细菌内毒素检查验证方案
- 格式：docx
- 大小：140.75 KB
- 文档页数：17
-
起草人：
审核人：
批准人：
批准日期：年月日
1 概述 ................................................................................................................................ 1
2 验证目的及范围 ............................................................................................................. 1
3 验证小组人员组成及职责 ............................................................................................. 1
4 验证依据 ........................................................................................................................ 2
5 验证前准备 .................................................................................................................... 2
6 验证的实施 .................................................................................................................... 2
7 偏差处理 ........................................................................................................................ 5
8 验证数据及评估 ............................................................................................................. 5
9 验证报告及评审 .............................................................................................................. 5
10 再验证及周期 .............................................................................................................. 5
11 验证文件及归档 .......................................................................................................... 5
12 附件 ............................................................................................................................. 5
. z. -
细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或者量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判 断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放， 即凝胶法和光度测定法， 后者包括浊度法和显色基
质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法发展实验。公司自行制备的注射用
水需发展细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法发展试验。
本验证方案合用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、
干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性发展评
价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.1 验证小组由以下部门人员组成：质量部、 QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表
"中华人民共和国药典"2022 版 1143 细菌内毒素检查法 职 责
1. 负责起草验证方案的起草
2. 负责本方案的培训
3. 仪器仪表校验确认
4. 负责验证的实施
5. 负责数据的采集和整理
6. 负责数据分析
7. 负责完成验证报告
1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准
2. 负责验证现场的监视审查
1. 负责保障设备、器具的完好
2. 负责动力系统的保障 组成
QC
质量部
生产部 -
5.1 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后〔且在验证实施前〕对
本次验证相关人员发展培训。培训人员记录见附件 1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6.1实验材料及用具
电子天平
6.1.2. 电热枯燥箱
6.1.3. 恒温恒湿箱
6.1.4.水银温度计 5.3 相关文件，确认以下文件皆为现行有效版本。
序号 相关文件 文件编号
1 DHG 型电热恒温鼓风枯燥箱操作规程 WI-100
2 BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程 WI-101
3 W*QI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-103
4 DK 型电热恒温水浴锅操作规程 WI-104
5 HWS 型恒温恒湿箱操作规程 WI-105
6 JA2003N 电子天平操作及维护保养规程 WI-106
7 PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程 WI-108
8 SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-109
9 YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-113
10 "培养基管理规程" WI-76 -
6.1.5. 旋涡混合器
6.1.6. 鲎试剂〔具有国家主管部门的批准文号〕 6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品) 6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml， 且对内毒素试验无干扰作用。
6.1.9. 实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、
剪刀、砂轮。
玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或者其他热原灭活剂或者清洗液中充分浸泡，然 后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，
空干后放入适宜的密闭金属容器中或者用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。
除去玻璃器皿外表可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后， 将烤箱调至 250℃， 待 烤箱温度升至设定的温度后开场计时，干烤至少 1 小时。到达规定时间后，关断电源， 待烤箱温度自然降至室温。在不翻开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃 器皿用锡箔纸包装，在不翻开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可 能存在的外源性内毒素。
本试验采用凝胶法，凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反响的原理发展限度检测
的方法。
6.3.1 细菌内毒素标准溶液的制备
取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上
部轻轻划痕， 75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。按照标准 -
品说明书，参加规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，
置旋涡混合器上混合15分钟。然后发展稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，
即2λ、λ、 0.5λ、0.25λ〔λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度〕，每稀释一步均应在旋涡混 合器上混合30 秒钟。
6.3.2 待复核鲎试剂的准备
取规格为0.1ml/ 支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻
轻划痕， 75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支参加0.1ml 检查用
水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，防止产生气泡。
6.3.3.加样
将已充分溶解的待复核鲎试剂18支〔管〕放在试管架上，排成5列，其中4列4支〔管〕，
1列2支〔管〕。 4 支〔管〕 4 列每列每支分别参加0.1ml 的2λ、λ、 0.5λ、和0.25λ
的内毒素标准溶液；另2支〔管〕参加0.1ml检查用水，作为阴性对照。
6.3.4 加样完毕后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，防止产生气泡，垂直放入
试管架上， 连同试管架放入37℃±1℃恒温恒湿箱中， 试管架保持水平状态， 保温60±2 分钟。
6.3.5 观察并记录结果。将试管架从恒温恒湿箱中轻轻取出，防止振动，将每管拿出缓
缓倒转180°观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为
〔+〕；未形成凝胶或者凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为〔－〕。保温 和拿取试管过程应防止受到振动，造成假阴性结果。
实验结果计算
如最大浓度2λ4管均为阳性， 最低浓度0.25λ4管均为阴性， 阴性对照为阴性时实验为
有效，按下式计算反响终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果〔λ 〕。
c
