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反相液相色谱中调整流动相组分比例对分离效果的影响黄强;李华勇;刘新国【摘要】用国标法同时测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠,通过改变流动相组分比例,即改变流动相极性,对三种比例所得出的分离效果进行比较,考察了三种组分的保留时间、分离度及拖尾因子等参数变化.试验结果表明:(1)增加甲醇比例,三种待测组分保留时间都提前,且糖精钠的变化最大;(2)增加甲醇比例可以使三种组分的分离度和拖尾因子都变小,同时也可以满足对分离度的要求;(3)综合分析试验所得各参数,得出色谱系统所需最适流动相配比,实现较好的分离效果,试验的精密度也满足要求.【期刊名称】《江西化工》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P39-41)【关键词】液相色谱;流动相;分离度;系统适用性试验【作者】黄强;李华勇;刘新国【作者单位】江西省吉安市质量技术监督检测中心,江西吉安343000;江西省吉安市质量技术监督检测中心,江西吉安343000;江西省产品质量监督检测院,江西南昌33000【正文语种】中文反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种色谱分离模式，是基于样品中的不同组分和固定相之间作用的不同而将各组分分离，具有柱效高、分离能力强、保留机理清楚等特点，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种。
反相色谱系统中的固定相一般采用硅胶表面键合疏水基团，流动相首选甲醇-水系统，在一些大分子物质的分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量的乙腈或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相。
色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个参数。
其中，分离度和拖尾因子是考察分离效果的重要指标。
实际检测中，各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应供试品并达到系统适用性试验的要求。
高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的基质干扰分析及定性确证丁 梅（梅河口市食品药品检验检测中心，吉林梅河口 135000）摘 要：目的：分析食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠测定的基质干扰峰及定性确证。
方法：采用高效液相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠，当以乙酸铵溶液（20 mmol·L-1）+甲醇（95+5）为流动相出现可疑峰时，再以甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，在两种流动相（不同pH值）洗脱下，比较标液中目标峰与样品中可疑峰保留时间的一致性，定性确认样品中的可疑峰是否为目标峰。
结果：基质复杂的样品，单一以一种流动相的保留时间定性，容易出现假阳性情况，而以两种流动相保留时间综合定性验证，才能使样品检测结果更可靠。
结论：采用两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，可有效避免样品基质干扰出现假阳性样品。
关键词：高效液相色谱法；山梨酸；苯甲酸；糖精钠；基质干扰峰；定性确证Analysis and Qualitative Confirmation of Matrix Interference in the Determination of Sorbic Acid, Benzoic Acid, and Saccharin Sodium in Foods by High Performance LiquidChromatographyDING Mei(Meihekou Food and Drug Testing Center, Meihekou 135000, China)Abstract: Objective: To analyze the matrix interference peaks in the determination of sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods and to qualitatively confirm them. Method: The sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods were determined by HPLC. When the suspicious peak appeared in the mobile phase of ammonium acetate solution (20 mmol·L-1)+methanol (95+5), and then the mobile phase of formic acid-ammonium acetate solution (2 mmol·L-1 formic acid-20 mmol·L-1 ammonium acetate)+methanol (92+8) was used to analyze the suspicious peak. Compare the consistency of retention time between the target peak in the standard solution and the suspicious peak in the sample, and qualitatively confirm whether the suspicious peak in the sample is the target peak. Result: For samples with complex matrix, the retention time of one mobile phase alone can easily lead to false positive. However, the comprehensive qualitative verification of the retention time of two mobile phases can make the sample test results more reliable. Conclusion: Using the retention time under the elution of two mobile phases for comprehensive qualitative analysis can effectively avoid the false positive sample caused by sample matrix interference.Keywords: high performance liquid chromatography; sorbic acid; benzoic acid; sodium saccharin; matrix interference peak; qualitative confirmation苯甲酸、山梨酸、糖精钠是食品中应用最广泛、最常见的食品添加剂，在《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）[1]中明确规定了其使用范围和限量，被国家食品安全监管部门列作者简介：丁梅（1970—），女，吉林梅河口人，大专，高级工程师。
