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E-cadherin、claudin1与乳腺癌侵袭转移的相关性研究的开题报告题目：E-cadherin、claudin1与乳腺癌侵袭转移的相关性研究摘要：乳腺癌是女性一种最普遍的恶性肿瘤类型之一，其治疗难度高且易有复发和转移。
近年来，许多研究表明，E-cadherin、claudin1等蛋白质分子与乳腺癌侵袭转移有密切关系。
本文将通过对E-cadherin、claudin1以及其在乳腺癌细胞中的表达情况与侵袭及其转移能力进行对比研究，以期进一步探讨其作为新型治疗手段的潜在价值。
关键词：E-cadherin、claudin1、乳腺癌、侵袭、转移研究背景：乳腺癌是女性一种最普遍的恶性肿瘤类型之一，患者数量逐年上升。
近年来，虽然有了很多新型治疗手段，如化疗、放疗、激素治疗等，但对于晚期转移的乳腺癌，目前治疗仍然面临巨大的挑战。
因此，如何防止乳腺癌转移是目前乳腺癌研究中重点关注的问题之一。
E-cadherin、claudin1是细胞质骨架的重要组成部分，对于细胞黏附和细胞间连接具有至关重要的作用。
此外，多项研究表明这两个蛋白在乳腺癌的发展和转移过程中也起到了极为重要的作用。
E-cadherin、claudin1在乳腺癌转移等恶性肿瘤过程中表达降低，同时与侵袭、转移等过程相关的基因表达水平显著上升。
据此，E-cadherin、claudin1被认为是乳腺癌转移中的关键蛋白之一。
该项目旨在探讨E-cadherin、claudin1与乳腺癌侵袭、转移发生的关系，并以此为基础，进一步探讨其在治疗中的潜在应用价值。
研究内容：本研究将通过以下步骤进行：1. 采用实验室中现有的乳腺癌细胞株，利用PCR、Western blot等技术检测E-cadherin、claudin1 mRNA、蛋白表达情况，在乳腺癌转移前后分别进行检测。
2. 通过Transwell划痕实验，检测E-cadherin、claudin1基因缺失、表达水平下降及细胞未表达情况下乳腺癌细胞转移程度。
E-cadherin在胃癌中的表达与化疗疗效的关系及对胃癌细胞化疗敏感性的影响的开题报告一、选题背景和意义胃癌是消化系统常见恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在全球范围内均较高。
化疗是胃癌治疗中常用的一种方法，但面临抗药性问题。
因此，探究胃癌细胞化疗敏感性调控机制，寻找可规范化疗疗效的新靶点、新方法具有重要的临床意义。
E-cadherin是细胞间黏附蛋白，能够维持细胞与细胞之间的黏着力。
研究表明，E-cadherin与肿瘤侵袭和转移密切相关。
而在胃癌中，其表达状况一般与癌组织的浸润性和分化程度有关。
因此，有学者认为，E-cadherin在胃癌化疗中的表达可能会影响化疗疗效。
本文将从E-cadherin在胃癌中的表达情况与化疗疗效相关性、E-cadherin与胃癌细胞化疗敏感性的关系两个方面展开，以期为深入研究胃癌化疗机制提供一定的参考。
二、研究内容1. E-cadherin在胃癌中的表达情况及与化疗疗效的相关性本部分将通过文献综述，查阅E-cadherin在胃癌化疗中的表达情况，以及其与化疗疗效之间的相互关系。
主要包括以下几个部分：（1）E-cadherin在胃癌中的表达情况；（2）E-cadherin在胃癌化疗中的表达变化；（3）E-cadherin表达与胃癌化疗抗性的关系。
2. E-cadherin与胃癌细胞化疗敏感性的关系本部分将以实验室的数据为基础，研究E-cadherin表达调节对胃癌细胞化疗敏感性的影响。
主要包括以下几个部分：（1）实验设计及方法（2）E-cadherin表达调节对胃癌细胞的化疗敏感性影响（3）相关机制探究。
三、研究意义1. 探究E-cadherin在胃癌化疗中的表达变化及其与化疗疗效的相关性，有助于从分子水平上认识胃癌化疗抗性机制，为寻找新的治疗靶点提供铺垫；2. 研究E-cadherin对胃癌细胞化疗敏感性的影响机制，有助于深入了解E-cadherin在胃癌中的作用机制及化疗敏感性调控机制，为寻找新的治疗方法提供理论依据。
胃癌中E-cad启动子区高甲基化的定量研究的开题
报告
一、题目：胃癌中E-cad启动子区高甲基化的定量研究
二、研究背景和意义：
