用微生物挑战性试验考察化妆品防腐剂效果

化妆品防腐挑战测试标准化妆品是现代女性的必备品之一，它们不仅可以让我们的容貌更加美丽动人，还可以提升我们的自信心。

然而，随着人们对健康和安全的关注度不断提高，化妆品防腐挑战测试成为了一个重要的话题。

那么，什么是化妆品防腐挑战测试呢？化妆品防腐挑战测试是一种用来评估化妆品中防腐剂抗菌性能的测试方法。

防腐剂是为了防止化妆品受到细菌、霉菌和其他微生物的污染而添加的一种特殊成分。

它们的作用是抑制和杀灭这些微生物，从而延长化妆品的保质期，确保产品的安全性和稳定性。

化妆品防腐挑战测试的标准是一套规范，旨在确保化妆品在正常使用条件下对细菌和真菌的抗菌性能。

这些标准通常由国际标准化组织（ISO）和美国药典（USP）等机构制定和发布。

化妆品生产商在生产过程中应遵守这些标准，以确保产品的质量和安全性。

化妆品防腐挑战测试通常包括以下几个方面的内容：1. 抗菌活性测试：该测试用来评估化妆品中防腐剂对常见细菌和真菌的抗菌能力。

常用的测试方法包括菌落计数法、抑菌环法和滤膜法等。

2. 最大抗菌负荷测试：该测试用来确定化妆品中所添加的防腐剂对细菌和真菌的最大抗菌负荷。

通过在一定浓度的化妆品中接种一定数量的微生物，并观察其生长情况，来评估防腐剂的抗菌能力。

3. 防腐剂有效性测试：该测试用于评估化妆品中防腐剂的有效性和稳定性。

常见的测试方法包括加速老化试验、温度循环试验和抗压力试验等。

化妆品防腐挑战测试的目的是确保化妆品在正常使用条件下不会受到微生物污染。

微生物污染可能导致化妆品变质、产生异味、失去功效甚至引发皮肤过敏等问题。

因此，进行防腐挑战测试是确保化妆品质量和安全性的重要手段。

化妆品生产商应该重视化妆品防腐挑战测试，并按照相关标准要求进行测试。

只有通过了测试的化妆品才能上市销售，以保证消费者的健康和安全。

此外，化妆品消费者在购买化妆品时也应该关注产品的保质期和防腐性能，选择符合标准要求的产品。

化妆品防腐挑战测试是保证化妆品质量和安全性的重要手段。

微生物挑战性实验方法1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2微生物挑战性实验4. 2. 1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。

细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。

霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。

细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。

4. 2. 2一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。

称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。

然后充分混匀, 置于28℃下。

在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。

按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是37 ℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5 天。

此实验用以评判防腐剂的有效与否。

评判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106细菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量减少至不高于起始浓度的0. 1%, 以后逐渐减少, 在28 天为0 。

符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试)。

化妆品微生物挑战试验刘树葆臧跃扬桂菊（天津化妆品科学技术研究皖有强公司）摘要：本文参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法，研究了不同产品在相同防腐条件下，微生物挑战试验结果的差异性。

关键词：防腐体系，微生物挑战试验，膏霜，乳液，水剂。

目前，化妆品琳琅满目，产品配方复杂多样，通常包含多种成分，尤其许多化妆品中的营养成分非常适合微生物的生长，而微生物存在于我们生活着的世界的每一个角落，从而为化妆品的生产和保存带来困难。

微生物污染将导致产品在气味、颜色、粘度、性能上都会发生改变。

因此化妆品微生物污染对产品质量、正常使用以及使用者健康来说是一个极大的冒险“’。

为防止微生物污染，就对产品的防腐提出了挑战，所以必须建立很好的防腐体系，以保证产品的安全、稳定性“’，为消费者提供安全和高品质的产品。

评价化妆品质量的～个重要指标就是微生物是否达到化妆品卫生规范的要求，本实验参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法。

’，对相同防腐体系不同功能的膏霜、乳液及水剂产品进行微生物挑战试验，以指导配方师合理添加防腐剂。

１．实验方法ｉ．Ｉ．ＣＴＦＡ推荐的防腐单次挑战试验ＣＴＦＡ推荐的经典的为期２８天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后～次性接入若干种类、～定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。