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解(转自仪器信息网色谱论坛)苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-1996，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-1996，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-1996和GB/T5009.29-1996 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-1996使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1m ol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
【实验室检测】高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法张宗辉[摘要 ]目的探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法 , 用二极管阵列管检测品 (HPLC －DAD 分析测定 , 外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好 , 相对标准偏差分别为山梨酸 3. 18%、苯甲酸 2. 74%、糖精钠 2. 15%, 加标回收率均在 90% 100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速 , 适用于食品添加剂的测定。
[关键词 ]高效液相色谱法 ; 食品 ; 山梨酸 ; 苯甲酸 ; 糖精钠 [中图分类号 ]O657. 7[文献标识码 ]A[文章编号 ]1006－4028(2011 06－0480－03作者单位 :南充市疾病预防控制中心 (四川南充 637000作者简介 :张宗辉 , 男 , 副主任技师 , 医学检验Pretreatment Methods for Simultaneous Determination of Sorbic Acid , Benzoic Acid and Saccharin Sodium in Different Foods by HighPerformance Liquid ChromatographyZHANG Zong －huiNanchong Municipal Center for Disease Control and Prevention ,Nanchong 637000, Sichuan Province , China．Abstract Objective To establish pre －treatment methods for the simultaneous determination of sorbic acid , benzoic acid and saccharin sodium in different foods by high performance liquid chromatography (HPLC with DAD detection．Methods Different samples were pre －treated with different methods and detected by HPLC with the external standard quantification．Results There was a good linear relationship , the relative standard de-viations were 3. 18%for sorbic acid , 2. 74%for benzoic acid and 2. 15%for saccharin sodium．The recoveries ranged from 90%to 100%for the targeted components．Conclusion The method is simple , rapid , reliable and accurate , which is suitable for the determination of food additives．Key wordshigh performance liquid chromatography ; food ; sorbic acid ; benzoic acid ; saccharin sodium高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠 , 方便简单快捷。
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解-不能不看的精华_.txt16生活，就是面对现实微笑，就是越过障碍注视未来；生活，就是用心灵之剪，在人生之路上裁出叶绿的枝头；生活，就是面对困惑或黑暗时，灵魂深处燃起豆大却明亮且微笑的灯展。
17过去与未来，都离自己很遥远，关键是抓住现在，抓住当前。
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解－不能不看的精华液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-2003，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-2003，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-2003使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/，糖精钠的检测参照GB/T，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2样品前处理的注意事项GB/和GB/在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L) ml，加入%亚铁氰化钾溶液，20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL 测定。
用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。
