环素（９０．２％）、氢氧化钠、乙 酸、大肠杆菌０ （由中国兽药监察所提供）。 １．２方法 １ Ｉ２．１ 试管法 １－２．１．１ 药物原液的配制用电子天平称取各种 收稿日期：２００８－０４－２１ 药物，无菌操作将各种药物用适宜的溶剂溶解，稀 释成ｌ ２８０ ｔＪ．ｇ／ｍＬ。氟苯尼考：称取０．０６４６ ｇ，用 无水乙醇滴加振摇至完全溶解，以蒸馏水定容到 ５０ ｍＬ。恩诺沙星：称取０．０６４７ ｇ，用１０％乙酸加振 摇至完全溶解，以蒸馏水定容到５０ ｍＬ；ＴＭＰ：称取 ０．０７２５ ｇ，以蒸馏水溶解，定容到５０ ｍＬ；多西环 素：称取０．０７１０ ｇ，以蒸馏水溶解，定容到５０ ｍＬ。 以上各药以５ ｍＬ分装于各干燥无菌小瓶中，于 ２０℃低温保存，每次取出一瓶保存于４℃备用，使 用期限为一周圆。 １－２．１．２操作方法将菌液用营养肉汤作ｌ：ｉ００ 稀释，然后在ｌ３支无菌加塞的试管中，在第一管中 加入稀释后的菌液１．８ ｍＬ，其余各管均加入稀释 后的菌液ｌ ｍＬ。然后于第ｌ管内加入抗菌药物原 液（１２８０ ｔＪ．ｇ／ｍＥ）０．２ ｍＬ，混合后吸出ｌ ｍＬ加入 第２管中，用同样的方法依次稀释至第１２管，弃去 ｌ ｍＬ。第ｌ３管为生长对照。第ｌ管中的药物浓度为 原液的ｉ／ｉ０，第２管为第ｌ管的１／２，如此类推。另 外，由于恩诺沙星的ＭＩＣ较低，因而先将原液作ｌ： ｌ０稀释后再吸取０．２ ｍＬ（１２８ ｇ／ｍＥ）稀释药液 加入第ｌ管中，佘下操作步骤与前面所述过程相 同。于３７℃培养１６￣１８ ｈ，每个药物作双样品测 定，以无菌生长的最低浓度为最低抑菌浓度。 １．２．２棋盘法联合药敏试验 １＿２－２。１ 药物的稀释 用已稀释的菌液稀释各种 药物：氟苯尼考：吸取０．７ ｍＬ药物原液与ｌ３。３ ｍＬ
实验六、抗菌药物的体外药效试验
（药敏试验）
各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。
［目的要求］
1、熟悉体外抗菌试验操作技术。
2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。
［实验原理］
常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。
1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。
第4章 抗菌药物敏感试验
一、需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验
1.扩散法（K-B法）
（1）原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有待检菌的琼脂平板上，该点称为抗
菌药源。药物向周围扩散，形成了随着药源距离增加，琼脂中药物浓度递减的浓度梯度。在药源周围可抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈即抑菌圈，其大小
可以反映待检菌对测定药物的敏感性，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，
即抑菌圈愈大，MIC愈小。
（2）实验材料 ①培养基：采用水解酪蛋白（M-H）琼脂，pH为7.2，琼脂厚度4mm。
对生长条件要求高的细菌，如链球菌属细菌需加入5%脱纤维羊血，嗜血杆菌属细菌需加入1%血红蛋白（含Ⅴ因子）和1%Ⅹ因子复合物。②抗菌药物纸片：选用直径为6.35mm，吸水
量20μl的专用药敏纸片。制备时取灭菌药敏纸片，经加样或浸泡药物溶液后冷冻干燥，置
4℃保存备用，在有效期内使用。③接种菌液 挑取平板上形态相同的菌落4～5个，接种于
3～5ml M-H肉汤中，于35℃中培养2～8h。嗜血杆菌属和链球菌属细菌需用加血肉汤培养
过夜。用生理盐水或肉汤校正菌液至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×109/ml的含菌量）后在15min内接种。
（3）试验方法 以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液（其浊度为0.5麦氏比浊标准），在
M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次平板旋转60°，最后沿平板内缘涂抹１周。平板置室
温干燥3～5min，后用无菌镊子或专用纸片分配器将含药纸片贴于琼脂表面。纸片应贴得均
匀，各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm。直径为90mm的平板可贴6张纸片。纸片贴牢后应避免再移动。平板室温放置15min后倒置于35℃培养箱中培养16～18h后读
取结果。
（4）结果解释 平板置黑色背景上，从背面量取包括纸片直径在内的抑菌圈直径，单
位为mm。培养基中如果加有血液须打开皿盖从正面测量抑圈菌。抑圈菌的边缘以肉眼不见
