乙肝病毒的检测课件

实验3 ELISA法测定乙肝
（2）双抗体夹心法测定抗原
A.
将抗体吸附于固相表面;
B.
加抗原，形成抗原-抗体复合物;
C. 加酶标抗体;
D. 洗液洗去多余 未结合酶标抗体
E. 加底物显色。底物的降解量与抗原量有关。
实验3 ELISA法测定乙肝
（3）竞争法测定抗原 A. 将抗体吸附在固相载体表面; B.加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体； 对照只加入酶标 抗原； C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
孔OD值。
实验3 ELISA法测定乙肝
结果判断：
样品OD值
阴性对照平均OD值
2.1
• 判断为阳性，否则为阴性。
• 阴性对照OD值低于0.05时作0.05计算， 高于0.05按实际OD值计算。
实验3 ELISA法测定乙肝
HBV抗原抗体检测结果的临床分析
＋
－－
－ － HBV感染或无症状携带
＋
＋－
－ － 急慢性乙肝或无症状携带
实验3 ELISA法测定乙肝
酶标记免疫技术
• 以酶作为标记物，通过显色反应指示抗原-抗体反 应的标记技术称为酶免疫技术。
• 可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定技术两 大类。目前应用最广的为酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）,是 免疫测定技术的代表。
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配
体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检
测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。
实验3 ELISA法测定乙肝

了解肝脏损害程度 明确病因 判断病情发展
SEB-PM004/01-7/2010
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YOU
SUCCESS
2019/4/20
SEB-PM004/01-7/2010
最常用的肝功能检测指标
丙氨酸氨基转移酶（ALT） 体现肝脏受损情况最灵敏的指 标。肝炎活动时，可见ALT显 著升高,患者升高的ALT水平通 常用高于健康人ALT正常范围 上限（ULN）的倍数来表示 天门冬氨酸氨基转移酶（AST） 反映肝脏损伤，只有当肝脏发生 严重坏死或损伤时，血中AST活性 才会增高
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慢性乙肝病毒感染分期
并非所有的慢性乙肝病毒感染者都需要治疗，治疗 也需把握适宜时机！
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慢性乙肝患者抗病毒治疗指征
（HBeAg阳性患者）
HBV DNA≥105 拷贝/毫升 ALT≥2倍正常值上限者或肝活检显示有较明显的炎 症坏死（Knodell HAI≥4或≥G2）
HBeAg阳性慢性乙肝患者如同时符合以上 两个条件时，应考虑抗病毒治疗
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慢性乙肝患者抗病毒治疗指征
（HBeAg阴性患者）
HBV DNA≥104 拷贝/毫升 ALT≥2倍正常值上限者或肝活检显示有较明显的 炎症坏死（Knodell HAI≥4或≥G2）
HBeAg阴性慢性乙肝患者如同时符合以上 两个条件时，应考虑抗病毒治疗
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确诊
“您的情况是慢性 乙型肝炎，即俗称 的
“大三阳”
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慢性乙肝的诊断标准
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HBcAg与抗HBc
❖ 抗HBc IgM是HBV感染后较早出现的抗体， 在发病第一周即可出现，持续时间差异较大， 多数在6个月之内消失。高滴度的抗HBc IgM 对诊断急性乙肝或慢性乙肝急性发作有帮助。 抗HBc IgG表示过去感染，高滴度表示现症 感染，常与HBsAg并存；低滴度表示过去感 染，常与抗HBs并存。单一抗HBc阳性者可 以是过去感染，亦可以是低水平感染。
5、剖宫产分娩不能降低HBV的母婴传播率。
6、早产儿一般待体重≥2000g后行相关免疫接 种。
7、如果新生儿与HBsAg阳性成员密切接触， 就必须注射HBIG；不密切接触，不必注射。 （精液不能引起胎儿感染HBV）
8、HBsAg阳性孕妇的新生儿定期随访。
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乙型肝炎母婴阻断
❖ 单用乙型肝炎疫苗阻断母婴传播的阻断率为 87.8%(Ⅱ-3)。对HBsAg阳性母亲的新生儿， 应在出生后24 h内尽早（最好在出生后12 h） 注射乙型肝炎免疫球蛋白 (HBIG)，剂量应 ≥100 IU，同时在不同部位接种10 μg重组酵 母或20μg中国仓鼠卵母细胞 (CHO) 乙型肝炎 疫苗，在1个月和6个月时分别接种第2和第3 针乙型肝炎疫苗，可显著提高阻断母婴传播 的效果 (Ⅱ-3)。
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HBeAg与抗HBe
❖ 急性HBV感染时HBeAg的出现时间略晚于
HBsAg。HBeAg与HBV DNA有良好的相关性，
因此，HBeAg的存在表示病毒复制活跃且有较
强的传染性。HBeAg消失而抗HBe产生称为血
清转换。抗HBe阳转后，病毒复制多处于静止状
态，传染性降低。长期抗HBe阳性者并不代表病

乙型肝炎病毒（电镜） DANE氏颗粒直径42NM 核心直径27NM
㈠乙肝六项检测
参考值：ELISA法为阴性 放射免疫分析（RIA）法为阴性
㈡HBV抗原抗体系统
HBsAg：表面抗原，是HBV的外壳，不含DNA, 其本身不具有传染性，但常与HBV同时存在，常被 作为传染性标志之一。是HBV感染的基本标志， 也是最早出现的血清学标志之一。
临床意义：YMDD是HBV反转录酶发挥催化活性所必需 的关键结构。
目前临床上广泛使用的胞苷类似物拉米夫定等抗病毒 药物，作用靶位主要是HBV反转录酶，通过与底物 dNTP竞争结合以抑制HBV的反转录和复制。
当病毒YMDD中M突变为异亮氨酸（I）或缬氨酸（V）， 就可能引起抗HBV类药物的药效丧失，从而产生耐药 性。
形态与基因结构
●小球形颗粒 空心包膜，不含核酸
●管形颗粒 两者均为过剩的病毒外壳，仅含HBsAg，无感染性
“空心汤团”
Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAP HBeAg
HBV Viral Genome Organization
HBcAg HBeAg
约6个月，提示HBV 复制，是急性感染的重要指标， 也是慢性活动性肝炎的重要标志 抗-HBc IgG：在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴 随感染者终生存在，是既往感染过HBV的指标。
HBV抗原抗体系统
HBeAg阳性： 与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早 意义：表示乙肝处于活动期，并有较强的传染性。 HBsAg持续阳性可转为慢性或肝硬化。孕妇阳 性可垂直传播。
YMDD测定结果为临床抗HBV类治疗用药提供了实验室 诊断依据。