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做标准曲线的操作流程
制作标准曲线是一种实验技术，用于确定未知样品的浓度。
以下是制作标准曲线的一般操作流程：
1. 准备标准溶液：准备一系列已知浓度的标准溶液，通常
有5个以上的浓度级别，覆盖可能的未知样品浓度范围。
标准溶液中的目标分析物应保持稳定。
2. 测定光学密度：使用适当的方法（如分光光度法）测定
每个标准溶液的光学密度（吸光度）。
3. 绘制标准曲线：以标准溶液的浓度为横坐标，光学密度
为纵坐标，绘制标准曲线。
通常，线性拟合（如回归分析）被用来拟合标准曲线，以获得一个线性方程。
4. 测试未知样品：使用相同的测量方法，测定未知样品的
光学密度。
5. 使用标准曲线计算未知样品的浓度：将未知样品的光学
密度代入标准曲线的线性方程中，计算出未知样品的浓度。
需要注意的是，制作标准曲线的操作流程可能会根据具体
的分析方法和仪器设备而有所不同。
因此，在进行实验之前，最好阅读相应的实验方案和设备操作手册，以确定适
合您的具体情况的操作流程。
应用绘制标准曲线及计算样品浓度在实验结束后，我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的值。
其中，标准品的浓度已知，我们可以利用标准品的值及其相对应的浓度，以值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。
这样，我们把样本的值以值代入，便可求出值，即样本浓度。
下面我们就一步步来实现这个目标：、首先，将数据整理好输入，分别为经酶标仪读出标准品的值及其对应的浓度值。
、拖动鼠标选取完成的数据区，并点击图表向导，在图表类型中选“散点图”，并选择子图表类型的“散点图”（第一个没有连线的），如下图所示。
、点击“下一步”，出现如下图界面。
如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。
在做标准曲线，并通过此曲线求样本浓度时，因样本值是已知的，因此我们需要将值设为。
根据上图我们可以看到，横坐标值为值，纵坐标为标准品浓度，这正是我们想要的。
有时需要我们手动选择值，这时可以点击“系列”来更改，如下图。
如果要对横坐标和纵坐标进行调换，我们可以就点击值和值文本框右边的小图标，结果如下图：出现上图后，拖动鼠标选取正确的数据区域以调整或。
、调好之后，然后点击“下一步”出现图标选项界面，如下图。
、点击“下一步”，在弹出的窗口再点击“完成”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。
、到了这一步，散点图便完成了。
我们可能会问，曲线在哪里啊？其实很简单，先点击图上的标准值点（记住一定要点选上），然后单击右键，点击“添加趋势线”。
弹出趋势线类型选择对话框，有线性，对数，多项等选项，如下图：、在选择之前，我们先对上图做一下肉眼观察，如果那些点能连成一条直线，或接近直线，我们就选择“线性”，意思就是出来的趋势线是一条直线，相应的该直线的方程就是的形式。
不过一般的都不会是所有的标准点呈完全的线性关系的，也就是说不是一条完全的直线，这时我们可以选择“多项式”，多项式后面还有“阶数”的选择，也就是说求出来的方程是几次方，我们一般选“阶”，即出来的方程为. 选择完毕后，弹出以下窗口。
标准曲线的作法(1)标准液浓度的选择：在制备标准曲线时，标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值，一般可选择5种浓度。
浓度差距最好是成倍增加或等级增加，并应与被测液同样条件下显色测定。
(2)标准液的测定：在比色时，读取光密度至少读2-3次，求其平均值，以减少仪器不稳定而产生的误差。
(3)标准曲线图的绘制：一般常用的是光密度一浓度标准曲线。
①用普通方格纸作图。
图纸最好是正方形(长：宽=l：1)或长方形(长：宽=3 ：2)，以横轴为浓度，纵轴为光密度，一般浓度的全距占用了多少格，光密度的全距也应占用相同的格数。
在适当范围内配制各种不同浓度的标准液，求其光密度，绘制标准曲线，以浓度位置向上延长，光密度位置向右延长、交点即为此座标标点。
然后，将各座标点和原点联成一条线，假设符合Lambert-Beer氏定律，则系通过原点的直线。
②假设各点不在一直线，则可通过原点，尽可能使直线通过更多点，使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两边。
③标准曲线绘制完毕以后，应在座标纸上注明实验项目的名称，所使用比色计的型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温。
④绘制标准曲线：一般应作二次或三次以上的平行测定，重复性良好曲线方可应用。
⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。
当更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时，标准曲线需重新绘制。
⑥标准曲线横坐标的标度：从标准液的含量换算成待测液的浓度。
1.5 原子吸收光谱分析的定量方法原子吸收光谱分析是一种动态分析方法，用校准曲线进行定量。
