1 乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定
一．名词简介
1. 三聚氰胺理化性质
三聚氰胺：英文名“melamine”，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3；分子量：126.12；物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；相对密度：1570kg/m³；熔点：在常压下，354℃分解；升华温度：300℃；溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性。
化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。
2. 乳制品
是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类（杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳）、乳粉类（全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿乳粉、其他配方乳粉）、含乳饮料类、炼乳类（全脂无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳；配方炼乳）、乳脂肪类（稀奶油、奶油、无水奶油）、干酪类（原干酪；再制干酪）、乳冰淇淋类（乳冰淇淋、乳冰）和其他乳制品类（干酪素、乳糖、乳清粉、浓缩乳清蛋白）等。
二．高效液相色谱法测定
1. 原理
试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液，经高效液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。
2 试剂
方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为GB/T 6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。
2.1 磺基水杨酸。
2.2 柠檬酸。
乳品中三聚氰胺快速检测解决方案
作者：暂无
来源：《食品安全导刊》 2010年第11期
张德红 扶胜 杜祥乐 北京望尔生物技术有限公司
自2008年三聚氰胺事件爆发以来，乳品安全直备受关注。为了加大对乳品行业的监管力度，使中国乳品行业迅速恢复元气，相关职能部、]出台了多项措施：在质量控制方面，要求对奶源做到严格把关，有效提高乳品质量安全系数。因此，在奶站收奶环节，企业对原料奶的检测把关显得尤为重要，同时为保证牛奶不发生腐败变质的现象，必须在最短的时间内对其进行检测并立即入罐冷藏，这些都对乳品的检测技术提出了挑战。常规的三聚氰胺残留量检测方法主要有液相色谱／质谱法(LC-MS)、高效液相色谱(HPLC)、液相色谱串联质谱( LC-MS-MS)等，这些方法因为存在仪器设备昂贵、检测过程繁琐、检测时间太长和对检验人员的技能要求高等局限，所以不适合现场监控和大量样品的筛查，在鲜奶收购环节使用不现实。鉴于此，如何选择 种快速、低成本的检测方法，构建从奶站、企业到政府监管的安全检测网络已成为当前迫切需要解决的问题。
目前，快速筛查技术主要有两大类：生物分析技术和化学分析技术。生物分析技术又包含免疫学方法，该方法具有检出限低、准确性好、灵敏度高、重现性好等特点，是现在和未来快速筛查技术发展的主流技术，非常适合对原料乳的快速检测。依托此项技术，北京望尔生物技术有限公司（以下简称北京望尔）开发出三聚氰胺酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡等检测产品，为广大乳品企业及相关机构提供了有效的三聚氰胺快速检测方案。
三聚氰胺试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的三聚氰胺将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体，在加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。 牛奶样本前处理：吸取牛奶液体400uL加入800uL提取液，涡动，取上层清液10 0111加入500uL稀释液混匀用于检测。
FOOD INDUSTRY·
97原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法 楚雪 郑州谱尼测试技术有限公司众所周知，三聚氰胺是一种常见的工业原料，在纺织、橡胶、塑料等行业得到了广泛的应用，而且它的含氮量极高，如果添加到原料乳以及乳制品中，可以造成数据假象，让人们误以为里面含有较多的蛋白质成分。典型的三聚氰胺检测方法三聚氰胺是一种无色无味的晶体，低毒，微溶于乙醇，可溶于甲醇、甘油、乙酸，不溶于乙醚、苯酚。目前，三聚氰胺的主要用途是加工塑料、胶水、涂料和阻燃剂。虽然三聚氰胺毒性较低，但是对于幼儿而言，如果一次性摄入量过多，就会导致肾功能衰竭。我国明确规定婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺的含量不得超过１．