１．２试验仪器恒温培养箱：霉菌培养箱：显微镜：灭菌平皿：直径为９ｃｍ；ｐＨ计；高压灭菌锅；酒精灯：锥形烧瓶；量筒：灭菌刻度吸管：ｌＯｍｌ、２ｍｌ、ｉｍｌ；试管。

Ｉ．３．培养基和试剂生理盐水：ＳＣＤＬＰ液体培养基：卵磷脂、吐温８０一营养培养基：乳糖胆盐培养基：蛋白胨水：靛基质试剂：十六烷三甲基溴化铵培养基；绿脓菌素测定用培养基：硝酸盐蛋白胨水培养基：普通琼脂斜面培养基：血琼脂培养基；甘露醇发酵培养基：血浆：孟加拉红培养基。

化妆品防腐挑战测试标准摘要：1.化妆品防腐挑战测试的背景和意义2.化妆品防腐挑战测试的标准和方法3.化妆品防腐挑战测试的应用案例4.化妆品防腐挑战测试对保障消费者健康的重要性正文：一、化妆品防腐挑战测试的背景和意义化妆品作为日常生活中不可或缺的一部分，其质量和安全性备受关注。

在化妆品生产过程中，由于水分、营养物质等成分的存在，容易引发微生物污染，导致化妆品变质、失效，甚至对使用者的健康造成威胁。

因此，化妆品防腐挑战测试应运而生，其目的是评估化妆品中防腐剂的效果，以确保产品在保质期内不会发生微生物污染。

二、化妆品防腐挑战测试的标准和方法1.标准在我国，化妆品防腐挑战测试的标准主要参照国家药监局的相关规定。

例如，2020 年第141 号公告批准月桂酰精氨酸乙酯hcl 作为化妆品准用防腐剂；2021 年74 号公告将苄氯酚列为禁用防腐剂。

此外，欧盟和美国等国家也有相应的防腐挑战测试标准。

2.方法化妆品防腐挑战测试的方法主要包括以下两种：（1）一次加菌法：在受试样品中加入一定量的已知菌种，要求样品中的细菌初始加菌浓度达到10^5~10^6 cfu/g；酵母和霉菌初始加菌浓度达到10^4~10^5 cfu/g。

然后定期跟踪检测产品中微生物的消长情况，以评估防腐剂的效果。

（2）连续接种法：在化妆品中连续加入不同种类和浓度的微生物，观察化妆品中微生物的生长情况，以评估防腐剂的效果。

三、化妆品防腐挑战测试的应用案例某化妆品生产商在开发一款新的护肤品时，为了确保产品在保质期内不会发生微生物污染，需要进行防腐挑战测试。

测试过程中，分别采用一次加菌法和连续接种法，选取多种菌株进行测试。

测试结果显示，当防腐剂浓度为0.5% 时，产品中的微生物生长得到了有效抑制。

因此，该生产商决定在生产该护肤品时，添加0.5% 的防腐剂。

四、化妆品防腐挑战测试对保障消费者健康的重要性化妆品防腐挑战测试有助于确保化妆品在保质期内不会发生微生物污染，从而保障消费者的健康和安全。

化妆品防腐‎性能挑战性‎试验及评价‎标准化妆品防腐‎挑战性试验‎及评价标准‎投产前对产‎品防腐体系‎的可靠性做‎效能测试是‎十分必要的‎，目前，国内外配方‎设计时普遍‎采用防腐挑‎战性试验评‎价防腐剂的‎有效性。

防腐挑战性‎试验更接近‎实际应用，该方法能够‎模拟化妆品‎生产和使用‎过程中受到‎高强度的微‎生物污染的‎潜在可能性‎和自然界中‎微生物生长‎的最适宜条‎件，从而避免由‎微生物污染‎造成的损失‎和为消费者‎健康提供可‎靠的保证。

1.CTFA推‎荐的一次加‎菌防腐挑战‎性试验及评‎价标准CTFA的‎方法初始的‎霉菌和细菌‎的接种量分‎别为100‎00cfu‎/g（ml）和1000‎000cf‎u/g （ml）（CFU为菌‎落单位），要求在第7‎天时霉菌降‎低90%，细菌降低9‎9.9%，并且在28‎天内菌数持‎续下降。