胃癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，在全球范围内都是颇具威胁的健康问题。
已有的研究表明，E-cadherin是一种与胃癌高度相关的蛋白质，它是细胞粘附分子的一种，它在维持细胞间稳定性、细胞形态、细胞的增殖和分化等方面具有重要作用。
甲基化是指DNA中甲基基团连接到环状核苷酸的CpG位点，以影响DNA转录和基因表达。
因此，对E-cadherin基因启动子的甲基化状态进行研究具有重要的实际意义。
三、研究目的：
该研究旨在通过定量研究胃癌中E-cadherin基因启动子区的甲基化状态，探究其与胃癌的关系，为胃癌的治疗提供新的思路和方向。
四、研究内容和方法：
1.收集患有胃癌的组织标本；
2.提取组织标本中的DNA，并通过实时荧光定量PCR与脱氧嘧啶去甲基化酶(Turbo DNA Free, thermo)联用的直接甲基化分析技术，分析E-cadherin基因启动子区的甲基化状态；
3.对定量研究结果进行分类分析与判读，将甲基化率在50%以上的组织视为高甲基化组，将甲基化率在50%以下的组织视为低甲基化组；
4.将实验结果进行统计分析，并分析E-cadherin基因启动子区高甲基化与胃癌之间的关系。
五、预期结果与意义：
该研究预计能够揭示E-cadherin基因启动子区甲基化状态与胃癌的
关系，并探究其机制。
同时，该研究还能为胃癌治疗提供新的方向和思路，为临床医生提供可靠的治疗依据，有望为控制和治疗胃癌做出贡献。
E—cadherin与肿瘤侵袭、转移相关性研究进展恶性肿瘤的侵袭、转移特性使其成为癌症患者死亡的首要原因，不仅给治疗带来了一定的难度，更让患者承受了身体及心理的巨大痛苦。
探究恶性肿瘤侵袭、转移的机制，并针对其相关分子标志物寻找抑制靶点，是临床医务工作者及基础医学研究者面临的巨大挑战。
恶性肿瘤的侵袭、转移机制是一个多方面因素相互作用的复杂过程，包括了肿瘤细胞自身生物学行为、肿瘤细胞生存的微环境、及各种细胞因子、信号通路等因素。
上皮-间质转化是近年来肿瘤侵袭、转移领域的研究热点，而上皮型钙黏蛋白是上皮-间质转化过程中一种主要的蛋白标志物，更好的理解上皮型钙黏蛋白与上皮-间质转化的关系及它们在癌症进展中所涉及的机制，能够为晚期转移性肿瘤治疗及预防的相关研究提供理论及实验依据。
因此本文就上皮-间质转化与肿瘤侵袭、转移的研究作一综述。
Abstract：The invasion and metastasis of malignant tumor make it the leading cause of death in cancer patients.It not only brings some difficulties to the treatment，but also endures great physical and psychological suffering.To explore the mechanism of invasion and metastasis of malignant tumor and find the target of inhibition against its related molecular markers is a great challenge for clinical medical workers and basic medical researchers.Malignant tumor invasion and metastasis mechanism is a complex process of interaction of many factors，including the biological behavior of tumor cells themselves，the microenvironment of tumor cells survival，and various cytokines，signaling pathways and other factors.Epithelial-mesenchymal transition （EMT）is a hotspot in the field of tumor invasion and metastasis in recent years.E-cadherin is a