3检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。
原因如下：液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。
下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。
一、方法原理：该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。
主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。
二、仪器设备：液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。
三、操作步骤：1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。
然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。
2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。
可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。
3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。
常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。
4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。
四、常见问题及解决方法：1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。
2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。
这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。
3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。
4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。
不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响摘要：目的：采用RP-HPLC法对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠进行分离。
研究不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响，建立较优的色谱流出曲线。
方法：采用不同型号C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：分别采用0.8、1.0以及1.2 mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
检测波长：254nm、230 nm。
结果：流速、流动相、波长对分离均有不同程度的影响。
关键词：高效液相色谱，色谱条件，色谱分离，影响添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，它直接关系到人们的身体健康，这些添加剂的长期过量食用对人体有一定危害,在我国食品添加剂使用卫生标准[1](GB2760-1996)中对这些添加剂的使用范围和最大使用限量均有明确规定。
目前，高效液相色谱（HPLC）作为化学分离分析的一种重要手段得到广泛应用。
高效液相色谱分析实现了分析速度快、分离效率高、样品用样量少且灵敏度高和操作自动化。
采用RP-HPLC法对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠进行分离。
研究不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响，建立较优的色谱流出曲线具有重要意义。
1 仪器与试剂1.1仪器：Shimadzu高效液相色谱仪（SPD-10A VP紫外-可见检测器、LC-6A 高压泵、CTO-10AS VP柱温箱〈含7725i型手动进样器〉），浙大智达N2000工作站；Sartorius CP225D型电子天平；Millipore Milli-Q型纯水仪；Sartorius BP-20型pH计。
1.2试剂：甲醇为色谱纯；苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠对照品（Dr. Ehrenstorfer 公司提供）；其余试剂均为分析纯。
2 材料与方法：2.1色谱条件色谱柱：不同型号C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：分别采用0.8、1.0以及1.2 mL/min，柱温：30℃；进样量：10μL。
检测波长：254nm、230 nm。
3 结果与分析3.1 不同波长对分离的影响3.1.1波长对半峰宽、保留值、理论塔板数、分离度的影响由表一可看出，在检测波长分别为230nm 和245nm ，流速为1.0ml/min ，流动相0.02mol/L 乙酸铵∶甲醇比例为82:18、85：15、88：12时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值、理论塔板数以及分离度的变化不大，说明波长对苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值、理论塔板数以及分离度影响不大。
3.1.2波长对峰面积的影响由表一看出，不同流动相下，在波长为230nm 时苯甲酸、山梨酸、糖精钠的峰面积比在254nm 时的峰面积要大许多，表明波长对峰面积影响显著。
同一种物质对不同波长光的吸光度不同，在波长为230nm 时苯甲酸、山梨酸、糖精钠吸光度大于在254nm 时的吸光度。
表一：不同波长对分离的影3.2 流速对分离的影响3.2.1流速对半峰宽、保留值、理论塔板数的影响流动相比例波长(nm) 半峰宽 保留值 理论塔板数 分离度 平均峰面积苯甲酸 山梨酸糖精钠苯甲酸山梨酸糖精钠苯甲酸糖精钠山梨酸R1 R2 苯甲酸 山梨酸 糖精钠82:182540.107 0.138 0.098 2.612 3.206 3.013 3301 5237 2990 2.3 0.96 404006 885600 354049230 0.106 0.131 0.097 2.607 3.163 3.061 3351 5517 3230 2.6 0.53 3721749 435656 2408864 85:152540.092 0.096 0.099 2.777 3.089 3.434 5048 5736 6666 22.1 416059915127372397230 0.092 0.0950.12.7723.082 3.421 5029 5831 6484 1.952 3806739 459759 2408277 88:122540.098 0.098 0.098 3.087 3.529 4.038 5497 7184 76032.7 2.9 405044 899624 359094 2300.093 0.10.1063.183.623 1.172 6477 7272 85822.73.2845622138164527348由表二可看出，在三个比例不同的流动相下，流速分别为流速1：0.8ml/min、流速2：1.0ml/min、流速3：1.2ml/min时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的半峰宽、保留值和理论塔板数均随流速的增大而减小，柱效减小。