常用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和浓度直读法。
如为多通道仪器，可用内标法定量。
在这些方法中，标准曲线法是最基本的定量方法。
1.5.1 标准曲线法前面已经指出，原子吸收光谱和原子荧光光谱分析是一种相对测定方法，不能由分析信号的大小直接获得被测元素的含量，需通过一个关系式将分析信号与被测元素的含量关联起来。
实验七血清丙氨酸氨基转移酶（ALT ）测定——改良赖氏法一、实验目的了解丙氨酸氨基转移酶测定原理及方法。
二、实验原理丙氨酸氨基转移酶（ALT）又称谷一丙转氨酶（GPT）。
它催化L—丙氨酸和L—谷氨酸之间氨基的转移，反应式为：丙酮酸与2，4—二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙。
此二硝基苯腙在强碱溶液中显红棕色，色泽深浅与产生的丙酮酸多少即酶活性成正比。
三、仪器和试剂1 •仪器：37C水浴恒温装置，试管和试管架，吸管，722型分光光度计。
2．试剂：⑴0.0667 mol/L 磷酸盐缓冲液。
⑵丙氨酸氨基转移酶基质液：称取DL丙氨酸1.78克，？一酮戊二酸30毫克，先溶于0.0667 mol/L 磷酸盐缓冲液约20 毫升中，用1mol/L NaOH （约0.5毫升）调节pH 至7.4，再加磷酸盐缓冲液至100毫升。
4~6 C中保存，并加一至二滴氯仿，防止细菌分解作用。
⑶2,4-二硝基苯肼溶液：溶2,4-二硝基苯肼200 毫克于热1 mol/L HCl 中，并用1 mol/L HCl 加至1 升刻度，避光保存。
⑷0.4 mol/L NaOH 溶液。
⑸丙酮酸标准液（2mmol/L ）:溶丙酮酸钠22毫克于缓冲液100毫升中，存放冰箱，此溶液在数天内是稳定的。
四、实验步骤加入物（ml）测定管测定空白管血清0.10 —加温至37 C的丙氨酸氨基转移酶基质液0.50 0.50各管分别混和，置37 C水浴30分钟，取出。
2, 4 —二硝基苯肼溶液0.50 0.50血清一0.10各管分别混匀，置37 T水浴20分钟，取出。
0.4 mol/L NaOH 溶液5.00 5.00在30分钟内用波长505nm比色，以蒸馏水校正零点和100%，读取各管吸光度测定管吸光度减去测定空白管吸光度后，于标准曲线上查得酶活性单位。
标准曲线绘制：（所加试剂按毫升计）加入物（ml）管号1 2 3 4 5丙酮酸标准液（2mmol/L ）0 0.05 0.10 0.15 0.20丙氨酸氨基转移酶基质液0.50 0.45 0.40 0.35 0.300.0667 mol/L 磷酸盐缓冲液0.10 0.10 0.10 0.10 0.10相当于丙酮酸实际含量（？mol/L）0 0.1 0.20 0.30 0.40相当于丙氨酸氨基转移酶活力（卡门氏单位）0 28 57 97 150各管混匀后置37 T水浴5分钟，加2,4—二硝基苯肼溶液0.5毫升混匀，置37 C 水浴20分钟，取出，每管各加0.4 mol/L NaOH溶液5.0毫升，于30分钟内用波长505nm比色，以蒸馏水校正零点和100%，读取各管吸光度。
分析检测的首要任务是定性和定量，定性可以说是有和无的问题，定量是提供待测物质含量范围的一个过程，这当中包含了任何定性定量都有不确定度的含义。
而普遍采用的标准曲线已然是分析检测中的常规工作，本篇内容以讲解加问答的形式探讨标准曲线使用过程中的难点和误区，结合数据处理版面关于标准曲线的问题交流，以期答疑解惑、共同精进。
内容提要本文内容共分为【四个部分】1、标准曲线的本质：系列浓度待测物质与响应的关系，用以推算样品含量。
2、标准曲线的做法：3点以上，至少重复2次，浓度均匀设置。
3、标准曲线的检验：拟合检验、失拟检验和斜率、截距检验。
4、标准曲线使用中的问题。
标准曲线的本质分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量（浓度/量）的物质与仪器响应/信号之间的关系，数学处理就是曲线方程，图形表示就是标准曲线。
标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。
当我们得到一系列已知含量的物质的响应后，就会去建立函数关系，数学上称曲线拟合，由于直线最为简单，所以常常用直线方程加以拟合，当然会用到多项式拟合等其他方式。
标准曲线的核心问题要解决：1、能找到确切浓度的标准物质或标准品。
2、标准系列和待测物质一定要有相同和一致的基体，因为样品基体可能会干扰仪器的响应，从这个意义上讲，样品的前处理实际就是提供标准和样品同样的基体环境，尽量祛除干扰基体。
所以最好的标准系列应该是样品基体匹配的标准系列。
而方法建立过程中首先要考虑的当然是基体干扰的问题，推荐用标准加入曲线和Youden曲线分别考察样品基体所带来的乘积性干扰和加和性干扰。
标准加入曲线就是在样品中加入一系列标准，然后考察该标准加入曲线和标准曲线斜率的统计学差异，若有差异需考虑用标准加入法定量；而Youden曲线就是对样品做一系列稀释，然后用稀释倍数如1/10,1/5,1/2,1对仪器响应做曲线，考察该Youden曲线的截距与0的差别，若有差别则提示有加和性干扰，此时测定值要减去该截距才是真实值。
标准曲线绘制在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析,通常情况下的标准工作曲线是一条直线。