major protein marker in EMT，and better Understanding the relationship between E-cadherin and EMT and their mechanisms involved in cancer progression can provide theoretical and experimental evidence for the research on the treatment and prevention of advanced metastatic tumors.Therefore，this article reviews E-cadherin and tumor invasion and metastasis.Key words：E-cadherin；Epithelial-mesenchymaltransition；Tumor；Invasion；Metastasis侵袭、转移是恶性肿瘤致患者死亡的首要原因。
Ezrin和E-Cadherin在肺癌中的表达及意义的开题报告引言：肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，对人类健康和社会经济都造成了严重影响。
早期肺癌的诊断和治疗是降低肺癌病死率的关键所在。
近年来，越来越多的研究表明，肺癌的发生和发展与多种分子的表达异常密切相关，这些分子的表达状态与肿瘤的恶性程度以及预后密切相关。
本研究旨在探讨 Ezrin 和 E-Cadherin 在肺癌中的表达及其意义。
一、 Ezrin 的概述Ezrin 是一种跨膜蛋白，属于 ERM 家族（Ezrin、Radixin 和 Moesin）。
它在细胞质骨架（cytoskeleton）重要作用，参与细胞形态的维持、细胞膜与质膜的互动和细胞信号转导等过程。
Ezrin 在肿瘤发生和发展过程中发挥了重要作用，被认为是一种肿瘤相关蛋白（tumor-associated protein）。
二、Ezrin 在肺癌中的表达及其意义研究表明，肺癌组织中 Ezrin 的表达水平明显升高，Ezrin 的表达水平与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、预后等指标均有关联。
Ezrin 可能通过影响细胞增殖、迁移和侵袭等过程来促进肺癌的发生和发展。
此外，Ezrin 的表达还与肺癌患者的预后密切相关，高表达的 Ezrin 可能预示着较差的预后。
三、E-Cadherin 的概述E-Cadherin 是一种细胞间粘附分子，广泛存在于生物体内各种组织和细胞上，其功能是维持细胞间的稳定粘附联系。
当 E-Cadherin 表达异常时，细胞间的粘附能力减弱，会促进肿瘤细胞的浸润和迁移，从而促进肿瘤的发生发展。
四、E-Cadherin 在肺癌中的表达及其意义肺癌组织中 E-Cadherin 的表达水平常常降低，可能是肺癌侵袭和迁移的一个重要因素。
某些研究表明，E-Cadherin 表达水平与肺癌的淋巴结转移和预后密切相关。
因此，通过研究 E-Cadherin 的表达状态，可以更好地了解肺癌的发生和发展过程。
T-cadherin在胃癌中的表达及意义的开题报告
背景及研究意义：
胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率仍然处于高位。
研究表明，T-cadherin是一种细胞黏附蛋白，其在多种癌症中的表达与肿瘤的生长、浸润和转移有关。
然而，在胃癌中，T-cadherin的表达和作用仍不够清楚，因此有必要对T-cadherin在胃癌中的表达及其意义进
行探究。
研究目的：
本研究旨在研究T-cadherin在胃癌中的表达情况，并探讨其在胃癌
发生和发展过程中的作用及意义。
研究内容：
1.收集胃癌患者组织标本，采用免疫组织化学方法检测T-cadherin
在胃癌中的表达情况，并与正常组织对比；
2.通过文献综述，梳理T-cadherin在其他癌症中的表达情况和作用；
3.从分子水平进一步探讨T-cadherin在胃癌发生和发展过程中的作用，包括以T-cadherin作为治疗靶点的潜在治疗价值。
预期成果：
1.得出T-cadherin在胃癌中的表达情况；
2.分析T-cadherin在胃癌发生和发展过程中的作用及其意义；