3.2.2流速对分离度的影响由表二可知，流速对分离度影响不大。
无论流速怎样改变，在流动相比例为82：18时，糖精钠与山梨酸分离度均小于1.5，不利于糖精钠与是山梨酸分离。
其他情况下分离度均大于1.5，分离较好。
表二流速对分离的影响检测波长：254nm流动相比例流速ml/min半峰宽W1/2保留值tR理论塔板数n分离度R 苯甲酸山梨酸糖精钠苯甲酸山梨酸糖精钠苯甲酸山梨酸糖精钠R1 R282:18 0.80.127 0.174 0.119 3.249 3.982 3.744 3626 2901 5484 2.4 0.951.00.107 0.138 0.0982.6123.206 3.013 3301 2990 5237 2.3 0.96 1.20.093 0.123 0.093 2.188 2.678 2.52 3067 2626 4068 2.1 0.885:15 0.80.11 0.114 0.120 3.471 3.861 4.293 5516 6355 7090 2 2.11.0 0.092 0.095 0.1002.7723.082 3.421 5029 5831 6484 2 2 1.2 0.081 0.084 0.087 2.326 2.585 2.865 4568 5247 6008 1.9 1.988:12 0.8 0.113 0.117 0.124 3.748 4.276 4.853 6095 7400 8486 2.7 2.81.0 0.098 0.098 0.098 3.087 3.529 4.038 5497 7184 76032.7 2.9 1.2 0.088 0.087 0.097 2.6423.017 3.475 4994 6662 7110 2.5 2.9（注：流动相0.02mol/L乙酸铵∶甲醇比例为82：18时，R1为苯甲酸与糖精钠的分离度，R2为糖精钠与山梨酸的分离度，流动相比例为85：15与88：12时，R1为苯甲酸与山梨酸的分离度，R2为山梨酸与糖精钠的分离度，下同。
）3.3 不同流动相对分离的影响3.3.1流动相对半峰宽的影响由表三可看出，在检测波长为230nm与流速为 1.0ml/min条件下，流动相：0.02mol/L乙酸铵:乙腈为85：15时半峰宽最小，其次是88：12，半峰宽最大时是流动相比例为82：18。
在检测波长为245nm与流速为别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下，半峰宽同样在流动相比例为85：15时最小，其次是88：12，半峰宽在流动相比例为82：18时最大。
说明对半峰宽最适宜的流动相0.02mol/L 乙酸铵与乙腈比例是82：18.3.3.2流动相对保留值与理论塔板数的影响由表三可知，检测波长为230nm,流速为1.0ml/min条件下与检测波长为254nm，流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下时，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保留值与理论塔板数随乙酸铵与乙腈比例82：18、85：15、88：12逐渐增大，表明乙酸铵与乙腈混合流动相中乙酸铵比例增大，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保留值和理论塔板数也增大，柱效增大。
3.3.3流动相对分离度的影响3.3.3.1对分离度R1的影响同样由表三可看出，检测波长为230nm,流速为1.0ml/min条件下与检测波长为254nm，流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下时，流动相0.02mol/L 乙酸铵:乙腈=85:15时分离度R1最小，流动相0.02mol/L乙酸铵:乙腈=82：18时分离度R1较大，流动相0.02mol/L乙酸铵:乙腈=88：12时R1最大，且均大于1.5，有利于混合标样的分离。
3.3.3.2对分离度R2的影响同样由表三可看出，检测波长为230nm,流速为1.0ml/min条件下与检测波长为254nm，流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下时，分离度R2随乙酸铵与乙腈比例82：18、85：15、88：12逐渐增大，表明乙酸铵与乙腈混合流动相中乙酸铵比例增大，分离度R2也增大。
表三不同流动相对分离的影响流速(ml/min) 流动相比例半峰宽W1/2保留值tR理论塔板数n分离度R苯甲酸山梨酸糖精钠苯甲酸山梨酸糖精钠苯甲酸山梨酸糖精钠R1 R21.0 (波长230nm) 82:18 0.106 0.131 0.097 0.607 3.063 3.161 3351 3230 55172.6 0.5 85:15 0.092 0.095 0.100 2.7723.082 3.421 5029 5831 6484 1.95 2 88:12 0.093 0.100 0.106 3.180 3.623 1.172 6477 7272 8582 2.7 3.20.8 82:18 0.127 0.174 0.119 3.249 3.982 3.744 3626 2901 5484 2.4 0.95 85:15 0.110 0.114 0.12 3.471 3.861 4.293 5516 6355 7090 2 2.1 88:12 0.113 0.117 0.124 3.748 4.276 4.853 6095 7400 8486 2.7 2.81.0 82:18 0.107 0.138 0.0982.6123.206 3.013 3301 2990 5237 2.3 0.96 85:15 0.092 0.096 0.099 2.777 3.089 3.434 5048 5736 6666 2 2.1 88:12 0.098 0.098 0.098 3.087 3.5294.038 5497 7184 7603 2.7 2.91.2 82:18 0.093 0.123 0.0932.188 2.678 2.52 3067 2626 4068 2.1 0.8 85:15 0.081 0.084 0.087 2.326 2.585 2.865 4568 5247 6008 1.9 1.9 88:12 0.088 0.087 0.097 2.6423.017 3.475 4994 6662 7110 2.5 34、样品分析由于各种物质在一定的色谱条件下均有确定的保留值，因此保留值可作为一种定性指标，通过与表一数据与样品在各种条件下所得的保留值相对照，可较准确地将样品进行定性分析。