美国在CT‎FA评价方‎法的基础上‎提出更为严‎格的标准，即，若单菌接种‎的三个平行‎试验中任何‎一种微生物‎数量的平均‎值，在第七天时‎下降到10‎0 cfu/g （ml）以下，28天全部‎为0，则视为效果‎优良通过挑‎战试验；若第七天时‎下降到10‎00 cfu/g（ml）以下，则视为勉强‎通过；若单菌接种‎的任何一种‎微生物，任何一个平‎行样达不到‎上述标准，也达不到C‎TFA的要‎求，防腐体系则‎评定为无效‎。

2.国内参照C‎TFA加菌‎防腐挑战性‎试验及评价‎标准初始接种细‎菌量100‎0000 cfu/g（mL）（1）第28天时‎，样品中含细‎菌或霉菌＞1000c‎fu/g（mL）该样品不能‎通过微生物‎攻击的挑战‎试验，表明样品的‎防腐体系不‎能有效地志‎到抑制微生‎物的作用，产品在生产‎、贮藏和使用‎中很容易受‎到微生物的‎污染。

（2）第28天时‎，样品中含细‎菌或霉菌在‎100 cfu/g-1000 cfu/g（mL），该样品有条‎件地通过挑‎战试验，即当产品中‎蛋白质或其‎他动植物材‎料成分不是‎特别高，同时生产的‎卫生环境符‎合要求，包装物不易‎发生二次污‎染时，该防霉体系‎可以使用，否则不能。

防腐剂的防腐效力检测本研究结合美国药典（USP）、欧洲药典（EP）及中国药典（2010，防腐效力检测的指导原则）等对某防腐剂的防腐效力进行检测，从实验用菌种、实验方法等方面考察，建立某防腐剂的防腐效力的检测方法并评价相应防腐剂的防腐效力。

防腐剂一般是化学物质，经常会受环境因素的影响降解或失活。

为确保防腐剂效力的有效性，有必要对含防腐剂最终产品的防腐效力进行科学有效的评价。

防腐效力检测实验程序一、USP、EP防腐剂防腐效力检测实验方法介绍USP、EP对防腐效力检测均有具体规定，虽然内容特别是判定标准有所不同，但所用的实验方法和原理是一致的：取一定量挑战性微生物（challenge microorganisms），接种至一定量的被测样品中，在规定温度下培养接种试样。

在28 d的培养期内，于规定时间点取样，通过平皿菌落计数法（plate-count method）或其它方法测定接种样品中剩余的存活菌浓度，通过对比菌浓度下降值，判定样品是否符合规定。

二、检测用的微生物USP、EP及中国药典推荐用的挑战微生物挑战性微生物USP EP 中国药典白色念珠菌Candida albican ATCC 10231 ATCC10231 ,NCPF 3179, IP48.72CMCC(F)98001黑曲霉Aspergillus niger ATCC 16404 ATCC16404 , IMI149007, IP1431.83CMCC(F)98003大肠埃希菌Escherichia coli ATCC 8739 ATCC8739 ,NCIMB 8545,CIP53.126CMCC(B)44102铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ATCC9027,NCIMB 8626,CIP82.118CMCC(B)10104金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 6538 ATCC6538,NCIMB 9518,NCTC10788 CIP4.83CMCC(B)26003试验所用菌株传代次数不得超过5代。

微生物挑战性实验方法1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2微生物挑战性实验4. 2. 1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。

细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。

霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。

细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。

4. 2. 2一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。

称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。

然后充分混匀, 置于28℃下。

在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。

按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是37 ℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5 天。

此实验用以评判防腐剂的有效与否。

评判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106细菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量减少至不高于起始浓度的0. 1%, 以后逐渐减少, 在28 天为0 。