3.提出T-cadherin的潜在治疗价值，为胃癌的发病和治疗提供新的
思路。
研究意义：
本研究有助于深入了解胃癌的发病机制，为胃癌的治疗提供新的靶点和策略。
同时，本研究还有望为T-cadherin在其他癌症中的研究提供参考和借鉴。
TFF－３、E－cadherin和VEGF的表达与胃癌的发生、浸润和转移的相关性研究摘要】目的探讨肠三叶因子(TFF－３)、E－钙粘蛋白(E－cadherin)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达与胃癌的发生、浸润和转移的相关性.方法采用免疫组化方法检测８０例胃癌患者(胃癌组),５０例癌旁正常组织(对照组)中TFF－３、E－cadherin和VEGF的表达情况.结果胃癌患者组织中TFF－３ (６２．５％vs．４２％)和VEGF(７３．７５％ vs．４４％)表达水平显著高于对照组(P＜０．０５),E－cadherin(３６．２５％ vs．９０％)水平显著低于对照组(P＜０．０１);TFF－３、Ecadherin和VEGF的表达与胃癌患者性别、年龄及胃癌分化程度、瘤块大小无相关性(P＞０．０５),与胃癌TNM 分期、浸润程度、淋巴结转移及远处转移相关(P＜０．０５,P＜０．０１).结论TFF－３、E－cadherin和VEGF的表达与胃癌的发生、浸润和转移密切相关. 【关键词】胃癌;肠三叶因子;E－钙粘蛋白;血管内皮生长因子【中图分类号】R７３０【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０７４０－０２胃癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,其发生发展是一个多阶段、多步骤的复杂过程[１],目前临床上不仅缺乏早期准确的筛查手段,又缺乏术后降低胃癌的浸润和转移风险的治疗方法[２].肠三叶因子３(TFF３)属于肠三叶因子家族,是胃肠道黏膜中一个重要的细胞因子[３].血管内皮生长因子(VEGF)是一类最重要的血管形成因子家族[４],能增加血管通透性,使肿瘤血管形成增加,从而促进肿瘤发展和转移.本研究应用免疫组化方法分别检测胃癌患者组织和癌旁组织中TFF－３、E－cadherin和VEGF表达情况,探讨三者与胃癌发生、浸润以及转移的关系.１资料与方法１．１患者一般资料及入选标准筛选收集我院病理科２００８年４月至２０１４年１２月８０例胃癌患者术后的组织标本,从中选取５０例癌旁正常组织(要求距离癌组织大于５．５cm).其中男性５４例,女性２６例,年龄３７岁－７９岁,平均年龄６２．３４岁;其中高－中分化胃癌１９例,低分化腺癌６１例;有淋巴结转移４９例,无淋巴转移３１例;根据国际抗癌联盟(UICC,２０１１)TNM 分期标准[５]:Ⅰ期１３例,Ⅱ期２９例,Ⅲ期２４例,Ⅳ期１４例.全部病例术前均未进行任何化疗.１．２主要试剂及仪器免疫组化超敏SP试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司),DAB显色试剂盒(北京中衫金桥生物技术有限公司),兔抗人TFF－３单克隆抗体(SantaCruz,USA),兔抗人E－cadherin单克隆抗体(SantaCruz,USA),兔抗人VEGF单克隆抗体(SantaCruz,USA),通用型辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(北京中衫金桥生物技术有限公司),超薄切片机(瑞典LKBIII型),光学显微镜(日本Olympus),微型移液器(德国eppendorf公司),切片漂烘处理仪(QP－B２型,安徽电子科学研究所).１．３检测方法及结果判定免疫组化SP法检测胃癌组织和癌旁组织中TFF－３、E－cadherin和VEGF蛋白的表达情况,严格按照试剂盒说明进行操作, 阳性对照用已知的阳性组织切片,阴性对照用PBS代替一抗. １．４统计学方法所有实验数据均独立重复检测３次,使用SPSS１９．０统计软件对数据进行分析,采用χ２检验对TFF－３、E－cadherin和VEGF在胃癌及癌旁组织中的表达情况进行分析,P＜０．０５为差异有显著的统计学意义,P＜０．０１为差异有极显著的统计学意义.２结果２．１胃癌组织和癌旁正常组织中TFF－３、E－cadherin 和VEGF蛋白的表达情况２．