标准曲线的横坐标（X）表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量,纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值,如吸光度、电极电位等），称为随机变量。
当X取值为X1，X2，…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1，Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi，Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系,这就是常用的标准曲线法.用作绘制标准曲线的标准物质,它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量,标准曲线不能任意延长.用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的,尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据）进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
2.6.1一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值,设回归直线方法为(2－15）式中a表示截距,b表示斜率.假设Xi和Yi (i=1，2,3,……，n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值,在直线(）上都有一个确定的值.但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：（2－16)上式表示与直线(）的偏离程度，即直线的误差程度.如果全部n个测定引起的总偏差用表示，则偏差平方和s为(2－17）在所有直线中，偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线，即这条直线的斜率b和截距a应使s 值达到最小,这种要使所有数据的偏差平方和达到最小的求回归直线法称为最小二乘法。
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标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量，纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。
当X取值为X1, X2,…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1, Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系，这就是常用的标准曲线法。
用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量，标准曲线不能任意延长。
用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的，尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据)进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
2.6.1一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值，设回归直线方法为(2－15)式中a表示截距，b表示斜率。
假设Xi和Yi (i=1,2,3,……,n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值，在直线( )上都有一个确定的值。
但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：(2－16)上式表示与直线()的偏离程度，即直线的误差程度。
如何正确绘制标准曲线
首先，准备好实验所需的标准样品和试剂，确保实验环境整洁干净，仪器设备正常运行。
在进行曲线绘制之前，需要对样品进行稀释或者预处理，以确保样品浓度在标准曲线的线性范围内。
同时，选择合适的检测方法和仪器，确保能够准确测量样品的吸光度或荧光强度。
其次，进行标准曲线的绘制。
在选择标准曲线的浓度范围时，需要考虑样品的浓度范围和实验方法的灵敏度，以确保曲线能够覆盖样品的浓度范围并且具有良好的线性关系。
在进行测定时，要注意避免气泡和杂质的干扰，保证测量结果的准确性。
在进行数据处理时，需要对实验数据进行统计分析，计算出各个浓度点的平均值和标准差，以确保曲线的准确性和可靠性。
最后，对绘制的标准曲线进行分析和评价。
在分析曲线时，需要注意曲线的线性关系、斜率和截距的准确性，以及相关系数和拟合度的好坏。
同时，对曲线的斜率和截距进行统计学分析，确定曲线的灵敏度和可靠性。
在评价曲线时，需要考虑实验方法的可行性和实用性，以及曲线的应用范围和稳定性。
综上所述，正确绘制标准曲线是科研和实验中非常重要的技能，需要在实验设计、数据测定和数据处理等方面严格把关，以确保曲线的准确性和可靠性。
希望以上内容能够对大家有所帮助，谢谢阅读！。