符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试)。

化妆品防腐效能试验方法的选择李素玉【摘要】All of the cosmetic face by microbial contamination may be in production and consumer use, the use of contaminated products will pose a health threat to consumers, the reliability of the product before the commissioning of anti-corrosion system is very necessary to do performance test.At present, microbial challenge test is the most commonly used cosmetics antiseptic effect evaluation and the classical detection method. Compared the similarities and differences between the two standards of CTFA commonly used method and USP method two, a reference for the selection of cosmetics preservative efficacy test methods was provided.%所有的化妆品在生产和消费者使用过程中都面临着受到微生物污染的可能，使用污染了的产品会给消费者造成健康威胁，投产前对产品防腐体系的可靠性做效能测试是十分必要的。

目前，微生物挑战试验是目前评价化妆品防腐效果最为常用和经典的检测方法。

我们比较了两种常用的标准方法CTFA和USP法二者的异同，为化妆品防腐效能试验方法的选择提供参考。

化妆品防腐挑战评价标准
化妆品防腐挑战评价标准主要涉及以下几个方面：
1. 防腐效能试验：这是评价化妆品防腐性能的关键环节。

通过在化妆品样品中加入微生物（如细菌、酵母和霉菌等），观察防腐剂对微生物的生长和繁殖的抑制效果。

常用的方法有一次加菌法和多次加菌法等。

2. 挑战性试验：这是模拟化妆品在生产、储存和使用过程中可能遇到的微生物污染情况。

通过在样品中加入定量已知菌种，定期检测微生物的数量变化，以评估防腐剂的防腐效果。

3. 评价标准：化妆品防腐挑战评价标准通常包括微生物数量、防腐剂浓度、试验周期等指标。

例如，在挑战性试验中，如果样品在特定时间内（如第7天、第14天和第28天）的微生物数量均控制在一定范围内，说明防腐剂的防腐效果较好。

4. 参考国际标准：在评价化妆品防腐挑战时，可以参考国际通用的标准和方法，如欧盟和美国的相关法规和指南。

同时，对于防腐体系相同且配方近似的产品，可以参考已有的实验数据和资料进行评价。

5. 实验周期：化妆品防腐挑战试验的周期通常至少为33天，以确保在试验过程中充分评估防腐剂的性能。

化妆品防腐挑战评价标准主要关注防腐效能试验、挑战性试验、评价指标、国际标准和实验周期等方面，以确保化妆品在生产、储存和使用过程中具备可靠的防腐性能。

化妆品防腐挑战测试标准化妆品是现代女性日常护肤和美容的必备品，但其中存在着一些挑战和问题，其中之一就是防腐挑战。

化妆品中的防腐剂是为了延长其使用寿命和防止细菌滋生而添加的。

然而，随着消费者对天然和无添加化妆品的追求，防腐剂成为了消费者关注的热点问题之一。

防腐剂的存在是确保化妆品的质量和安全。

化妆品中含有水分和营养成分，这些成分很容易被细菌污染，导致产品腐败和滋生细菌。

为了在使用过程中保证化妆品的安全，防腐剂的添加是必要的。

合理的添加防腐剂可以有效杀灭细菌，保持化妆品的新鲜和卫生。

防腐剂也存在一些潜在的危害和副作用。

一些常见的防腐剂如苯酊、对羟基苯甲酸酯等被怀疑与致敏、激素干扰等问题有关。

这些问题引发了消费者对防腐剂的担忧和对天然无添加化妆品的追求。

同时，长期使用含有一定剂量防腐剂的化妆品是否对人体有潜在风险，也是化妆品行业需要重视的问题。

面对这一挑战，化妆品行业需要采取措施来解决。

首先，对防腐剂进行严格的临床评估和安全性测试是十分重要的。

只有通过科学合理的方法来确定防腐剂的使用剂量和安全性，才能为消费者提供真正的安全化妆品。

其次，化妆品企业应该加强对消费者的教育和宣传工作，提高消费者的安全意识，避免被不合理的宣传误导。

最后，行业监管部门应该加强对化妆品市场的监管，加强对防腐剂使用的限制和标准，确保化妆品真正安全可靠。

除了以上的努力，化妆品行业还可以探索其他替代方案。

一些天然防腐剂如茶树精油、桉树精油等，被认为具有天然的抗菌和防腐特性，可以用于替代传统的合成防腐剂。

此外，包装技术的进步也可以有效延长化妆品的保质期，减少防腐剂的使用。

例如，采用气密式包装，可以有效隔绝外界空气和细菌的进入；采用泵装设计可以减少手部接触，减少污染的机会。

综上所述，化妆品防腐挑战是一个需要行业共同努力解决的问题。

在确保化妆品质量和安全的前提下，可以通过严格的安全评估和监管来提高防腐剂的使用合理性；通过加强消费者教育来提高安全意识；通过研发更安全的替代方案和改进包装技术来降低防腐剂的使用。