２胃癌组织中TFF－３、E－cadherin和VEGF蛋白的表达与临床病理资料的相关性分析３结论胃癌是全世界第三大最常见的恶性肿瘤,占肿瘤致死人数的第二位,据统计大部分的胃癌患者死于放化疗后的复发和转移[６].目前针对胃癌的肿瘤标志物不仅缺乏组织特异性,而且对临床病理学资料的统计没有科学的指导意义,因此,寻找与胃癌发生、发展及预后相关的标志物至关重要. 肠三叶因子３(TFF３)属于肠三叶因子家族,是胃肠道黏膜中一个重要的细胞因子,在正常胃黏膜组织中TFF３呈低表达或不表达,但其表达量在胃癌发生时明显增加.研究发现[７]其通过参与多种细胞信号转导途径(如MAPK/ERK、PLC/PKC、EGFR等)促进肿瘤细胞迁移及肿瘤血管的生成.血管内皮生长因子(VEGF)是一类最重要的血管形成因子家族,能增加血管通透性,使__________肿瘤血管形成增加,从而促进肿瘤发展和转移.参考文献[１]张绪良,黄丹青．LOX、VEGF在胃癌进展中的作用关系[J]．胃肠病学和肝病学杂志,２０１４,２３(１２):１４０６－１４０９．[２]董鳞,燕善军．VEGF－C及CD１０５在胃癌侵袭和转移中的作用研究[J]．胃肠病学和肝病学杂志,２０１４,２３(３):２４１－２４３．[３]张蓉,闫再宏,张俊英,等．幽门螺杆菌相关性胃溃疡与胃癌中NF－κB、TFF３的表达及意义[J]．胃肠病学和肝病学杂志,２０１３,２２(２):１３０－１３２．[４]刘长兵,吴继锋．胃癌中TGF－β１、HIF－１α、VEGF的表达及临床意义[J]．临床与实验病理学杂志,２０１３,２９(７):７３３－７３６．[５]周红凤,付冬伟,胡晓薇,等．胃癌组织中的MUC１和VEGF表达及其意义[J]．现代生物医学进展,２０１４,１４(２５):４９５０－４９５３．[６]卢月月,谢琼,易宏锋,等．LOX 与C－erB－２在胃癌中的表达及在浸润转移中的作用[J]．临床和实验医学杂志,２０１４,(１６):１３３７－１３３９．[７]张运贵,黄咏梅,张树民,等．E－cadherin、Survivin在胃癌及癌旁组织中的表达及临床意义研究[J]．中华临床医师杂志(电子版),２０１３,(１９):８６７０－８６７４．[８]李春辉,王竹君,刘海旺,等．细胞骨架蛋白４．１N 与E－cadherin、β－catenin在胃癌中的表达及其临床意义[J]．肿瘤防治研究,２０１４,４１(７):７９４－７９８．。
开题报告课题名称：E钙黏蛋白在胃癌侵袭转移的影响课题负责人：负责人所在单位：**医学院填表日期：20**年7月1.选题的来源、目的、意义和基本内容1.1 选题来源胃癌( gastric cancer)是一个全球性的疾病，在癌症相关死亡中列第2位[1]，近年来全球新增患者约870, 000 例，死亡人数超过630, 000 例[2]。
胃癌严重危害着我国国民的健康，高居消化道恶性肿瘤发病率、死亡率之首，而且是我国癌症患者死亡的主要疾病之一。
经过医学界几代人数十年的不懈努力，尤其是近10年来影像学诊断及综合治疗手段不断提高，胃癌的疗效已获得了明显的进步，但不可否认，其总体治愈率仍难以令人满意，死亡率居高不下，大多数患者仍死于胃癌的局部复发或远处转移[3,4]。
究其原因，一方面是与我国国民经济水平不高、大众保健意识薄弱等原因导致的早期胃癌检出率低有关，另一方面也表明现有的进展期胃癌的治疗方式包括扩大切除范围及淋巴结清扫范围、术后化疗均无法使5年以上生存率显著提高，对于病期较晚的进展期胃癌，肿瘤给机体带来的往往已不再是一个局部问题,学术界对此初步达成了两个共识：①单纯外科手术无法达到生物学意义上的根治，即便扩大切除和淋巴结清扫范围，仍然如此；②未出现远处转移的胃癌患者，姑息切除的效果较之未手术者好。
能否根治性切除是胃癌患者最重要的预后因素之一，直接影响预后[5，6]。
但是手术对于进展期胃癌的治疗效果并不理想，术后5年生存率往往较低，特别是对于ⅢB 和Ⅳ期的晚期胃癌患者，往往只能进行姑息性手术，术后局部复发及转移的发生率仍可高达60% 以上[7]，是治疗失败的主要原因。
大量事实证明，恶性肿瘤病变初期的治愈率是相当高的[8]。
所以治愈肿瘤的关键是早期诊疗技术的成熟和实施。
分子生物学理论和技术在胃癌研究工作中的应用，使得人们从基因分子水平对胃癌的发生、诊断、治疗有了新的思路。
因此，从分子水平上探究胃癌侵袭、转移的机制，提高早期胃癌的检测水平，具有重要的学术价值和临床意义。