０ｍｇ／Ｌ，其他食品中三聚氰胺的含量不得超过２．０ｍｇ／Ｌ。色谱检测。第一种，高效液相色谱法。这种方法简称ＨＰＬＣ法，适用的范围特别广，而且分析速度很快，能够实现自动化检测，是最普遍的检测方法。目前人们已经加大了研究的力度，并且对检测条件进行了优化，明显缩短了检测时间，而且高效液相色谱法日渐成熟，已经成为了人们检测三聚氰胺的首选方法，具体的检测内容会在本文的第二章节详细介绍。第二种，气相色谱质谱法。这种方法简称ＧＣ－ＭＳ法，灵敏度很高，但是由于三聚氰胺的分子质量较小，不容易挥发，所以需要进行衍生处理，提高挥发性，这一过程会造成一定的样品损失。如果使用硅烷进行衍生处理，可以降低外界环境的干扰，而结合反吹技术，可以省略固相萃取柱净化的环节，这样简化了处理流程。第三种，液相色谱－串联质谱法。这种方法使用三氯乙酸溶液对目标分析物进行提取，然后通过离子固相萃取柱净化，在对三聚氰胺进行检测时，方法检测低限为１８μｇ／ｋｇ，与上述两种方法相比，这种方法更加便捷，并且可以使用外标法和内标法进行测量。光谱检测。第一种，拉曼法。ＳＥＲＳ技术可以增强金属表面附着物质的散射信号，并且搜集到具体的结构信息，所以检测人员可以建立一套拉曼光谱扫描系统，对原料乳与三聚氰胺颗粒的混合样本进行检测，就会发现拉曼强度与三聚氰胺的比例存在明显的线性关系。在具体的检测过程中，需要事先对原料乳以及乳制品的样品进行提取，使用三氯乙酸溶液，浓度在１３％左右，这样能够除去样品中的氧化铝杂质，然后再进行ＳＥＲＳ检测，这样可以极大地缩短检测时间。第二种，红外法。红外光谱技术不会对样品造成破坏，所以可以算作绿色技术，这种技术能够对样品进行定量分析，即使不断变化样品中三聚氰胺的浓度，也可以很好地识别未知样品中三聚氰胺的真实含量。第三种，荧光法。这种方法需要利用还原剂将胆酸钠合成为ＡｕＮＣｓ，而三聚氰胺遇到ＡｕＮＣｓ后，会增强荧光的效果，这种方法操作比较简单，人们可以用它对超市中出售的牛奶进行检测。另外，还可以使用试纸条对三聚氰胺进行检测，而且便于肉眼观察，检测时间大概１５分钟左右。免疫检测。目前，免疫检测方法不是十分常见，而且涉及到免疫反应，核心原理是抗原抗体的特异性结合，并且需要借助大孔径的微孔过滤膜。在制作三聚氰胺抗原时，要使用活化脂法，然后将三聚氰胺抗体以及ＨＲＰ抗体作为检测层，这种方法耗时较短。高效液相色谱法简析试验。使用的材料包括甲醇、氨水、三氯乙酸、柠檬酸、辛烷磺酸钠以及乙酸铅。将５０ｍＬ的甲醇注入到含有５０ｍＬ水的试管中，得到甲醇水溶液。用天平称取１０ｇ的三氯乙酸，然后放入到１Ｌ的容量瓶中，之后用水将容量瓶注满，并且进行均匀的晃动，得到浓度为１％的三氯乙酸溶液。将５ｍＬ的氨水与９５ｍＬ的甲醇混合在一起，得到浓度为５％的氨化甲醇溶液。将１ｇ乙酸铅放入到１００ｍＬ的容量瓶内，然后注满水，得到１％的乙酸铅溶液。这里需要注意的是离子对试剂缓冲液的配制，需要将２．０５ｇ的柠檬酸钠与２．１８ｇ的辛烷磺酸钠混合在一起，然后加入９６０ｍＬ的水，混合均匀后还要加水调节ＰＨ，当ＰＨ达到３．２时，停止加水。使用的仪器包括高效液相色谱仪、天平、固相萃取装置、氮气吹干仪等，在配制三聚氰胺储备液时，需要准确称取０．０９９６６ｇ含量为９９．９８％的三聚氰胺标准品，并且与甲醇水溶液混合在一起，这样就得到了浓度为９８６．３２４μｇ／ｍＬ的储备液，保存时要注意避光，同时温度控制在６℃左右。在试验过程中，分别选取０．０６ｍＬ、０．１５ｍＬ、３ｍＬ以及６ｍＬ的储备液，进行分组，并且放入到１００ｍＬ的容量瓶中，用流动相定容，根据浓度的高低进行检测。ＨＰＬＣ的检测条件：色谱柱Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００－５－Ｃ１８，流速１．２ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３８℃，波长２３０ｎｍ。如果调节流动相ＰＨ，可以发现当ＰＨ下降时，目标峰拖尾情况出现的次数明显降低，所以可以在２．３～３．６之间合理调节ＰＨ。这里需要注意的是，试验过程会使用蛋白沉降剂，乙酸铅可以保证沉降效果符合要求，而使用其他物质，会发现储备液十分混浊，经过离心机处理后，过（下转第99页）Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
食品三聚氰胺检测方法
食品中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. 高效液相色谱-质谱联用法：利用高效液相色谱将样品中的三聚氰胺分离出来，然后使用质谱进行定性和定量分析。
2. 气相色谱-质谱联用法：将样品中的三聚氰胺通过气相色谱分离，再利用质谱进行定性和定量分析。
3. 酶联免疫吸附测定法：利用酶联免疫吸附技术，制备专门的三聚氰胺抗体，将样品与抗体结合，在检测中利用酶的催化作用来定量分析三聚氰胺的含量。
4. 端子法：将含有三聚氰胺的食品样品与二甲腈反应生成蓝色复合物，然后通过分光光度法测定蓝色复合物的吸光度，从而计算出三聚氰胺的含量。
5. 电化学法：利用电化学传感器或电极来检测食品中的三聚氰胺，根据电化学信号的变化来定量分析。
需要注意的是，不同的检测方法在准确度、灵敏度、样品处理等方面可能存在差异，选择合适的方法需要综合考虑实际需求和条件。而且在实际应用中，常常采用多种方法进行交叉验证，以提高检测的可靠性和准确性。