1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1 化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2 微生物挑战性实验4. 2. 1 受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。

细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。

霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于 37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。

细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108 个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。

4. 2. 2 一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。

称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。

然后充分混匀, 置于28℃下。

在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g 企业名称杭州国光旅游用品有限公司 Hangzhou Guoguang Touring Commodity Co.,Ltd. 文件编号 SSOP-04 版本/修改号 1.0 文件名称微生物挑战性试验操作规范 Standard Operation Procedure for Hygiene Standard 生效日期 2010/7/1 页 次 第1页 共6页 编写 审核 批 准样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。

1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2微生物挑战性实验4. 2. 1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。

细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。

霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。

细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108 个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。

4. 2. 2一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。

称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。

然后充分混匀, 置于28℃下。

在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。

按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是37 ℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5 天。

此实验用以评判防腐剂的有效与否。

评判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106细菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量减少至不高于起始浓度的0. 1%, 以后逐渐减少, 在28 天为0 。

符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试)。

1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1 化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2 微生物挑战性实验4. 2. 1 受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。

细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。

霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于 37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。

细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108 个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。

4. 2. 2 一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。

称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。

然后充分混匀, 置于28℃下。

在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g 企业名称杭州国光旅游用品有限公司 Hangzhou Guoguang Touring Commodity Co.,Ltd. 文件编号 SSOP-04 版本/修改号 1.0 文件名称微生物挑战性试验操作规范 Standard Operation Procedure for Hygiene Standard 生效日期 2010/7/1 页 次 第1页 共6页 编写 审核 批 准样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。

如何评价防腐剂的防腐抑菌能力近年来，化妆品工业使用的天然原料和各种功能性添加剂日趋增多，产品更容易被微生物所侵蚀，化妆品防腐问题越来越受到重视，防腐剂成为化妆品中必不可少的成分。

那么怎样选择一款合适的防腐剂？一款好的防腐剂应该具备良好的防腐抑菌能力。

国际上普遍使用三种方法去评价防腐抑菌性能：测定最小抑菌浓度（MIC ）、防腐挑战试验、线性回归法。

①最小抑菌浓度（MIC ）MIC 是最常用的一种防腐性能评价方式，测定方法包括肉汤稀释法和琼脂稀释法。

图1 微量肉汤稀释法所用的96孔板MIC 数值越小，抑菌能力越强。

效果好的防腐剂与效果差的MIC 值相差上百倍。

国外文献建议配方中的添加量一般是最大MIC 的2-4倍（视具体情况）。

常用的防腐剂和一些无添加防腐剂的MIC 数据如下表：表1 各种防腐剂和无添加防腐剂MIC注1%=10000ppm 注②：尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯氧乙醇MIC 数据来源于《化妆品化学与工艺技术大全》；1,2-己二醇、1,2-戊二醇、对羟基苯乙酮MIC 数据来自德之馨(Symrise)；Atdf ®pf -95为己脒定二(羟乙基磺酸)盐， MIC数据来自巴斯夫(BASF)；Prese®WS-61为5%包合己脒定二(羟乙基磺酸)盐，MIC数据来源于微生物研究所报告；Esonal®OSM-303为对羟基苯乙酮的复配物，为欣浪生化防腐剂。

②防腐挑战实验在防腐剂样品中，加入定量的微生物（细菌、真菌混合液）。

在此后的0/7/14/21/28天，通过测量样品中微生物的含量来评价防腐性能，实验周期长达28天。

③线性回归法线性回归法与防腐挑战实验方法很类似，但其所花费的时间比较短，周期为一周。

线性回归法通过D值（配方中的微生物菌群90%失活所需要的时间）判断配方是否通过防腐实验。

标准为：致病微生物D值≤4h，非致病细菌、酵母菌和霉菌D值≤28h。

D值越小，防腐性能越好。

目地新产品防腐效果地测试范围公司新产品参考：材料与方法. 化妆品中常用地防腐体系[ ]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等. 微生物挑战性实验. . 受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供.细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌.霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉. b5E2R 。