最近的研究表明，肿瘤的转移是一个涉及多基因、多分子水平改变的复杂过程,包括瘤细胞的脱落、迁移、粘附、生长等不同步骤。
从原发部位脱落和向它处迁移,需要瘤细胞间粘附力降低[9,10]。
细胞粘附分子家族是介导细胞粘附作用的一大类分子,尤以上皮钙粘蛋白(epithelial-cadherin,E-cad)在肿瘤转移中的作用令人瞩目。
上皮型钙粘蛋白(E-cad)广泛分布于上皮组织，是基因CDH1编码的一类介导细胞-细胞间相互粘附、具有维持组织结构完整性和极性的钙离子依赖性跨膜糖蛋白，主要介导同种细胞间粘附反应。
相对分子量为120 KD，基因定位于染色体16q22.1。
E-cad的前体是135 KD的多肽，合成后很快在高尔基体上加入碳水化合物成为成熟的多肽并被释放到细胞表面并迅速定位于细胞接触，从而介导相邻细胞间的同种连接。
在细胞外钙离子参与下介导同种亲和性细胞间的粘附和细胞与细胞外基质的粘附，保证上皮细胞紧密有序聚集，抑制移动。
当其表达下调或功能障碍时，将使同种细胞失去粘附，对于上皮源性肿瘤而言，则意味着肿瘤细胞具备侵袭性生长的特点，并容易从原发病灶脱落分离，向局部淋巴结转移或远处转移[11,12]。
DNA甲基化是指DNA双螺旋中胞嘧啶核苷的嘧啶环5位碳原子发生甲基化，并与其3'端的鸟嘌呤形成CpG，且在双链对称出现，60%的表达基因的启动子内含有CpG重复序列，这种富含CpG序列的DNA片段即被称为CpG岛。
近来研究出甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法,其原理是用亚硫酸氢盐对DNA进行处理后，DNA中的C转变为U，而如果被检测基因已经发生CpG岛甲基化，则不能发生这种转化，设计不同的引物做PCR,即可检测出这种差别，从而确定目的基因有无CpG岛甲基化，此方法DNA需要量极少，敏感性高，为基因CpG岛甲基化研究提供了有效的方法。
目前认为：基因表达与CpG岛甲基化程度呈负相关[13,14]。
DNA甲基化异常分为甲基化增强和甲基化减弱两种类型，可引起与细胞增殖和分化等有关的基因表达异常，导致细胞恶变，最后形成肿瘤。
DNA异常甲基化导致肿瘤发生的可能机制如下[15，16]：首先，在正常情况下非甲基化的CpG岛的高甲基化，可以导致肿瘤抑制基因的失活。
其次，DNA甲基化可以促进肿瘤相关基因的突变，是肿瘤相关基因甲基化促进细胞恶变的一种机制。
另外，癌基因的低甲基化也可能与肿瘤发生有关[17]。
DNA异常甲基化在肿瘤发生中起着极为重要的作用，它主要表现为抑癌基因高甲基化所致的基因失活和原癌基因低甲基化所致的基因激活，引起与细胞增殖、分化相关基因的表达异常，造成细胞恶性变形成肿瘤[18，19]。
由于DNA局部甲基化增强在肿瘤中最常见，与肿瘤的关系比较明确，被认为是肿瘤抑制基因失活的重要途径，研究取得的进展也报道的最多。
1.2研究目的：（1）从DNA、RNA和蛋白水平综合分析胃癌中E- cadherin基因表达（2）阐明E- cadherin在胃癌浸润转移中的作用机制（3）分析胃癌患者临床病理资料，探讨E- cadherin对胃癌预后的影响。
1.3研究意义：目前为止，E-钙粘蛋白在多种癌组织中表达不稳定或低表达，并且与肿瘤细胞低分化相关已得到证实。
但在肿瘤侵袭和转移过程中的作用及其分子调控机制也尚不清楚。
联合检测DNA水平、mRNA水平及蛋白水平的表达，探讨E- cadherin 与胃癌侵袭转移的相互关系，国内外报道较少。
本课题通过研究癌旁正常组织和胃癌中E- cadherin的DNA、RNA和蛋白水平的表达，来探讨E- cadherin在胃癌侵袭、转移构成中的作用机制和调控机制，同时针对临床病理特征的相关性及它们间的相互关系的研究，来探讨E- cadherin在胃癌的浸润和转移中的作用。
以期为胃癌的早期诊断和早期治疗提供理论依据，从而指导临床工作。
1.4基本内容：（1）分别应用免疫组化SP法检测60例胃癌组织和癌旁组织中的E-cad蛋白表达。
（2）应用MSP法检测60例胃癌组织和癌旁组织中E-cadDNA甲基化水平（3）原位杂交检测60例胃癌组织和癌旁组织中的E-cad mRNA表达（4）分析临床病理资料，探讨E- cadherin在胃癌侵袭转移中的作用及对预后的影响。
2 研究方案：2.1 研究材料选取**医学院第一附属医院收集胃癌手术新鲜标本**例（每例标本取材均包括癌组织和癌旁组织，癌旁组织选取距癌6-8cm、肉眼观相对正常处，术前均未行放、化疗，离体时间不超过30分钟），所有癌旁组织标本均未发现肿瘤浸润。
2.2主要试剂鼠抗人E-钙粘蛋白单克隆抗体、SP试剂盒，组织基因组DNA提取试剂盒，TaqDNA聚合酶、DNAMarker。
亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）、氢醌（hydroguinone）。
2.3 研究方法（1）甲基化检测:进行DNA修饰及纯化。
甲基化特异性引物（M）上游引物：5’GGT GAA TTT TTA GTT AAT TAG CGG TAC 3’；下游引物：5’CAT AAC TAA CCG AAA ACG CCG 3’。
非甲基化特异性引物（U）上游引物：5’GGT AGG TGA ATT TTT AGT TAA TTA GTG GTA 3’，下游引物：5’ACC CAT AAC TAA CCA AAA ACA CCA 3’。
甲基化特异PCR反应:反应体系25µl，反应条件:95℃预变性5 min，94℃变性30s,54℃退火30s,72℃延伸70分钟，终末延伸72℃延伸7min。
取10µlPCR产物，加2µl上样缓冲液，混匀加入上样孔中，将同标本的甲基化与非甲基化PCR 产物放同一组进行电泳。
电泳条件：80V，室温下电泳30分钟，观察结果并摄影。
（2）原位杂交检测：石蜡切片经常规脱蜡，固定后加杂交液恒温箱38～42℃过夜，洗涤后，滴加鼠抗地高辛及SABC-AP后染色， 37℃显色20分钟，充分水洗，核固红复染。
（3）免疫组化染色：常规3µm连纹切片、脱蜡，并严格按试刑盒推荐的程序进行DAB显色，苏木素复染、脱水、透明并封片。
用PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。
（4）结果判定：E-cadherin甲基化特异性引物扩增出相应长度(204bp)的片段，判断甲基化阳性；E- cadherin非甲基化特异性引物相应长度(21lbp)的片段，判断甲基化阴性。
E-cadmRNA均采用不加探针标本作阴性对照，采用博士德公司赠送的阳性切片做阳性对照。
E-cadmRNA的细胞浆着色呈蓝色。
E-cad蛋白采用PBS代替一抗作为阴性对照，采用已知的阳性标本作为阳性对照。
染色强度计分与阳性细胞百分比乘积＞3者为阳性染色结果，由两名病理科医师采用双盲原则评定。
（5）随访：采用信函和电话调查的方式进行术后随访，随访时间5年，随访调查问卷内容包含有术后复查情况、有无术后放化疗，有无复发转移，有无新发疾病及合并症等，所有患者每3个月查肿瘤标记物，每6个月行CT检查，每年1次内镜检查。
3 研究时间安排2007.7-2008.4 准备阶段：查阅文献资料，了解研究动态，确定研究内容，完成开题报告，采集胃癌组织及癌旁组织病理标本。
2008.4-2009.4 制定研究方案，确定研究方法，开展研究工作。
2009.4-2013.7 完善研究工作，汇总资料、整理数据，分析取得研究结果。
2013.7-2014.5 撰写研究报告、论文；准备成果鉴定、上报等。
4 参考文献[1] Parkin DM, Bray F, Ferlay J , et a1. Global cancer statistics, 2002 [J] .CancerJ Clin, 2005,55: 74-108.[2] Macdonald JS. Role of post-operative chemoradiation in resected gastric cancer [J]. J SurgOncol, 2005, 90: 166-170.[3]杨少辉,戴冬秋.肿瘤抑制基因甲基化与胃癌[J].中国普外基础与临床杂志，2006，13(5)： 614-616.[4]詹文华胃癌多学科综合治疗模式[J] 中国实用外科杂志，2009，29（9）：722-726.[5]黄炽明万进杜嘉林进展期胃癌的外科治疗[J]广东医药，2005，26（9）：1222-1223.[6]李琛，朱正纲，燕敏Ⅳ期胃癌外科手术治疗的临床价值，[J]上海交通大学学报（医学版）2007，27（5）：569-572.[7]邢会军胃癌的现代外科治疗[J]中国综合临床，2005，21（3）：287-288.