实验前，将各菌种接种于合适地培养基中, 于 ℃( 细菌) 或℃( 霉菌) 下培养.细菌培养在天后, 霉菌培养在 天后，挑选适量菌落于灭菌地生理盐水中，制成一定浓度地混合细菌( × 个) 或混合霉菌悬液( ×个 ) , 置于℃贮放备用.p1Ean 。

. . 一次加菌地 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果地方法.称取各受试样品, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为×个细菌和 ×个霉菌.然后充分混匀, 置于℃下.在接菌地、、、 和天取样分析: 准确称取样品, 加到含有玻璃小珠地灭菌锥形瓶内, 加入灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为∶稀释液；然后再用灭菌企业名称杭州国光旅游用品有限公司 . 文件编号 版本修改号 文件名称微生物挑战性试验操作规范 生效日期 页 次 第1页 共页 编写 审核 批 准生理盐水按倍依次稀释.按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是℃下～，霉菌培养为℃下～天.此实验用以评判防腐剂地有效与否.评判标准为: 当每克样品中一次接菌( ×细菌和×霉菌) 后, 在第天存活菌量减少至不高于起始浓度地. , 以后逐渐减少, 在天为 .符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试).DXDiT。

分析与检测. . 重复次加菌地微生物挑战试验此方法参照国际（国际化妆品、香精和洗涤剂协会）推荐地微生物挑战性试验.称取受试样品 , 每隔周加菌一次( 即实验地第、和周) , 每次加细菌量为×～×个样品和霉菌×个～×个样品.在加菌后地天、天和天( 后一次加菌前) 采样分析样品中含菌量, 方法同前.此方法可将受检样品分为三类:RTCrp。

化妆品防腐效能评价方法1．定义微生物挑战性实验：将一定量的微生物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂防腐效能的实验方法。

2．仪器设备2.1 生物安全柜2.2 高压蒸汽灭菌器2.3 冰箱2.4 恒温培养箱2.5 均质器2.6天平3.试剂和培养基3.1 0.85%生理盐水3.2 含0.05%吐温80的生理盐水3.3 改良的LETHEEN 肉汤3.4水解大豆琼脂培养基（TSA）3.5萨布罗右旋糖琼脂培养基(SDA)4.实验菌株4.1细菌：金黄色葡萄球菌ATCC6538，大肠杆菌ATCC8739，铜绿色假单胞菌ATCC9027等。

4.2真菌：巴西曲霉ATCC16404，白假丝酵母ATCC10231等。

根据实际情况可增加其他细菌作为测试菌株。

5.实验方法（混合培养法）5.1样品准备：取包装完好的待测化妆品样品2份，在无菌条件下各称取30g于灭菌试剂瓶中，备用。

5.2细菌悬浊液的制备：使用灭菌生理盐水制备测试菌株的菌悬液，浓度均为108cfu/mL。

取每种测试菌株菌悬液等体积混合，备用。

5.3真菌悬浊液的制备：使用灭菌生理盐水制备白色假丝酵母菌悬液，使用含0.05%吐温80的灭菌生理盐水制备巴西曲霉孢子悬液，浓度均为108cfu/mL。

取每种测试菌株菌悬液等体积混合，备用。

5.4菌液接种及样品检测：取上述称量好的化妆品（30g），分别加入0.3mL混合细菌悬浊液和0.3mL混合真菌悬浊液，用旋涡振荡器混合均匀，将样品于室温（22.5+2.5℃）保存。

分别于0、1、7、14、21、28天检测化妆品中的菌落数，即取1g或1mL待测样品加入到9mL改良的LETHEEN肉汤中，充分混匀稀释成适宜的倍数，检测样品中菌落数。

细菌培养推荐采用TSA培养基，36℃±1℃培养48h计数；白色假丝酵母和巴西曲霉培养推荐采用SDA培养基，28℃±2℃培养3-5天计数。

每次检测做两个平行样。