[8]詹友庆李威孙晓卫等胃癌外科治疗的远期疗效研究[J]中华外科杂志，2005，49（17）：1109-1113.[9] ITO T, KAWAMURA J, SOMA T, et al. Prognostic analysisof E-cadherin gene promoterhypermethylation in patients with surgically resected ,node-positive , diffuse gastric cancer [J] Clinical Cancer Research , 2004 , 10 : 2784 - 2789.[10] SHIMADA Y, YAMASAKI S , HASHIMOTO Y, et al. Clinical significance ofdysadherin expression in gastric cancer patients[J ] . Clin Cancer Res , 2004 , 10 : 2818 - 2823.[11] Bornman DM，Mathew S,Alsruhe J，HermanJG，Gabrielson E. Methylation of the E-cadherin geneIn bladder neoplasia and innormal urothelial epithelium from elderly individuals Am J Pathol2001,159:831-835.[12] Naito A，Iwase H,Kuzushima T,Nakamura T,etl.Clinical significance of E-cadherinexpression in thyroid neoplasmS.J surg Oncol 2001;76:176-180.[13] To KF,Leung WK,Lee TL,et al.Promoter hepermethylation of tumor-relatedgenes in gastric intestinal metaplasia of patients with and without gastric cancer[J].Int J Cancer,2002, 102(6):623-628[14]李岩,李卉，DNA甲基化与胃癌相关性的研究进展[J]胃肠病学2008，13（11）645-650.[15] Michael WYC, Eagle SHC, Ka FT, et al. Quantitative detection of methylatedSOCS-1 a tumor suppressor gene,by a modified protocol of quantitative real-time methylation-specific PCR using SYBR green and its use in early gastric cancer detection[J]. Biotech Let, 2004, 26: 1289-1293.[16] Reik W, Dean W, Walter J. Epigenetic reprogramming in mam maliandevelopment [J]. Science, 2001; 293(5532):1089.[17] Ahuja N, Issa JP. Aging, methylation and cancer. Histol Histopathol, 2000, 15:835-842.[18]张哗，袁媛胃癌相关的DNA甲基化研究进展[J]世界华人消化杂志 2005， 13(19) ：2349-2354.[19] Craziano F, Arduini F, Ruzzo A, et al. Combined analysis of E-cadherin gene (CDH 1)promoter hypermethylation and E-cadherin protein expression in patients with gastriccancer: implicadons for treatment with demethylating drugs.Ann Oncol 2004, 15(3):489-492.。
